导图社区 蛋白质含量测定实验
这是一篇关于蛋白质含量测定实验的思维导图,实验运用到了分光光度计法,考马斯亮蓝,紫外线等方法的总结。
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这是一篇关于《高性价比人生指南》思维导图,《高性价比人生指南》第五条“不要浪费钱”的核心,是帮你把“忘了在扣的钱”和“该拿没拿的钱”都找回来。作者给出的动作都很轻,但省下的都是实打实的现金。第一步是关掉所有自动续费,改为到期手动续。翻一遍支付宝、微信、苹果的扣款列表,大约二十分钟。高频在用的年付可以留,针对的是那些早就不用了、却还在每月扣的订阅。第二步是每年做一次个税汇算,专项附加扣除该填的填。年中换过工作、有子女教育或房贷房租没申报的,通常能退到钱,手机上十几分钟的事。还有一个很多人忽略的入口:公积金不只用于买房。租房、装修、交物业费都可以按规定提取,没必要让钱一直躺在账户里。操作层面,给话费宽带做一次“体检”,看实际用量决定是否降档;给打赏和游戏充值设上限,别靠意志力刹车。本条的底层逻辑不是“抠门”,而是消除信息差:你不需要降低生活质量,只需要知道哪些钱本就不该花、哪些权益本就没领。
这张思维导图是《高性价比人生指南》的第四条,围绕目标规划、任务管理、习惯养成、生活取舍给出大量实操建议。在目标与任务管理上,建议把计划写清楚,写明几点、在哪、遇到什么就做什么;开工前提前写下退出条件,懂得及时止损;做抉择时忽略沉没成本,只评估未来的投入与回报;估算工期参考过往同类实际经验,将大任务拆解成子任务再开工;没有外部截止日期的事情,主动给自己设定完成期限。会议管理提倡精简会议,会前拟定议程,优先文字沟通,必要时站会,减少无效开会。针对拖延问题,要重新看待拖延,不要一味自我否定;可以借助认知行为自助材料改善严重拖延;培养新习惯建议按月坚持,而不是只盯着 21 天。生活层面,可以参考自己的时薪,酌情外包家务;对短视频无目的刷看设置硬性时间上限;减少被动刷新闻,集中搜集需要的资讯;花时间学习软件快捷键,提升日常操作效率;租房选房优先考虑通勤,尽量缩短单程通勤时长;物品摆放上把常用东西就近摆放,减少行动阻力。整套内容偏向落地可行的时间管理方法,帮助减少时间损耗,提升日常做事的效率。无论总是容易拖延内耗,还是希望优化日常时间规划都可以拿来参考。
该思维导图从睡眠作息、工作专注力、情绪心理、思维认知多个维度给出生活建议。在专注力与作息睡眠方面,建议固定起床时间,保证每晚 7‑8 小时睡眠;下午两点之后尽量不再摄入咖啡因;工作时关闭非必要通知,集中处理消息,减少中途打断;睡前一小时远离电子屏幕;午后小憩控制在十分钟,不要久睡;每周工作时长不宜超过 49 小时,开放式办公可佩戴耳塞降低背景噪音干扰。心理思维层面,提醒警惕灾难化思维,不要反复纠结内耗糟心事,意识到内耗时主动动手做点别的事转移思绪;学会拒绝不合理请求,放下 “事情肯定会更糟” 的消极预判。情绪管理上,生气时先暂时离场,不要当场争执报复;情绪低落优先动起来、晒太阳、睡眠休息,必要时求助;生气时避免摔东西发泄,可以依靠正念、呼吸平复怒火;心里积压心事可以书写倾诉,但不要幻想写出来就能彻底治愈心结。认知上还提到不必总拿自己和别人对比,放下过度完美主义,很多时候并没有那么多人关注自己的失误,不要被情绪裹挟,分清事情的实际期限。整套内容意在减少无谓的精神消耗,保存自身精力。无论平时容易精神内耗,还是希望优化作息提升个人状态都可以参考这份指南。
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综合性实验:蛋白质定量测定
分光光度法及仪器线性分辨范围确定
实验目的
1、了解分光光度计的基夺结构和工作原理
2、学习使用分光光度计
3、学习标准曲线的制作
4、通过分光光度计线性分辨范围的测定, 加深时标准曲线作为定量依据的理解
分光光度计
基本结构
分光光度计就是能从混合光中将所需的一种单色光分离出来并测量其光强度变化的仪器。分光光度计图使用的波长范围泳同而分为紫外光、可见光、红外光以及万用(全波段)分光光度计等。无论哪一类分光光度计都由下列五个基本部件组成,即光源、分光系统、吸收池,检测放大系统、显示装置。
工作原理
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。 单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式: A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc 式中 A 为吸光度; I。为入射的单色光强度; I 为透射的单色光强度; T 为物质的透射率; k 为摩尔吸收系数; L 为被分析物质的光程,即比色皿的边长; c 为物质的浓度; 物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。
注意
当光线通过某种物质的溶液时,透过的光的强度减弱。因为有 一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收,只有一部分光可透过溶液。 入射光=反射光+分散光+吸收光+透过光 如果我们用组成此溶液的溶剂作为“空白去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失 则入射光=吸收光+透过光
实验操作
1.取7支试管按下表操作,绘制标准曲线2.分光光度计线性分辨范围 用分光光度计在540nm波长下以空白溶液(0号管)调零分别测定标准溶液各管的0.D540,然后以O.D540为纵坐标,蛋白质含量为横坐标,绘制蛋白质的双缩脲反应的蛋白质与光密度的关系曲线,确定分光光度计的线性分辨范围浓度,制定标准曲线。分光先度计的线性范围与斜率因所用分光光度计的灵敏度及所用试剂、反应条件等的差异而不同。线性分辨范围的测定可判断方法的可靠性,可预测在测定操作过程中的误差大小,为调整实验条件等提供数据。
实验结果

