导图社区 实验诊断学第九章 临床常见病原体检测
实验诊断学第九章 临床常见病原体检测知识梳理，包括标本的采集运送、实验室评价和检查方法、病原体耐药性检测、临床感染常见病原体检测、病毒性肝炎检测等等。
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实验诊断学 第九章 临床常见病原体检测
第一节 标本的采集运送、实验室评价和检查方法
一，标本采集和运送
【特点】
1）正确的标本采集、储存和运送是保证检验结果准确的重要前提
2）所有标本的采集和运送应在无菌操作及防治污染的原则下进行，标本采集后应尽快送实验室并处理
3）标本采集总原则
a抗生素使用之前采集标本
b无菌操作
c无菌容器
d立即送检
（一）血液
1）正常人的血液是无菌的
2）以为菌血症、败血症和脓毒血症病人，一般在发热初期、寒战时或发热高峰期到来前0.5-1小时采集血培养标本，对已应用抗菌药物治疗者，应在下次用药前采集
3）采集部位：肘静脉穿刺采血
4）皮肤消毒三步法
消毒范围以穿刺点为中心，直径5cm
a70%乙醇擦拭皮肤30s
b1%-2%碘酊1分钟或0.5%碘伏1-1.5分钟
c70%乙醇擦拭皮肤30s
5）立即送检，室温保存
（二）尿液
1）采集尿液时更应注意无菌操作
2）采集方法
a中段尿采集法
b导尿法
c膀胱穿刺尿采集法
d24h尿沉渣
e留置导管尿
f膀胱穿刺尿采集法
3）尿液中注意不要加入防腐剂
（三）粪便
1）采集方法
a自然排便采集法
b直肠拭子法：排便困难或婴儿
c固体粪便：取脓、血、黏液
d液体粪便：取絮状物
2）对于传染性腹泻病人需送检三次（非同一天）粪便进行细菌培养
3）在病原学明确诊断后，为避免带菌病人传染他人，应在不同时间间隔期间至少有3次连续培养阴性才能出院
（四）呼吸道标本
I 上呼吸道标本
1）标本类型
a咽拭子
b鼻拭子
c鼻咽拭子
d鼻咽洗液
2）主要用于筛查：呼吸道病毒、肺炎支原体、溶血性链球菌等
II 下呼吸道标本
a自然咳痰法
2）合格的痰标本应在低配镜视野中鳞状上皮细胞≦10个、白细胞≧25个
（五）脑脊液与其他无菌体液
1）采集的脑脊液应立即保温送检或床边接种
（六）眼、耳部标本
（七）生殖道标本
（八）创伤、组织和脓肿标本
（九）血清
二，标本的实验室质量评估标准
1）基本信息
2）仔细核对标本采集时间和送检时间
3）检查送检容器是否完整，有破损或渗漏等情况，不予接收
4）标本储存、运送方式不当，不予接收
5）明显被污染的标本不予接收
6）标本量明显不足的标本，不予接收
7）同一天申请作同一实验的重复送检标本（血培养除外），不接收
8）对于烈性传染病标本的采集和运送应严格执行相关规定，要有完善的防护措施，按规定包裹及冷藏，并附有详细的采样及送检记录，由专人护送
三，检查方法
（一）直接显微镜检测
1）涂片染色显微镜检查
2）涂片不染色显微镜检查
3）荧光显微镜检查和免疫电镜检查
（二）病原体特异性抗原检测
（三）病原体核酸检测
（四）病原体的分离培养和鉴定
1）细菌和真菌感染性疾病病原体的分离培养
2）不能人工培养的病原体感染性疾病
（五）血清学试验
（六）细菌毒素检测
1）内毒素
2）外毒素
第二节 病原体耐药性检测
一，耐药性及其发生机制
（一）耐药病原体
1）目前临床感染的病原微生物以革兰阴性菌为主
2）细菌耐药性是细菌能抵抗药物作用，使药物不能达到预期的临床杀菌或抑菌效果
3）抗生素在耐药性形成中的作用
a抗生素的筛选作用
b抗生素的诱导作用
（二）耐药机制
1）细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统
2）产生灭活抗生素的水解酶和钝化酶等
3）细菌抗生素作用靶位的改变
4）细菌膜的改变和外排泵出系统
5）细菌生物膜（BF）的形成
二，检查项目、结果和临床应用
（一）药物敏感试验
I K-B纸片琼脂扩散法
1）方法：将含有定量抗菌药物的纸片贴在接种有测试菌的M-H琼脂平板上置35°C孵育16-18小时。用游标卡尺量取纸片周围透明抑菌圈的直径，抑菌圈的大小反映细菌对药物的敏感程度，抑菌圈越大越敏感
2）判读标准
a敏感（S）
b中介（I）
c耐药（R）
II 稀释法
1）稀释法所测得的某些抗菌药物抑制检测菌肉眼可见生长的最低浓度称为最小抑菌浓度（MIC）
III 浓度梯度纸条扩散法
IV 耐药筛选试验
第三节 临床感染常见病原体检测
一，流行病学和临床类型
二，检查项目和临床应用
第四节 病毒性肝炎检测
【病毒性感染】
病毒性肝炎主要有7型，即甲型（HA）、乙型（HB）、丙型（HC）、丁型（HD）、戊型（HE）、庚型（HG）、输血传播病毒肝炎
一，甲型肝炎病毒检测
【概念】
1）HAV属微小RNA病毒科
2）粪口途径传播
【检测方法】
甲型肝炎病毒抗体检测-ELISA法
【临床意义】
1）抗HAV-IgM
a甲肝病人在发病后2周抗HAV-IgM的阳性率为100%
b是早期诊断甲肝的特异性指标
2）抗HAV-IgA
3）抗HAV-IgG
a是获得免疫力的标志，提示既往感染
