细胞生物学研究方法思维导图

细胞生物学研究方法思维导图：细胞形态结构的观察方法、细胞及其组分的分析方法、细胞培养与细胞工程、细胞及生物大分子的动态变化等等。

细胞生物学研究方法

• 细胞形态结构的观察方法
  • 光学显微镜
    • 组成
      • 光学放大系统（目镜与物镜）
      • 照明系统（光源和聚光镜）
      • 镜架及样品调节系统
    • 分辨率
    • 样品制备
      • 取材、固定、包埋、切片、染色、观察
    • 活细胞：相差显微镜和微分干涉显微镜
    • 荧光显微镜
      • 定位研究
      • 样品制备
        • 免疫荧光技术
        • 荧光素直接标记技术
        • 绿色荧光蛋白(GFP)的基因与编码某种蛋白质的基因相融合表达
    • 激光扫描共焦显微镜
    • 双光子显微镜
    • 超高分辨率显微术
      • 全内反射荧光显微术
      • 基于单分子成像技术的PALM/STORM 方法
      • 4π 和STED 显微术
      • 结构照明显微术
  • 电子显微镜
    • 基本知识
      • 分辨率可达0.2 nm
      • 基本构造
        • 电子束照明系统 成像系统 真空系统 记录系统
    • 电镜制样技术
      • 超薄切片技术
        • 取材、固定、包埋、切片、染色、观察
      • 负染色技术
        • 样品未被染色
      • 冷冻蚀刻技术
        • 包括冰冻断裂与蚀刻复型两步
      • 电镜三维重构与低温电镜技术
      • 扫描电镜技术
        • CO2 临界点干燥法
        • 样品观察前喷镀一层金膜
        • 分辨本领一般仅为3 nm
  • 扫描隧道显微镜
• 细胞及其组分的分析方法
  • 用超离心技术分离细胞组分
    • 差速离心
    • 密度梯度离心
  • 特异蛋白抗原的定位与定性
    • 抗原-抗体特异结合
    • 常用技术
      • 免疫荧光
        • 直接
        • 间接
      • 免疫电镜
        • 免疫铁蛋白技术
        • 免疫酶标技术
        • 免疫胶体金技术
  • 细胞内特异核酸的定位与定性
    • 原位杂交
      • 光镜水平
        • 同位素标记或荧光素标记
      • 电镜水平
        • 生物素标记的探针与抗生物素抗体相连胶体标记结合
  • 细胞成份的分析与细胞分选技术
    • 流式细胞术
• 细胞培养与细胞工程
  • 细胞培养
    • 动物
      • 分为原代细胞和传代细胞
      • 贴壁培养和悬浮培养
    • 植物
      • 单倍体细胞培养
      • 原生质体培养
  • 细胞工程
    • 单克隆抗体
    • 细胞融合
      • 灭活的病毒 化学物质（如PEG） 电融合
    • 同核体
    • 异核体
    • 合核体
• 细胞及生物大分子的动态变化
  • 荧光漂白恢复技术
    • 运动速率
  • 酵母双杂交技术
    • 体内分析蛋白质－蛋白质相互作用
  • 荧光共振能量转移技术
    • 活细胞内两种蛋白质分子是否直接相互作用
  • 放射自显影技术
    • 两个主要步骤
      • 同位素标记的生物大分子前体的掺入
      • 细胞内同位素的显示
• 模式生物与功能基因组的研究
  • 模式生物
    • 个体较小，容易培养，操作简单，生长繁殖快
  • 功能基因组研究