ELISA

这是一篇关于免疫学基本操作酶联免疫吸附实验的思维导图，酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。

ELISA-Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay（酶联免疫吸附试验）

• 历史
  • 1966放射免疫吸附技术
  • 1970酶标抗体免疫组化
  • 1971两位学者分别报道ELISA试验
• 定义
  • 抗原抗体特异性反应
  • 将酶与待测物连接—显色反应
  • 用于定量测定
• 原理
  • 抗原or抗体的固相化
  • 抗原or抗体的酶标记
  • 底物被酶催化成为有色底物，放大信号
• 3个必要试剂
  • 酶标记的抗原or抗体
    • 标记物如HRP
  • 酶作用的底物
    • 显色剂如TMB
  • 固相的抗原or抗体
    • 免疫吸附剂
• 实验常见问题及优化
  • 标准品无信号/低信号
  • 标曲很好，样本无信号/低信号
  • 整板都是阳性信号
  • 标曲正常，样本信号偏高“花板”
• 数据分析
• 步骤
  • 试剂配制和准备
  • 包被（室温过夜）
  • 洗涤
  • 封闭
  • 洗涤
  • 加样品（室温孵育2h）
  • 洗涤
  • 加检测抗体
  • 洗涤
  • 加HRP标记的链霉亲和素
  • 洗涤
  • 加底物
  • 加终止液
  • 检测
• 常用仪器和试剂
• 选择试剂盒
• 类型