 在实际测定中,若样品的读数超过曲线的直线范围,必须将样品进行适当的稀释,然后重新测定,最后将结果按稀释比例进行计算。
测定蛋白质含量
实验目的
(1)掌握双缩脲法定量测定蛋白质含量的原理和方法。
(2)掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质含量的原理和方法。
(3)掌握紫外吸收法定量测定蛋白质含量的原理和方法。
(4)比较三种定量测定方法的异同。
三种方法
双缩脲法
实验原理
在碱性溶液中,双缩脲(H2N -CO -NH-CO -NH2)与Cu2+作用形成紫红色的络合物,这一反应称双缩脲反应。具有两个或两个以上酰胺键的化合物都有双缩脲反应,因此蛋白质在碱性溶液中,也能与Cu2+形成紫红色络合物,颜色深浅与蛋白质浓度成正比而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用比色法测定蛋白质的浓度。 在一定条件下,未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应,并于540nm下比色,可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。测定范围为1~10mg蛋质。
实验试剂及器材
实验器材 (1) 容量瓶(2)试管、试管架(3)恒温水浴槽(4)吸量管(5)分光光度(6)电热套(7)锥形瓶(8)比色皿
实验试剂 (1)标准酪蛋白溶液(5mg/ml) 用0.05 mol/L NaOH溶液配制(2) 双缩脲试剂(3)蛋白质样品或蛋白质样品溶液
实验操作
取6支试管按下表操作,绘制标准曲线 1、标准曲线的绘制  2、样品测定 (1)蛋白质样品提取液的制备 准确称取0.15~0.160克蛋白质样品,加入30 ml的0.05 mol/L的NaOH溶液,放于热水浴中加热溶解,最后用 0.05 mol/L的NaOH溶液在50ml容量瓶中定容至刻度,混勿备用。 (2)样品0D值的测定 取出以上制备的蛋白质样品液1.0ml。操作同标准曲线,测定样品的0.D54o值,平行两份。 3、计算 从标准曲线上查出样品的蛋白质浓度,再根据挥品称重量和稀释倍数计算蛋白样品的蛋白质含量。
实验结果



