褪黑激素思维导图

本图梳理了褪黑激素可以挽救体外受精小鼠后代受损的葡萄糖代谢，涵盖了六个板块，有需要的朋友赶快收藏下图了解吧！

在培养基中补充褪黑激素可以挽救体外受精小鼠后代受损的葡萄糖代谢

• 1. 在培养基中补充褪黑激素可以减少氧化应激，改善早期胚胎的发育
  • 0/10^-10/10^-8/10^-6 M 囊胚形成率
  • IVF/mIVF 2-cell ROS
  • IVF/mIVF Blast ROS
  • NC/IVF/mIVF mDNA copy number of blast
  • NC/IVF/mIVF blast cell number
• 2. mIVF可改善体外受精小鼠后代的胎儿生长和葡萄糖代谢
  • NC/IVF/mIVF E12.5 body length
  • NC/IVF/mIVF pup after birth body weight
  • 三组鼠粮/高脂饮食 的血糖水平
  • 三组鼠粮/高脂饮食 的呼吸交换比和能量消耗
• 3. mIVF可减少体外受精小鼠后代的肝脏脂肪浸润和转录组异常
  • 三组鼠粮/高脂饮食 的肝重
  • 三组肝组织切片
  • 三组转录组分析
  • 韦恩图筛选出候选基因Fbxl7，PCR检测三组表达量
• 4. Fbxl7通过增强RhoA泛素化调控胰岛素信号通路
  • 构建过表达Fbxl7重组质粒，WB检测胰岛素信号通路基因表达
  • 合成siRNA-Fbxl7下调Fbxl7基因在HepG2细胞中的表达，WB检测
  • 生物计量分析预测Fbxl7的下游靶基因，确定了RhoA和Rab31两个候选基因，通过上调下调Fbxl7，WB验证
  • IP检测了FBXL7和RHOA的结合
  • 在过表达Fbxl7的HepG2细胞中进行环己酰亚胺追踪(CHX)，在0、1、2和4小时检测RhoA的表达
  • 用蛋白酶体特异性抑制剂(MG132)和自噬抑制剂(3-MA)处理过表达Fbxl7的HepG2细胞，表明RhoA的转录后降解由泛素化介导
  • 泛素化IP实验验证Fbxl7通过增强RhoA泛素化抑制RhoA表达及其功能
• 5. Fbxl7受转录因子Foxa2的调控
  • 通过MOTIF分析和RNA-seq数据预测Fbxl7的上游转录因子，并鉴定出两个候选Foxa2和Sox12，PCR分析两种物质在不同组之间的表达
  • 分别将Foxa2过表达质粒(Foxa2- oe)和敲减质粒(si-Foxa2)转染293T细胞，进一步验证Foxa2对Fbxl7的调控作用
  • co-IP检测FOXA2- flag和FBXL7- gfp的结合
• 体外实验，验证Fbxl7在代谢中的调节机制
• 6. Fbxl7基因敲除或过表达改变了小鼠的糖耐量
  • 尾静脉注射重组腺相关病毒在NC小鼠和mIVF小鼠肝脏中特异性敲除(KO)Fbxl7基因，在IVF小鼠肝脏中过表达(OE)Fbxl7基因
    • 三组在处理前后与对照组的糖耐量比较
    • qPCR验证Fbxl7和RhoA在三组处理后在肝脏的表达情况
  • 体内实验，验证Fbxl7在体内的功能