脂肪干细胞通过促进线粒体自噬调节代谢稳态和延缓衰老

科研文献结构梳理，主要结构：F1:衰老鉴定；F2:能量代谢检测；F3:代谢组学分析；F4:组学分析定位功能；F5:功能的验证；F6:体内实验:关键基因编辑。

Adipose-derived stem cells regulate metabolic homeostasis and delay aging by promoting mitophagy

• F1：衰老鉴定
  • β-Gal
    • 拍照
    • 定量
  • γH2AX
    • 拍照
    • 定量
  • wb
    • P16
      • 拍照
      • 定量
    • P21
      • 拍照
      • 定量
    • P53
      • 拍照
      • 定量
    • Actin
      • 拍照
      • 定量
  • 细胞增值速度
    • 折线图
• F2:能量代谢检测
  • Seahorse XFe96 分析仪
    • 线粒体耗氧率（OCR)
      • oligomycin
        • 代表的是细胞的基础耗氧量，包括线粒体氧化磷酸化及质子漏耗氧。
          • 即质子在线粒体膜通过呼吸链形成电势能后，一部分质子回流可以通过ATP合酶形成ATP，将势能转化为ATP中的能量。一部分通过线粒体膜但是只是发生氧化，势能转化为热量，但是没有用于合成ATP。
            • 子主题
        • oligo是ATP合酶抑制剂，加入此药后减少的耗氧代表的是机体用于ATP合成的耗氧量，间接显示此时细胞的ATP产量。
      • FCCP
        • FCCP是一种解偶联剂,作为一种质子载体使得大量质子回流，大量耗氧，但是这种质子回流不能形成ATP,FCCP后耗氧的增加，代表线粒体的最大耗氧能力，间接显示最大的呼吸能力.
      • AntimycinA&Rotenone
        • 抗霉素A和寡霉素，二者是呼吸链抑制剂，完全阻止线粒体耗氧。
    • 细胞外酸化率(ECAR）：间接显示糖酵解能力
      • Glucose
        • 加入葡糖糖后代表的是此时细胞的糖酵解能力
      • oligomycin
        • 而加入oligo后，氧化磷酸化被抑制，此时细胞完全靠糖酵解供氧，此时产酸增加，增加值代表细胞的还具有的糖酵解能力即潜力，总的数值代表细胞的最大糖酵解能力
      • 2-DG
        • 此药之后的数值表明完全是由糖酵解之外的机理产酸所致的。
  • 量化结果
    • OCR
      • 呼吸
        • basal
          • Oligo添加后的数值
        • spare respiratory capacity
          • FCCP后数值-basal数值
      • 产能
        • procton leak
          • 抗霉素A后的数值
        • ATP产能
          • Oligo添加前后的数值差
• F3：代谢组学分析
  • 化合物分析
    • UHPLC-MS/MS
      • 测定化合物种类
    • 化合物差异分析
      • 聚类热图
        • 差异化合物（氨基酸、碳水化合物、脂质、核苷酸）：P3和P4；P4和co-P4
      • 韦恩图
        • 找出共同的差异的化合物：P3和P4；P4和co-P4
      • 功能注释分类饼图
        • vn重合差异化合物代谢物功能注释分离
• F4：组学分析定位功能
  • STITCH互作分析
    • 分析共同差异代谢化合物的蛋白质和基因相关的相互互作
  • KEGG通路富集
    • 分析除了代谢途径外是否还有别的途径高度相关
  • GO分析（CC、BP、MF）
• F5：功能的验证
  • WB
    • 检测线粒体标记蛋白并量化
      • Tom20
        • 线粒体膜蛋白
      • Tim23
        • 线粒体膜蛋白
      • HSP60
        • 胞质蛋白？
      • P62
  • 线粒体活性氧水平检测(ROS)
    • MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicato拍照
      • itoSOX Red Mitoc
    • 流式检测并量化
  • 线粒体膜电位
    • JC-1染色
    • 流式量化
  • 线粒体自噬验证
    • wb
      • p62
        • 与自噬负相关
    • IF
      • LAMP1与HSP60共标
        • LAMP1
          • 溶酶体膜标记蛋白
        • HSP60
          • 线粒体
• F6：体内实验：关键基因编辑
  • 小鼠模型构建
    • PolG Knockout
      • PolG:线粒体DNA的主要聚合酶，影响线粒体DNA稳定性，干扰线粒体DNA转录合成的蛋白质的表达，从而影响线粒体的稳态。
  • 小鼠模型
    • 生长曲线
    • 形态特征
    • wb及量化
      • Tom20
      • p62
    • 免疫组化
      • LC3
      • SA-β-Gal
• https://faseb.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1096/fj.202100332R