高中 生物 选修一 蛋白的提纯与分离必考点（修改）

高中 生物 选修一 蛋白的提纯与分离必考点（修改）

Pro提取分离

• 蛋白特性
  • 分子形大
  • 所带电荷性质和多少
  • 溶解度
  • 吸附性质
  • 对其他分子亲和力
• 电泳
  • 带电粒子、电场、迁移
  • 利用
    • 带电性质差异
    • 分子大小、形状
  • 方法
    • 琼脂糖凝胶
    • 聚丙烯酰胺
      • SDS-～测分子量
      • 丙烯酰胺+交联剂N
      • 迁移率
        • 净电荷
        • 分子大小
• 凝胶色谱 分配色谱
  • 相对分子质量大小
  • 微小多孔球体
    • 紧密
    • 多糖类
      • 葡聚糖
      • 琼脂
  • 分离原因
    • 多贯穿通道
    • M小进凝胶内部
      • S长
      • v慢
    • M大外部
      • S 短
      • v快
  • 操 作
    • 制作
      • 尼龙网纱管
    • 装填
      • 计算凝胶量
        • 溶胀
      • 轻敲
        • 均匀
          • 气泡 重装
      • 连接缓冲液、洗脱
    • 加入 洗脱
      • 打开下端流出口
        • 缓平齐凝胶面
      • 加入、渗入、完全进入凝层
      • 关闭～
      • 加入缓冲 （PH=7）
        • 红色区带 均匀一致移动
• 纯化 纯度鉴定
• 样品处理 与粗分离
  • 红细胞洗涤
    • 去除杂pro
    • 低速短时间
      • 500r/min 2min
    • 吸黄；五倍盐水
      • 搅拌 10min
    • 上清液不黄
  • 血红pro释放
    • 加水原V
    • 40%V甲苯
      • 搅拌10min
    • cell破裂，释放～
  • 分离 血红pro 溶液
    • 离心
      • 2000r/min 10min
    • 4层
      • 无色透明甲苯
      • 脂溶性沉淀
        • 滤纸
      • 红透液体（血 红pro水溶液）
        • 静置
      • 其他杂质暗红色沉淀物
  • 透析
    • 20mmol/L磷酸缓冲液、12h
    • 硝酸纤维素 （玻璃纸）
    • 去除分子量小杂质
    • OR 更换缓冲液
• 缓冲
  • 一定范围
  • 抵制外界酸碱
  • 维持不变
• 血红蛋白
  • 4肽链=2α+2β 1链绕1亚铁血红素集基团
  • 脊椎、红细胞、主要（90%）
  • 运输O2、CO2（1：1）
• G-交联、膨胀程度、 分离范围 75-凝胶得水值 1g 7.5g水
• 洗脱液流干 露出凝胶颗粒 重装
• 气泡重装 搅乱pro洗脱次序， 降低分离效果
• 加速凝胶膨胀 沸水浴1～2h 节约时间+除微排空气
• 离心v高、t长 白一同沉淀
• 洗涤少 无法除血浆pro
• 抗凝血剂柠檬酸钠
• 消除；pro完全变性； 结果：单肽链分子量； 迁取决于：分子大小