胞质、核蛋白提取

这是一篇关于胞质、核蛋白提取的思维导图，包含细胞收集、 胞质部分收集、 核部分收集等内容。

胞质、核蛋白提取

• 1. 细胞收集
  • 1.1.冰PBS清洗细胞 两次
  • 1.2.加入PBS/含EDTA的消化液收集细胞
    • 不建议用含胰酶的EDTA，避免其降解目标蛋白 thermo的说明书写的是trypsin-EDTA收获细胞
  • 1.3.台式离心机离心10s
    • 也有建议300-600g离心5min，然后再用冷PBS洗2-3次。
  • 1.4.弃上清
• 2. 胞质部分收集
  • 2.1预冷的0.1%NP40-PBS裂解沉淀（10cm dish 使用1mL，此时的沉淀是黄色的）
    • 裂解重悬过程可以将黄枪头末端减去约3mm以扩大开口。
  • 2.2 台式离心机离心10s
  • 2.3收上清（胞质部分）
    • 样品：Laemmli buffer 3:1，混匀煮1-4min
• 3. 核部分收集
  • 3.1 预冷的0.1%NP40-PBS重悬沉淀
  • 3.2 台式离心机离心10s
  • 3.3 弃上清，沉淀即为核颗粒（此时的核颗粒是白色的）
    • 1x Laemmli buffer （质：核重悬体积为5:1）重悬核颗粒，煮1-4min