动物体细胞核移植和克隆动物

将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育为动物个体的技术，成为动物细胞核移植技术。

动物体细胞核移植和克隆动物

• 概念
  • 将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育为动物个体的技术，成为动物细胞核移植技术
• 原理
  • 动物细胞核的全能性
  • 类型
    • ①胚胎细胞核移植：胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易
    • ②体细胞核移植：动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难
    • 动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎
• 过程
  • 具体操作
    • ①取供体细胞进行培养 一般选用传代 10 代以内的细胞
      • 保持正常的二倍体核型，保证了供体细胞正常的遗传基础
    • ②采集卵母细胞，体外培养至 MII 中期
      • 原因：卵母细胞的细胞质内存在激发细胞核全能性表达的物质 卵母细胞体积大，便于操作 卵母细胞内卵黄多，营养物质丰富
    • ③卵母细胞去核——其实是“纺锤体—染色体复合物”
      • 去核原因：为了使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞
        • 梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理——没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的 DNA 变性—对卵母细胞伤害小并达到去核的目的
      • 去核方法：显微操作去核法
    • ④供体细胞注入去核卵母细胞，电融合法使两细胞融合，使供体核进入卵母细胞，形成重构胚
      • 整个注入的原因：保证供核不被破坏，操作也更方便
    • ⑤激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程
      • 激活方法：
        • 物理
        • 化学方法
          • 如电刺激、Ca2+ 载体、乙醇和蛋白酶合成抑制剂等
    • ⑥形成早期胚胎，将胚胎移入受体（代孕）母牛体内——生出与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛
  • 亲本分析
    • ①克隆动物细胞核基因来自体细胞核供体——克隆动物的性状与体细胞核供体基本相同
    • ②克隆动物细胞质基因来自卵母细胞细胞质供体——克隆动物的性状与卵母细胞细胞质供体部分相同
    • ③代孕母体没有为克隆动物提供遗传物质——克隆动物的性状与代孕母体没有直接关系
• 总结