考马斯亮蓝染色法
实验原理
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,属于染料结合法的一种考马斯亮蓝G -250 在游离状态下呈红色,当它与蛋白质结合后变为蓝色,存一定蛋白质浓度范图肉蛋白质色意结合物在595n波长下的光吸收符合比尔定律,故可用于蛋白质的定量分析。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合2min左右达到平衡。该反应非常灵敏,可测微克级蛋白质含量。
实验器材及试剂
试剂 (1) 考马斯亮蓝试剂(2) 标准蛋白质溶液
器材 (1)容量瓶(2)试管及试管架(3)恒温水浴槽(4)吸量管(5) 分光光度计(6)电热套(7)锥形瓶(8)比色皿
实验操作
1、标准曲线的制作 (1)取6支试管,按下表加入试剂(2)混匀,室温静置3min,以第1管为空白,于波长595nm处比色,测定0D值,以的OD值为纵坐标,各标准液浓度为横坐标作标曲线。 2、未知样品蛋白质含量的测定 (1 )蛋白质样品液制备:准确称取0.15~0.16克蛋白质样品,加入30 m l的0.05 mol/L 的NaOH溶液放于水浴中加热溶解用0.05 mol/L的NaOH溶液在50ml客量航中定客至刻度混习,取出0.5m l溶液于25m容量瓶中加入蒸馏水定容至刻度,混勿后备用。 (2)样品OD值的测定 取出以上制备的蛋白质样品液0.5 ml.操作同标准曲线,测定择品的0.D595值,平行两份。 3、计算 从标准曲线上查出样品蛋白质浓度,再根据样品称重量和稀释倍数计算蛋白质样品的蛋白质含量。
实验结果



紫外吸收法
实验原理
蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值(0.D280)与其含量呈正比关系,可用作定量测定。
实验试剂及器材
1、试剂 (1)样品蛋白溶液,准确称样品蛋白质,配制成一定浓度的溶液。 2、器材 (1)紫外分光光度计.(2)容量瓶(3)试管、试管架(4)吸量管(5)锥形瓶
实验步骤
取4支试管按下表操作2、未知挥品蛋白质含量的测定 (1) 蛋白质样品液制备:准确称取0.12~0.13克蛋白质样品,加入15 m l的0.05 m ol/L的NaOH溶液,放于水浴中加热溶解,用0.05 mol/L的NaOH溶液在25ml容量瓶中定客至刻度混勿,取出1.0ml溶液于试管中,加蒸馏水9.0ml混匀后备用。 (2)样品0D值的测定和计算 取出以上制备的蛋白质样品液3 ~4ml,倒入石英比色杯中,在280nm和260nm下测定样品的0.D值,再计算择品的蛋白质含量。
实验结果

计算方法 1.280nm与260nm的吸收差法 将待测蛋白质溶液适当稀释,在波长260nm和280nm处分别测出0.D值,然后利用280nm及260nm下的吸收差求出蛋白质的浓度 计算:蛋白质浓度 (mg/ml) =1.450 .D 280- 0.740 .D260 2、校正因子法 先计算出0.D280/0.D260的比值后,以下表中查出校正因子为“F”值,将“F”值代入,再由下述经验公式直接计算出该溶液的蛋白质浓度。蛋白质浓度(mg/ml) = Fx 11dX 0.D280X N式中,d为石英比色皿的厚度(cm) ; N为溶液的稀释倍数。

原因分析
导致结果相差较大的原因可能有 1.溶解样品蛋白是溶解不充分 2.定容过程中样品蛋白部分在烧杯里没洗涤干净 3.定容时未摇匀
思考题