核酸

DNA双螺旋（Waston-Crick提出）( B型)：由两条反向平行的多核苷酸链，彼此盘绕形成一个右手的双螺旋。

核酸

• 基本组成单位
  • 核苷酸
    • 核苷酸之间以3’5’磷酸二酯键相连，方向5’到3’
    • 磷酸
    • 碱基
      • 嘌呤碱基
        • 鸟嘌呤（G）
        • 腺嘌呤(A)
      • 嘧啶碱基
        • 胞嘧啶(C)
        • 尿嘧啶（U）
        • 胸腺嘧啶(T)
    • 戊糖
      • 脱氧核糖
      • 核糖
• 分类
  • 核糖核酸( RNA)
    • 碱基
      • A,G,C,U
    • 戊糖
      • 核糖
    • 核苷酸
      • AMP（腺苷酸）
      • GMP(鸟苷酸)
      • UMP（尿苷酸）
      • CMP（胞苷酸）
  • 脱氧核糖核酸（DNA）
    • 碱基
      • A,G,C,T
    • 戊糖
      • 脱氧核糖
    • 核苷酸
      • AMP（腺苷酸）
      • GMP(鸟苷酸)
      • TMP（胸苷酸）
      • CMP（胞苷酸）
• 核苷酸衍生物
  • ATP（三磷酸腺苷）
  • 环化核苷酸
    • cAMP
    • cGMP
• 核酸的共价结构
  • DNA
    • 一级结构
      • 脱氧核糖核酸在多核苷酸链中的排列顺序
    • 二级结构
      • DNA双螺旋（Waston-Crick提出）( B型)
        • 由两条反向平行的多核苷酸链，彼此盘绕形成一个右手的双螺旋
        • 彼此按A=T, G=C ,形成氢键，碱基配对，A-T之间两根氢键，G-C之间三根氢键
        • 碱基堆积力(最重要)和氢键维持双螺旋结构的稳定
        • 磷酸核糖位于双螺旋外侧，碱基位于内部
        • 碱基平面与糖环平面垂直，垂直于螺旋轴
        • 直径2nm，每圈含10个碱基对，每上升一圈，螺距3.4nm,每2个碱基对之间0.34nm
        • 双螺旋表面有两条螺旋沟，宽的叫大沟，窄的叫小沟
      • Chargaff规则
        • 所有DNA中腺嘌呤的物质的量等于胸腺嘧啶，即A=T.
        • 所有DNA中鸟嘌呤的物质的量等于胞嘧啶，即G=C.
        • A+G= T+C, A+ C=T+G
        • 不同生物种属的DNA碱基组成不同
        • 同一个体，不同组织，不同器官的DNA的碱基组成相同
    • 三级结构
      • 超螺旋
        • 生物体中主要以负超螺旋存在（左手螺旋）
        • 核小体（染色质的基本组成单位）
          • 由组蛋白核心和盘绕在外的DNA组成
  • RNA，{一般是单链存在，有发夹结构(局部可以形成双螺旋)}
    • mRNA
      • 功能
        • 蛋白质合成的模版
      • 特点和结构
        • 原核生物mRNA
          • 多顺反子
        • 真核生物mRNA
          • 单顺反子
          • 5’端有帽子结构( m⒎GpppNmp)
          • 3’端有多聚腺苷酸尾poly（A）
        • 种类最多
    • rRNA
      • 结构和特点
        • 含量最多
        • 原核生物rRNA
          • 70S
            • 50S
              • 23S,5S
            • 30S
              • 16S
        • 真核生物rRNA
          • 80S
            • 60S
              • 5.8S,28S,5S
            • 40S
              • 18S
      • 功能
        • 与蛋白质组成核糖体(蛋白质合成的场所)
    • tRNA
      • 功能
        • 转运氨基酸
      • 结构和特点
        • 含稀有碱基最多
        • t RNA二级结构
          • 三叶草形
            • 氨基酸臂(接受活化的氨基酸，3’端有CCA羟基)
            • 二氢尿嘧啶环
            • TψC环
            • 额外环(是RNA分类的指标，决定RNA的特异性)
            • 反密码环(有密码子，识别密码子)
        • t RNA三级结构
          • 倒L形
• 核酸的理化性质
  • 碱水解(RNA)
    • 产生2’和3’的核苷酸混合物
  • 光谱性质
    • 260nm有最大光吸收(由于碱基具有共轭双键造成的)
    • OD260/OD280(可用于鉴定核酸的纯度)
      • =1.8，是纯DNA
      • =2.0,是纯RNA
      • >1.8有RNA污染
      • ＜1.6，有蛋白质污染
    • 还可以用于测定核酸的含量
  • 核酸变性
    • DNA双链变成单链，氢键破坏，
    • Tm（熔解温度）DNA双螺旋结构失去一半时所对应的温度或达到最大吸收一半时所对应的温度
    • 增色效应(260nm吸收值增加)，溶解度上升，粘度下降，浮力密度上升
    • Tm影响因素
      • G+ C含量高，Tm高
      • 离子强度高，Tm高
      • 样品均一性
        • 样品均一性高，熔解温度发生在很窄的范围
        • 样品均一性低，溶解过程发生在很宽的范围
    • DNA变性影响因素
      • 高温，强酸，强碱，紫外线，变性剂，有机溶剂
  • 核酸复性
    • 减色效应
    • 缓慢冷却（退火）
    • DNA复性影响因素
      • DNA浓度，样品均一性，离子强度，温度，DNA片段大小
  • 核酸杂交
    • 衍生出来的技术
      • Western blot(蛋白质)
      • Northern blot（RNA）
      • Southern blot （DNA）
    • 类型
      • DNA-RNA
      • DNA-DNA
      • RNA-RNA
• 核酸的分离纯化
  • DNA分离
    • 盐抽提
    • 氯化铯密度梯度离心
    • SDS,蛋白酶K- DNA萃取
  • RNA分离
    • 酸性胍盐苯酚氯仿抽提法
    • 氯化铯密度梯度离心/胍盐
  • 核酸的凝胶电泳
    • 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
    • 琼脂糖电泳
  • 核酸含量的测定
    • 定磷法
    • 定糖法
    • 紫外分光光度法
    • HPLC（高效液相色谱）
    • 核酸杂交
• 核酸的核苷酸序列测定
  • DNA
    • Sanger 双脱氧终止法（酶法测序）
    • 化学裂解法
  • RNA
    • 化学试剂裂解RNA
    • 酶切法
    • 逆转录合成cDNA法
• DNA的合成
  • PCR技术
    • 必备条件
      • 模板DNA（单链）
      • 引物
      • DNA聚合酶
      • 镁离子
      • dNTP(4种)
    • 合成方向
      • 5’→3’
• 浮动主题
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