b可作为流行病学调查的指标
二，乙型肝炎病毒检测
1）HBV是一种嗜肝脱氧核糖核酸病毒
2）经血液传播
3）用于临床的病毒标志物有乙型肝炎病的表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）、乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）等
ELISA法、化学发光法
（一）乙肝六项检测
I HBsAg
是HBV Dane颗粒外层的脂蛋白囊膜
1）见于急性乙肝的潜伏期
2）发病后3个月不转阴，则易发展为慢性乙型肝炎或肝硬化
3）常被用来作为传染性标志之一
II 抗-HBs
是保护性抗体，可阻止HBV穿过细胞膜进入新的肝细胞
1）一般在发病后3-6个月才出现，可持续多年
2）提示机体对乙肝病毒有一定程度的免疫力
3）注射过乙型肝炎疫苗或抗-HBs免疫球蛋白者可呈现阳性反应
III HBeAg
为HBV核心颗粒中的一种可溶性蛋白质，具有抗原性，与HBV有伴随关系
1）阳性表明乙型肝炎处于活动期，并有较强的传染性
2）孕妇阳性可引起垂直传播，致病率90%
3）HBeAg持续阳性，表明肝细胞损害较重，且可转为慢性乙型肝炎或肝硬化
IV 抗-HBe
常继HBeAg后出现于血液中
1）阳性表示大部分乙肝病毒被消除，复制减少，传染性减低，但并非无传染性
2）阳性可见于慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌
3）HBeAg与抗-HBe均阳性，且ALT升高时可进展为原发性肝癌
V 抗-HBc
抗-HBc IgM是血清中出现最早的HBV特异性抗体；抗-HBc总抗体主要反映的是抗-HBc IgG
1）抗-Hbc比HBsAg更敏感，可作为HBsAg阴性的HBV感染的敏感指标
VI HBcAg
是HBV的核心蛋白，往往与核酸在一起，具有传染性
1）阳性提示病人血清中有感染性的HBV存在，含量较多表示复制活跃，传染性强，预后较差
（二）乙型肝炎病毒表面抗原蛋白前S1和前S1抗体测定
（三）乙型肝炎病毒表面抗原蛋白前S1和前S2抗体测定
（四）乙型肝炎病毒DNA测定
HBV-DNA是HBV的基因物质，也是乙型肝炎的直接诊断证据
荧光定量PCR
【参考值】
阴性
1）诊断乙型肝炎的直接证据
2）表明HBV复制并有传染性
3）用于抗HBV治疗的疗效观察
（五）乙型感染病毒YMDD变异测定
三，丙型肝炎病毒检测
1）单链正股RNA病毒
（一）丙型肝炎病毒RNA测定
1）丙型肝炎的直接诊断证据
2）提示HCV复制活跃，传染性强
3）用于抗HCV治疗的疗效观察
（二）丙型肝炎病毒抗体测定
ELISA法
1）抗-HCV IgM抗体：主要用于早期诊断、持续阳性常可作为转为慢性肝炎的指标
2）抗-HCV IgG抗体：阳性表明已有HCV感染但不能作为感染的早期指标
四，丁型肝炎病毒检测
1）HDV是一种缺陷型病毒，是HBV的共生体，其外壳是HBsAg，需有HBV的存在才能复制和传播
（一）丁型肝炎病毒抗原测定
HDVAg和HBsAg同时阳性，表示丁型和乙型肝炎病毒同时感染，病人可迅速发展为慢性或急性重症肝炎
（二）丁型肝炎病毒抗体测定
1）抗-HDV IgM：出现较早，可用于丁型肝炎早期诊断
2）抗-HDV IgG：阳性只能在HbsAG阳性的血清中测得，是诊断丁型肝炎的可靠指标
（三）丁型肝炎病毒RNA测定
RT-PCR法阴性
1）阳性是HDV感染的直接证据
2）用于抗HDV治疗的疗效观察
五，戊型肝炎病毒检测
1）无包膜、单链RNA病毒
2）经粪口途径传播
1）抗-HEV IgM：可作为急性感染的诊断指标
2）抗-HEV IgG：提示既往感染
3）HEV RNA：是HEV感染的直接证据
六，庚型肝炎病毒检测
2）易与HCV合并感染
3）经血液传播
1）抗-HGV：阳性表示曾感染过HGV
2）HGV RNA：阳性表明有HGV存在
七，输血传播病毒（TTV病毒）检测
第五节 性传播疾病病原体检测
第六节 医院感染常见病原体检查
1）医院感染：是指住院病人在医院内获得的感染，包括在住院期间发生的感染和在医院内获得出院后发生的感染，但不包括入院前已开始或入院时已处于潜伏期的感染
2）医院感染情况
a无明确潜伏期，入院48小时后发生的感染；有明确潜伏期，自入院时起超过平均潜伏期后发生的感染
b直接与上次住院有关的感染
c在原有感染基础上出现其他部位新的感染，或在原感染已知病原体基础上又分离出新的病原体的感染
d新生儿在分娩过程中和产后获得的感染
e由于诊疗措施激活的潜在性感染
f医务人员在医院工作期间获得的感染
3）不属于医院感染情况
a皮肤黏膜开放性伤口只有细菌定植而无炎症表现
b由于创伤或非生物性因子刺激而产生的炎症表现
c新生儿经胎盘获得的感染
d病人原有的慢性感染在医院内急性发作
（一）流行病学
1）病原学
2）感染源
（二）常见临床类型
1）下呼吸道感染
2）尿路感染
3）手术切口感染
4）胃肠道感染
5）血液感染
6）皮肤和软组织感染
