细菌生化鉴定技术

这是一篇关于细菌生化鉴定技术的思维导图，主要内容包括：碳源利用试验，酶类试验。每种试验都详细描述了其原理、试验方法、结果判断以及应用。

细菌生化鉴定技术

• 碳源利用试验
  • 枸橼酸盐利用试验
    • 原理：细菌可以利用培养基中底物枸橼酸盐（碳源），铵盐（氮源）产氨（使培养基变碱),培养基由淡绿色变为深蓝色
    • 培养基：枸橼酸盐斜面培养基
    • 指示剂：溴麝香草酚蓝
    • 方法：将待测菌接种于培养基，35℃1--4天，观察结果
    • 结果：1.阳性--淡绿变深蓝色2.阴性--不变色
    • 应用：肠杆菌科细菌属之间的鉴定 （沙门氏菌属，克雷伯菌属，枸橼酸杆菌属--阳性）（埃希氏菌属，志贺氏菌属--阴性）
  • 子主题
• 酶类试验
  • 触酶试验
    • 过氧化氢酶试验
    • 原理：细菌具有触酶，能催化底物过氧化氢生成水和新生态氧，形成氧分子出现气泡
    • 试剂：3%过氧化氢溶液
    • 方法：1.玻片法：取待检菌少许，置于干净玻片上，滴加3%过氧化氢试剂1--2滴，观察结果 2.试管法
    • 结果：1.阳性--产生大量气泡2.阴性--不产生气泡
    • 应用：革兰氏阳性球菌的初步鉴定 （葡萄球菌属，微球菌--阳性） （链球菌属--阴性）
  • 氧化酶试验
    • 细胞色素氧化酶试验
    • 原理：细菌具有氧化酶（细胞色素氧化酶），能将二甲基对苯二胺||四甲基对苯二胺氧化生成红色醌类化合物
    • 试剂：氧化酶试剂（二甲基对苯二胺||四甲基对苯二胺）
    • 方法：1.滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾少许菌落，然后滴加试剂 2.试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌落涂上 3.菌落法：直接滴加试剂于被检菌落上
    • 结果：1.阳性--立即出现红色-深红色-深紫色2.阴性--无
    • 应用：肠杆菌科（阴性）细菌与假单胞菌（阳性）的鉴别，肠杆菌科（阴性）与非发酵科（阳性）鉴别 （奈瑟菌属，莫拉菌属--阳性）
  • 凝固酶试验
    • 原理：金黄色葡萄球菌能产生凝固酶（使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白） 1.结合凝固酶：结合在细菌细胞壁上（玻片法） 2.游离凝固酶：分泌到菌体外（试管法）
    • 方法：1.玻片法：取未稀释血浆和生理盐水各一滴置于载玻片两侧，挑取金黄色葡萄球菌与他们混合观察结果 2.试管法：取3支洁净试管各加入1∶4稀释的新鲜血浆，一支加入0.5ml待检菌的肉汤培养物，另两只分别加入0.5ml凝固酶阳性和凝固酶阴性培养（做对照）37℃水浴箱1--4h观察结果
    • 结果：1.玻片法：阳性--菌液聚集成团块或颗粒状 (纤维蛋白包裹细菌) 阴性--生理盐水中无自凝，菌液呈均匀混浊状态 2.试管法：阳性--血浆凝固成胶冻状 阴性--血浆能流动不凝固
    • 应用：鉴别金黄色葡萄球菌（阳性）致病性的重要指标
  • DNA酶试验
    • 原理：细菌产生DNA酶，能分解培养基底物中DNA，水解成寡核苷酸链（溶于酸），菌落周围形成透明环
    • 培养基：0.2%DNA琼脂平板
    • 试剂：盐酸
    • 方法：将被检菌接种到平板上，35℃培养18--24h，用1mol/L盐酸覆盖琼脂板
    • 结果：1.阳性--菌落周围有透环明2.阴性--无透明环
    • 应用：鉴别细菌 （葡萄球菌，沙雷菌，变形杆菌--阳性）
  • 硝酸盐还原试验
    • 原理：细菌可以还原硝酸盐为亚硝酸盐，与醋酸作用生成亚硝酸，与对氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，再与α-萘胺结合生成N-α萘胺偶氮苯磺酸（红色化合物）
    • 培养基：硝酸盐培养基
    • 试剂：甲液（对氨基苯磺酸）乙液（α-萘胺醋酸溶液）
    • 方法：将被检菌接种于培养基，35℃18--24h，（看结果前加试剂）加入0.1mol甲，乙混合液摇匀观察结果
    • 结果：1.阳性--红色 2.阴性--淡黄色 无颜色（加入锌粉检查硝酸盐是否被还原）： 1.阳性--加入锌粉后无色 2.阴性--加入锌粉后变红
    • 应用：肠杆菌科细菌，假单胞菌，厌氧菌鉴定 （肠杆菌科，铜绿假单胞菌，嗜麦芽窄食单胞菌，韦荣球菌--阳性）
  • 胆汁溶菌试验
    • 原理：肺炎链球菌可以产生自溶酶，胆汁||胆盐促使自溶酶活化（加速细菌的自溶速度）
    • 试剂：10%去氧胆酸钠，纯牛胆汁
    • 方法：1.平板法（血平板）：取一接种环试剂，滴加到被测菌落上，置于35℃水浴，30min观察结果 2.试管法：取2支含0.9ml被检菌液，分别加入试剂和生理盐水（对照管）0.1ml，摇匀后置于35℃水浴10--30min观察结果
    • 结果：1.平板法：阳性--菌落消失 阴性--无消失2.试管法：阳性--菌液变透明 阴性--菌液仍混浊
    • 应用：肺炎链球菌（阳性）（草绿色溶血环，α溶血，不完全溶血） 甲型链球菌（阴性）（都是革兰氏阳性菌）
  • CAMP试验
    • 原理：B群链球菌能产生CAMP因子，可促进金黄色葡萄球菌β溶血素的活性
    • 培养基：血平板
    • 方法：先将产生β-溶血素的金黄色葡萄球菌在平板中央划种一条直线，3mm出垂直划一短线，设阴性阳性对照35℃培养18--24h后观察
    • 结果：1.阳性--接种线之间有一个箭头状透明溶血区2.阴性--无溶血区
    • 应用：链球菌属的鉴定 （B群链球菌--阳性 其他链球菌--阴性）