仪器分析

仪器分析高效液相色谱思维导图，包括基本原理与主要分离分离类型、液相色谱固定相与流动相、高效液相色谱仪三部分内容。

高效液相色谱

• 概述
  • 特点：四高
    • 高压、高速（一般都小于1h）、高效、高灵敏度
  • HPLC与GC的对比
    • 影响柱效的因素相同
    • 有很大互补性
    • 流动相、分析对象、温度不同
• 基本原理与主要分离分离类型
  • 液固吸附色谱法
    • 适用于分离相等分子质量中等的油溶性试样，对具有不同官能团的化合物和异构体有高选择性
    • 基本原理：吸附的能力不同进行分离
      • 吸附常数Kad
    • 等温吸附线色谱峰峰形：拖尾峰（凸性等温吸附线）
  • 液液分配色谱法
    • 适用于各种样品类型的分离和分析
    • 基本原理：物质在两种互不相溶的液体中溶解度不同而具有不同的分配系数
    • 色谱类型
      • 正相液相色谱
        • 固定相为亲水性基团-NH2
        • 流动相为疏水性溶剂苯
        • 被分离组分按极性由低到高顺序流出
        • 用于分离甾醇类，脂肪酸等
      • 反相液相色谱
        • 固定相为疏水类基团-C8、-C18
        • 流动相为强极性溶剂水、甲醇等
        • 被分离组分按极性由高到低流出
        • 应用最普遍
  • 离子对色谱
    • 分离强极性有机酸和有机碱的好方法
    • 反相离子对色谱分离
      • 平衡常数Kxy
      • 分配系数Dx
    • 离子对的容量因子k
    • 组分的保留时间tR
    • 对离子的浓度是控制反相离子对色谱溶质保留值的主要因素
  • 离子交换色谱法
    • 分离原理：离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的被测离子进行可逆交换，由于被测离子在交换树脂上具有不同的亲和力而被分离。
    • 固定相：阴阳离子交换树脂
    • 流动相
      • 阴离子交换树脂为固定相时：采用碱性水溶液
      • 阳离子交换树脂为固定相时：采用酸性水溶液
  • 离子色谱法
    • 类型
      • 双柱(抑制型）离子色谱：降低北境电导，提高检测灵敏度
      • 单柱型（非抑制型）离子色谱：不需要抑制住。 洗脱液的选择很重要
    • 应用：无机、有机阴离子、金属阳离子、糖类、氨基酸及核酸等
  • 空间排阻色谱法
    • 原理：按分子大小顺序进行分离。
    • 分配系数K
    • 保留体积位于Vm~Vm+Vp
    • 特点
      • 保留时间时分子尺寸的函数
      • 可采用灵敏度较低的检测器
      • 柱寿命长
      • 相对分子质量差别必须大于10%才能得以分离
  • 亲和色谱
• 液相色谱固定相与流动相
  • 固定相
    • 类型
      • 全多孔型
      • 表面多孔型
      • 化学键合固定相
        • 特点：传质快、寿命长、选择性好、有利于梯度洗脱
    • 液固吸附色谱法固定相
    • 液液分配及离子对色谱法固定相
      • C18 首选色谱柱
    • 离子交换色谱法固定相
    • 空间排阻色谱法固定相
    • 手性固定相
  • 流动相
    • 特性
      • 正相：流动相极性小于固定相的极性，极性柱也称正相柱
      • 反相：流动相极性大于固定相极性，非极性相也称反相柱
• 高效液相色谱仪
  • 高压输液系统
    • 高压输液泵
    • 脱气系统
    • 洗脱系统
  • 进样系统
  • 高效分离柱
  • 检测器
    • 紫外检测器(最常用）
    • 光电二极管阵列检测器
    • 示差折光检测器
      • 不能用于梯度洗脱
    • 荧光检测器