组织学绪论

组织学是研究正常人体微细结构及其相关功能的学科，是医学科学中解剖学的一个分支。所谓微细结构是指在显微镜下才能清晰观察的结构。随着科学技术的发展，组织学的内容也在不断充实、更新和发展。

组织学绪论

• 概念
  • 研究人体微细结构及其机能关系的一门科学
• 组织细胞的种类
  • 上皮组织
  • 结缔组织
  • 肌组织
  • 神经组织
• 细胞是一切生物新陈代谢，生长发育，繁殖，分化的形态基础。
• 组织学的研究方法和技术
  • 普通光镜技术
    • 主要包括取材，固定，脱水，包埋，切片和染色等步骤。
    • 具体做法：1.从低到高浓度的酒精脱水，用二甲苯使之透明，石蜡包埋，切片机处理成5到十微米的组织切片。2.可以快速冰冻使之变硬制成冰冻切片，以保存蛋白质的活性。3.体液，血液，组织细胞可直接涂片。4.疏松结缔组织或肠系可直接撕成薄片，制成铺片。5.骨，牙等硬组织可将其磨成薄片，制成磨片。
    • 染色：常用的染色方法是苏木精和伊红染色<统称HE染色>。苏木精是碱性染料，可将核酸染成蓝紫色，伊红是酸性染料，可将碱性蛋白质成分染成粉红色。注意，对碱性染料亲和力较强的叫嗜碱性，以此类推。另外，如肥大细胞的细胞质内颗粒被甲苯胺蓝染成紫红色，称为异染性。用硝酸银染色染成黑色称为亲银性。加还原剂才能显色称为嗜银性。
    • 分辨率为0.2微米
  • 荧光显微技术
    • 以紫外线为光源，激发细胞，组织内的荧光物质或者荧光染料标记发出荧光。若观察物体没有自发荧光物质，也可以人为进行荧光物质标记。
  • 相差显微技术
    • 即倒置相差显微镜。可将活细胞内各种结构对光产生的不同折射——相位差，转换为明暗差别——振幅差。适用于观察培养中活细胞的形态结构。无需染色。注意，物镜在载物台的下方。
  • 激光共聚焦扫描显微镜
    • 实现了对组织细胞二维和三维的检测，可深入内部结构。
  • 透射电子显微镜技术
    • 简称TEM。用电子束替代可见光，电磁透镜替代光学透镜，分辨率达0.2纳米。可以观察到超微结构，因此又称为亚显微技术。
    • 由于电子穿透能力较弱，切片厚度一般为50~80纳米。制片流程也与光镜类似，用戊二醛和锇酸依次固定，脱水，树脂包埋，用超薄切片机切片贴于铜网上，再用重金属盐进行电子染色。电子密度越高的地方，图像越黑暗。
  • 扫描电子显微技术
    • 图像富有三维的特征，具体制片与透镜类似，但无需染色，只需将薄层碳和金属膜喷与其表面。
  • 糖类显示法
    • 最常用的显示蛋白多糖，糖蛋白或多糖的方法：过碘酸-希夫反应——简称PAS反应。与多糖或形成不溶于水的紫红色沉淀。
      • 酶对应相应底物水解，氧化而产生的反应物与捕获剂发生反应时，可形成有颜色的最终产物。
  • 酶类显示法
  • 脂类显示法
    • 组织块可用甲醛固定，冷冻切片。用油红O，尼罗蓝，苏丹类的脂溶性染料染色，使得脂类呈现相应染料的颜色。也可以用锇酸固定兼染色，脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇呈现黑色。
  • 核酸显示法
    • 显示DNA常用福尔根反应——Feulgen reaction。切片经过稀盐酸处理，再用Schiff试剂处理，生成紫红色产物。也可以甲基绿吡罗红（即派若宁）反应。
  • 免疫组织化学与免疫细胞化学技术
    • 主要是利用抗原和抗体特异性结合的原理，检测组织，细胞中抗原性物质存在和分布的一种技术。特异性强，敏感度高。注意，一次抗体法特异性较强，二次抗体法敏感度更高，一般现代实验室更倾向于使用二次抗体法。一般荧光标记用荧光显微镜观察——免疫荧光细胞化学术，若加入胶体金，铁蛋白则用电镜观察——免疫电镜技术。
  • 原位杂交术
    • 即放射性同位素标记核酸分子杂交组织化学技术。也可以用别的特殊物质经免疫组织化学技术处理核酸探针。常用的标记物是地高辛。
  • 体外培养与组织工程
    • 前者培养细胞，组织。注意，长期培养而成的细胞群称为细胞系，用细胞克隆或单细胞培养出的纯种细胞，称为细胞株。后者是对机体组织与器官的构建的技术。（5%的二氧化碳，95%空气。要有血清和抗生素。）
  • 组织和细胞的定量术
    • 显微分光光度术
      • 以物质分子对光的选择性吸收为基础，可以对显微镜下样本的化学物质进行定量分析。
    • 图像分析术
      • 即形态计量术，获取三维清晰图像，根据不同部位颜色的深浅。
    • 流式细胞术
      • 制出单细胞悬液，然后进行荧光染色或标记，继而快速通过激光照射分析区，将信号转变成电脉冲，获得有关细胞群体有关数据。
  • 组织芯片技术
    • 也称组织微阵列，将标本有序集成在固相载片上，通过组织学，分子生物学技术（如PCR)对标本组织进行检测。
• 组织的概念
  • 许多形态相似，功能相关的细胞，与细胞外基质形成的细胞群
• 细胞的概念：人体结构和功能的基本单位，是组织和器官的结构基础。
• 器官的概念：在胚胎早期发育由几种不同组织发育分化和有机结合形成，在机体内执行更高一级的特定生理活动。
• 系统的概念：由许多结构相似，功能相关的器官联合在一起构成。
• 发展简史
  • 英国虎克首先发现细胞——木栓组织，死细胞。
  • 德国学者施莱登和施旺先后指出细胞是一切植物和动物的结构，功能和发生的基本单位，创立了细胞学说。
  • 魏尔肖提出一切细胞都来源于先前存在的细胞。
• 细胞外基质的作用：由细胞产生，参与构成细胞生存的微环境，起支持，联系，营养和保护细胞的作用，对细胞的分化，运动，信息沟通也有重要影响。