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弓形虫相关研究课题
这份思维导图梳理刚地弓形虫相关研究课题《Convergent evolution of metabolic regulation governs redox adaptation in Toxoplasma》的完整实验思路，整体研究分为五大模块。研究首先利用高密度 CRISPR 筛选，经过 30+DIMs 筛选鉴定得到 TgPRO。随后开展 TgPRO 功能鉴定，结合结构分析点突变、RIP-seq 鉴定客户 mRNA、转录组与蛋白质组分析客户变化，明确 TgPRO 的分子功能。接着构建 TgPRO 缺失株，开展代谢表型检测，从铁摄取、TCA 循环、ETC、线粒体极性、NAD+/NADH 比例、碳利用等多个维度检测，借助 FAC 挽救、seahorse、TMRE、稳态代谢组学与 C13 示踪等技术，解析 TgPRO 缺失带来的代谢改变。之后探究氧气依赖的调控机制，设置常氧与低氧（1% 氧气）处理，通过聚类分析、ISCU mRNA 测定，证实低氧可减少 ROS 缓解 TgPRO 缺失表型，TgPRO 上调客户 mRNA 以应对高氧压力。最后探究机制与应用，研究 TgPRO 上调客户 mRNA 的调控方式，利用 ISCU 3'UTR 替换开展验证，同时发现 TgPRO 参与缓殖子的发育。整套方案从基因筛选、功能验证、代谢表型到环境调控与分子机制，构成完整的科研逻辑链。无论研读本课题的生物科研学生，或是梳理课题框架、撰写论文的病原生物学研究者，都可以借助这份导图理清研究脉络。
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