DNA 的粗提取与鉴定

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DNA 的粗提取与鉴定

• 思路
  • DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取
• 原理
  • 鉴定
    • DNA 遇二苯胺试剂会呈现蓝色
  • 提取
    • DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精
    • DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。
• 实验(以洋葱为例)
  • 实验材料用具
    • 选材
      • DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。
    • 试剂及其作用
      • ①研磨液、蒸馏水
      • ②体积分数为95%的酒精
        • 析出DNA
      • ③2 mol/L的NaCl溶液
        • 溶解DNA
      • ④二苯胺试剂
        • 鉴定DNA
          • 注意：要现配现用
  • 实验步骤
    • 取材和研磨
      • 称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
    • 过滤或离心取上清液
      • 方法
        • 在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液
        • 可以直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液放入烧杯中。
    • 预冷酒精析出DNA并收集DNA
      • 方法
        • 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min（溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA）
          • 注意：玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分
        • 将溶液倒入塑料离心管中，在10000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干
    • NaCl溶液溶解DNA并鉴定
      • 取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL
      • 将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中
      • 向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂
      • 混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min
      • 待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化
  • 结果
    • 加入沉淀物或丝状物的试管中溶液变成蓝色
      • 原因
        • DNA 遇二苯胺试剂会呈现蓝色