大肠菌群测定

这是一篇关于大肠菌群测定的思维导图.大肠菌群检测（coliform detection），大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽胞杆菌。食品检出大肠菌群，则表示该食品曾受粪便污染。结果报告为每100ml（g）样品中大肠菌群的最近似数（MPN）。

大肠菌群测定

• 检测前准备
  • 玻璃器皿包扎
    • MPN法；吸量管1支25ml4支1ml 3支试管装9ml生理盐水 9支装培养基 三角瓶1个300ml
    • 平板计数法；吸量管1支25ml 4支1ml 培养皿8个 三角瓶1个300ml
  • 稀释液
    • 生理盐水
      • 三角瓶300ml
      • 试管3支
  • 培养基制备
    • MPN法
      • 月桂基硫酸盐胰蛋白肉汤LST
      • 煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB
    • 平板计数法
      • 结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA
      • 煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB
  • 灭菌
    • 温热灭菌：高压蒸汽灭菌121摄氏度15分钟
    • 干热灭菌：干燥热空气灭菌160+170摄氏度1-2h
  • 仪器及其他用具
    • 高压蒸汽灭菌锅 电炉 电热恒温干燥器 电子秤
    • 报纸 手套 记号笔 称量纸 钥匙 棉塞 棉绳 洗耳球 试管架 玻璃棒 搪瓷缸 ph纸
• 样品检验
  • 操作前准备
    • 无菌环境
      • 超净工作台
      • 无菌间
    • 检验用具
      • 无菌；吸量管 培养皿 稀释液 三角瓶 试管 杜氏小管
  • 无菌操作
    • 样品稀释接种
      • 手部台面消毒
      • 做标记
      • 点燃酒精灯样品消毒
      • 稀释及接种
        • 10倍系列稀释
      • 倾注培养基
        • MPN法
          • 月桂基硫酸盐胰蛋白肉汤LST
          • 煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB
        • 平板计数法
          • 结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA
          • 煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB
  • 培养
    • 初发酵
      • 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL 产气者进行复发酵试验(证实试验)，如未产气则继续培养至，产气者进行复发酵试验。
        • MPN 法
          • 培养时间24-48h
        • 平板计数法
          • 培养时间18-24h
    • 复发酵
      • 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中
        • MPN 法
          • 培养时间48±2h
        • 平板计数法
          • 培养时间24-48h
• 结果报告
  • 结果报告
    • 选取范围15-150CFU
    • 计数方法
      • MPN法
        • MPN表
      • 平板计数法
        • 阴性管比例数乘以稀释倍数
    • 结果报告
      • MPN法
        • 按照证实实验的大肠菌群BGLB阴性管数，检索MPN表，报告样品中大肠菌群的MPN值
      • 平板计数法