血细胞计数板直接镜检计数的实验

血细胞又称“血球”，是存在于血液中的细胞，能随血液的流动遍及全身。以哺乳动物来说，血球细胞主要含下列三个种类： 红细胞：主要的功能是运送氧。 白细胞：主要扮演了免疫的角色。当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围后吞噬。 血小板：止血过程中起着重要作用。 血细胞约占血液容积的45%，包括红细胞、白细胞和血小板。在正常生理情况下，血细胞和血小板有一定的形态结构，并有相对稳定的数量。

血细胞计数板直接镜检计数

• 计数原理
  • 血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上有4条平行槽将载玻片分为3个平台，中间的平台较宽，其中间又被一短槽隔成两半，每边平台面上各有一个含9个大格的方格网，中间大格为计数室(图13-1A)。计数室的长和宽各为1 mm，中间平台比两边的平台低0.1 mm，故盖上盖玻片后计数室的容积为0.1 m㎡(图13-1B)。
  • 常见血细胞计数板的计数室有两种规格。一种是16×25型，称为麦氏血细胞计数板，共有16个中方格，每个中方格分为25个小方格(图13-1C)。另一种是25×16型，称为希里格式血细胞计数板，共有25个中方格，每个中方格又分成16个小方格(图13-1D)。
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  • 不管哪种规格的血细胞计数板其计数室均有400个小方格组成。应用血细胞计数板在显微镜下直接计算微生物细胞的数量，方法是先测定若干个中方格中的微生物细胞数量，再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞数量。
• 计数方法
  • 以计数室有25个中方格的计数板(25×16型)为例进行计算：设5个中方格中的总菌数为A，菌液的稀释度为B，则计数室的总菌数为(A/5)×25×B. 因为1 mL=1 000 mm’，计数室容积为0.1 mm，故： 
• 操作步骤
  • 制备菌悬液→加酵母菌菌悬液→显微镜观察→计数
    • 制备菌悬液：以细胞不重叠，以每小格的菌数可计数为易，在加样前需要混匀。
    • 加样品：将盖玻片放在计数室上，用吸管从盖玻片的一侧将菌液加入，菌液自行充满计数室后，拭去多余的菌液。静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
    • 显微镜观察计数：将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察。
    • 计数：记上不记下，记左不记右
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• 计数结果
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• 注意事项
  • 加样品：不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高；勿使产生气泡
  • 计数：为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对 沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。
  • 对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。
  • 测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后次风机吹干，放入盒内保存。
• 例子
  • 血球计数板计数的应用
    • Sysmex XT-1800i全自动血球计数仪检测后手工血涂片复检的应用及体会
      • 作者：郭玉荣 朱丽林
      • 期刊论文
      • 来自：中国知网搜索
    • 应用血球计数板检测灵芝破壁孢子粉破壁率的研究
      • 作者：尚晓冬,李明容,王南,谭琦
      • 期刊论文
      • 来自：中国知网搜索