导图社区 血红蛋白的提取与分离
高中生物选修一专题四课题3血红蛋白的提取和分离,血红蛋白英文缩写为HGB或Hb。血红蛋白是红细胞内运输氧的特殊蛋白质,是使血液呈红色的蛋白,由珠蛋白和血红素组成,其珠蛋白部分是由两对不同的珠蛋白链(α链和β链)组成的四聚体。更多干货内容赶快收藏起来慢慢看吧!
微生物包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体,它个体微小,与人类关系密切。本图介绍了微生物的培养与应用的内容,分别是微生物的纯化、菌落计数、菌种分离、菌种保藏、无菌技术、培养基。本思维导图是对生物选修一微生物的培养与应用(土壤中分解尿素的细菌的分离与计数)的主要内容梳理,喜欢的小伙伴可以点个赞哦!
果胶酶是指分解植物主要成分—果胶质的酶类。果胶酶广泛分布于高等植物和微生物中,根据其作用底物的不同。又可分为三类。
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英语词性
生物必修一
血红蛋白的提取与分离
凝胶色谱法
依据:相对分子质量
相对分子质量大,路程较短,速度较快
相对分子质量小,路程较长,速度较慢
凝胶
由多糖类化合物构成
葡聚糖
琼脂糖
缓冲溶液
作用
抵制外界酸碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变
模拟生物体内的过程
通常由1-2滴缓冲剂配置
电泳
带电粒子在电场作用下发生迁移的过程
作用;
测蛋白质分子量
蛋白质鉴别
分离多肽
影响因素
分子带电性质的差异
分子本身大小,形状
=一般,带电量越多,质量越小,分子速度越大
分类
琼脂糖凝胶电泳
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
测定结果只是单条肽链分子量
电泳迁移率完全决定于分子大小
步骤
样品处理
红细胞洗涤
目的
去除杂蛋白
低速短时间离心
分离血浆和血红蛋白
加入五倍体积的生理盐水
上述过程重复三次直到上清液不在出现黄色
注意
洗涤次数过少,无法除去杂蛋白
离心次数过高,时间过长
白细胞会一同沉淀
血红蛋白的释放
加蒸馏水
吸水胀破
加入甲苯
溶解细胞膜
置于磁力搅拌器充分搅拌10分钟
分离血红蛋白溶液
2000r/min的速度离心10min
分为四层(从上到下)
无色透明甲苯层
脂溶性物质沉淀层
血红蛋白水溶液
其他杂质的暗红色沉淀物
已经附在试管底部倒不出来
滤纸过滤
除脂溶性沉淀层
分液漏斗静止
分出下层红色透明溶液
粗分离
透析
除小分子物质
放入pH为7的磷酸缓冲液
纯化
凝胶色谱柱制作
凝胶色谱柱装填
凝胶吸水后体积会变大,使用前放在洗脱液里膨胀
沸水浴加热
节约时间
除去微生物,排除空气
不能有气泡
装填完后立即连接缓冲液洗脱瓶
样品的加入与洗脱
红色取代均匀移动,色谱柱制作成功
每ml收集一管,连续收集
纯度鉴定
血红蛋白
血液
血浆+血细胞
两分子肽链构成
可携带一分子氧和二氧化碳
本次实验选择哺乳动物的成熟红细胞