实验目的
1、 了解温度对酶活性的影响,学会检测酶最适温度的方法。
2、了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响。
3学习检测激活剂和抑制剂影响酶促反门速度的原理和方法。
实验原理理
一、温度对酶活性的影响
一方面是温度升高,酶促反应速度加快。另一方面,温度升高,也将导致酶活性降低甚至丧失。
因此大多数酶都有一个最适温度(即酶促反应速度最快时的环境温度)酶的最适温度不是一个常数,它与作用时间长短有关。
人唾液中淀粉酶为-为淀粉酶, 在唾液腺细能为合成。在唾液淀粉酶的作用下,淀粉被水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖。 不同阶段的糊精遇碘有不同颜
色反应,分别呈现为:蓝色——紫色——褐色——红色——棕黄色(遇碘不显色)
(二)激活剂对酶反应的影响
在商促反应体系中, 加入激活剂可以加快反应速率。酶对激活剂具有一定的选择性。
(三)抑制剂对酶反应的影响抑制剂会降低酶反应的速率。
实验试剂和器材
1、实验器材
(1)恒温水浴锅(2)试管(3)烧杯(4)量简(5)玻璃棒(6)铁三角架(7)酒精灯(8)试管夹(8)试管架(9)秒表
2、实验试剂
(1)0.5%淀粉(2)0.3%氯化钠溶液(3)KI-12(4)1%NaCI(5) 1%CuS04(6) 1%硫酸钠,(7)0.1%淀粉溶液(8)唾液淀粉酶(9)碘溶液
实验内容
思考题
1、高温导致酶活性丧失的分子机理是什么?如何在酶的分离纯化中克服这种影响?
酶发挥作用的机理是酶本身由自己的催化活性基团,这些基团有着特定的空间结构,能够使底物嵌入从而发生相应反应。当在高温环境中酶的空间结构被破坏,但酶的空间结构是酶发挥功能所必须的, 所以此时, 底物不能与酶结合, 所以酶活性丧失。
所以在分离纯化过程中应注意:
(1)T一般在低温条件下进行(0-4℃),大多数酶在低温条件下更稳定。
(2)缓冲液的PH应为酶最稳定时的PH,在酶的最适PH时酶不易失活。
(3)在溶液中加入酶保护剂,减小酶失活的可能。
2哪些因素可以导致酶活性降低?
(1)温度: 当温度处于酶的最适温度时, 酶活性最高, 一旦温度低于或高于最适温度时酶活性都会降低。
激活剂和抑制剂对酶反应的影响
现象:加入试剂直至加热后试管中的溶液均为无色,在各加入一滴碘液后,氯化钠 号试管的颜色最浅,硫酸铜号试管的颜色最深。
4支试管颜色由深到浅的顺序为:硫酸铜,蒸馏水,硫酸钠,氯化钠。
实验结果分析:
蒸馏水试管中加入的是蒸馏水作为空白对照,硫酸钠和氯化钠试管颜色比蒸馏水浅,所以硫酸钠和
氯化钠试管中有激活剂。硫酸铜试管颜色比蒸馏水试管颜色深,所以硫酸铜试管中应该有抑制剂。硫酸铜
和硫酸钠都含有S042+, 但一个促进一个抑制,所以S042+对酶活性没有影响。则Cu2+为抑制剂,Na+为激活剂。硫酸铜和氯化钠都有Na+但颜色氯化钠较浅,因氯离子为激活剂。
温度对酶
活性的影响
现象:温5min
当试管各保后,相应试管中的溶液混合仍然为无色,加入碘液后,37℃环境下的试管溶液颜色最浅为棕黄色 0℃和70℃条件下的溶液为蓝黑色。
由实验现象可知 在37℃时溶液的颜色最浅,与另外两个温度相比37℃C即为唾液淀粉酶
的最适温度。当环境温度高于或低于最适温度时酶的活性都会降低。 因此, 0℃和70℃环境下的酶活性都低于37℃,在这两个温度下溶液中的淀粉没有被唾液淀粉酶分解,加入碘液后即为蓝黑色。