动物细胞培养

系统学习动物细胞培养技术，这是从动物中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。

动物细胞培养

• 概念
  • 动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术
• 原理
  • 细胞增殖
  • 动物细胞培养是动物细胞工程的基础
• 动物细胞培养的条件
  • 营养条件
    • 合成培养基
      • 将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基
    • 成分
      • 有机物：糖类，AA,维生素等
      • 无机物：无机盐，水等
      • 天然成分：血清等
        • 血清中含有多种维持细胞代谢和生长的物质，如Pr、AA、未知的促细胞生长因子等
    • 一般使用液体培养基，也称为培养液
  • 无菌无毒环境
    • 对培养液和所有培养用具进行灭菌处理
    • 在无菌环境下进行操作
    • 定期更换培养液
      • 以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害
  • 温度，PH&渗透压
    • 适宜的温度
    • 适宜的PH
      • 哺乳动物细胞培养的温度多以 36.5±0.5℃为宜
    • 适宜的渗透压
      • 多数动物细胞生存的适宜 pH 为 7.2~7.4
  • 气体环境
    • 95%空气&5%的CO2的CO2培养箱中
      • O2 作用：细胞代谢所必需的 CO2 作用：维持培养液的 pH
    • 进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶
• 过程
  • • 1. 选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 原因：细胞分化程度低，分裂能力强，容易培养 2. 分散成单个细胞：机械的方法（剪碎）、用胰蛋白酶、 胶原蛋白酶等处理一段时间 ①分散成单个细胞原因？ A.成块组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长与 增殖； B.利于与培养液充分接触，保证O2与营养供 应和代谢物及时排出。 ②胰蛋白酶作用？ 将动物组织细胞间的蛋白质成分酶解，使细胞分散开， 获得单个细胞 ③胃蛋白酶可以吗？ ④注意：细胞膜含有蛋白质，长时间用胰蛋白酶处理会损伤细胞，要控制好时间
  • 体外培养的动物细胞生长类型
    • ①悬浮生长类：能够悬浮在培养液中生长增殖 限制因素：会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻
    • ②贴壁生长类：大多数体外培养的细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁
    • 限制因素：除受密度、有害代谢物、营养物质影响外，还会发生接触抑制现象 接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖
• 总结