细胞生物学研究方法

这是一篇关于细胞生物学研究方法的思维导图，梳理了细胞形态结构的观察方法、细胞及其组分的分析方法等，结构型知识框架方便学习理解！

细胞生物学研究方法（一）

• 细胞形态结构的观察方法
  • 光学显微镜
    • 普通复式光学显微镜
      • 观察单细胞生物或体外培养细胞（需固定和包埋）
    • 相差显微镜和微分干涉显微镜
      • 观察活细胞显微结构，分辨率提高了一个数量级
      • 原理：利用相差通过干涉转为振幅差，使厚度的微小区别转化为明暗区别
    • 荧光显微镜
      • 对细胞内特异的蛋白质、核酸、糖类、脂质以及某些离子等组分进行定性定位
      • 原理：以荧光染料发出的荧光作为光源，照射至荧光分子使其产生荧光与灰暗背景形成强反差
    • 激光扫描共聚焦显微镜
      • 在荧光显微镜的基础上极大地提高了图像的分辨率
  • 电子显微镜
    • 根本区别
      • 以电子束作为光源
    • 分辨率
      • 可达0.2nm，但会受生物制样技术本身限制
    • 基本构造
      • 电子束照明系统
      • 成像系统
      • 真空系统
      • 记录系统
    • 制像技术
      • 超薄切片技术
        • 目的：使生物样品具备一定韧性和一定刚性，从而切成薄片以提高分辨率
        • 步骤
          • 1.固定
          • 2.包埋
          • 3.切片
          • 4.染色
      • 负染色技术
        • 目的：显示纯化细胞组分精细结构
      • 冷冻蚀刻技术
        • 观察膜横断截面上的蛋白质颗粒和膜表面形貌特征
      • 电镜三维重构与冷冻电镜技术
        • 分析难以形成三维晶体的大分子的三维结构
        • 原理：对不同角度的图片进行数学处理得到三维结构
      • 扫描电镜技术
        • 电子束激发样品表面发射电子，以电子多少判断样品表面立体结构
        • 利用二氧化碳临界点干燥法对样品进行干燥处理，防止样品表面变形
        • 观察前喷镀一层金箔，以提高导电能力
  • 扫描隧道显微镜
    • 利用隧道效应，通过样品与探针之间产生的隧道电流计算间距，从而刻画样品立体结构
    • 特点
      • 分辨率高
      • 工作环境无要求
      • 非破坏性检测
• 细胞及其组分的分析方法
  • 组分分离
    • 差速离心
      • 利用不同的离心速度分离不同质量与密度的亚细胞组分
    • 密度梯度离心
      • 速度沉降
        • 分离密度相近而大小不一的细胞组分
      • 等密度沉降
        • 分离不同密度的额细胞组分
  • 细胞成分显示
    • 利用显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合的特征，确定检测物质在细胞中的位置与相对含量
  • 特异蛋白的定位与定性
    • 免疫荧光技术
      • 分类
        • 直接免疫荧光技术
        • 间接免疫荧光技术
      • 步骤
        • 1.荧光抗体的制备
        • 2.标本的处理
        • 3.免疫染色
        • 免疫染色和观察记录
    • 免疫电镜技术
      • 在免疫荧光技术的基础上增加分辨率
      • 分类
        • 免疫铁蛋白技术（逐渐被遗弃）
        • 免疫酶标技术
        • 免疫胶体金技术
  • 特异核酸的定位与定性
    • 原位杂交技术
      • 用标记的核酸探针通过分子杂交确定特异核苷酸序列在染色体上或在细胞中的位置
  • 定量细胞化学分析与细胞分选技术
    • 流式细胞术
      • 定量测定某一细胞内的RNA、DNA或某一特异的标记蛋白的含量
      • 测定细胞群体中大分子成分含量不同的细胞的数量
      • 用于细胞的分选