细胞融合与体细胞杂交

能诱导细胞融合的病毒有仙台病毒、疱疹病毒、牛痘病毒和副黏液病毒等，其中仙台病毒最为常用。用紫外线照射仙台病毒破坏其核酸使其失去感染能力再用于细胞融合。

细胞融合与体细胞杂交

• 细胞融合
  • 细胞融合（cell fusion）是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个 细胞的技术。
    • 对称融合（symmetric fusion）：两个完整的细胞间的融合。
    • 不对称融合（asymmetric fusion）：利用物理或化学方法使某亲本的细胞核 或细胞质失活后再与另外一个完整的细胞进行融合。不对称融合的后代一般都是 非整倍体
  • 细胞融合的步骤：
    • ①两个原生质体或细胞互相靠近；
    • ②细胞膜融合，形成细胞桥；
    • ③细胞质渗透；
    • ④细胞核融合。
  • 方法
    • 生物法
      • 能诱导细胞融合的病毒有仙台病毒、疱疹病毒、牛痘病毒和副黏液病毒等，其中 仙台病毒最为常用。用紫外线照射仙台病毒破坏其核酸使其失去感染能力再用于 细胞融合。
        • 病毒诱导细胞融合的基本步骤
          • （1）病毒颗粒附着在细胞膜上起搭桥作用，使细胞聚集在一起。
          • （2）病毒使两个细胞膜间互相渗透，细胞质互相融合。
          • （3）两个细胞核合并形成融合细胞，再生细胞壁。
          • （4）筛选融合细胞。
    • 化学法
      • 可以采用的细胞融合化学诱导剂包括： NaNO3、高pH 的高浓度Ca2＋、PEG、溶菌酶、明胶、抗体、植物凝血素、伴 刀豆球蛋白A、聚乙烯醇等。
        • 高pH、高浓度Ca2＋的聚乙二醇诱导融合
          • 在高pH、高Ca2＋溶液的作用下，将与原生质体细胞膜结合的聚乙二醇（PEG） 分子洗脱，会进一步加剧打破原生质体电荷平衡，从而提高融合率。因此， PEG 结合高pH、高浓度Ca2＋方法成为一种较常用的细胞融合方法。
    • 物理法
      • 电融合法（electrofusion）是指利用电场来诱导细胞彼此连接成串，再施加瞬间 强脉冲，促使细胞膜发生可逆性电击穿诱发细胞融合的技术。
• 体细胞杂交
  • 体细胞杂交（somatic hybridization）是指将不同来源的体细胞融合，并使之分化 再生成新品种的技术。
  • 过程
    • 亲本选择（考虑杂种细胞筛选标记）、原生质体制备、原生质体融合、融合细 胞筛选、细胞壁再生、分裂形成细胞团、愈伤组织形成、再生杂种植株。 其中融合细胞筛选与杂种植株鉴定是关键
  • 融合细胞筛选
    • 1）抗药性筛选法
    • 2）营养互补筛选法
      • 细胞在缺乏一种或几种营养成分时不能生长繁殖，此细胞即属于营养缺陷型 细胞。利用两亲本细胞营养互补可以筛选融合细胞。
    • 3）物理特性筛选法
    • 4）荧光标记法
  • 杂种植株鉴定
    • 1）形态学鉴定
    • 2）细胞学鉴定
    • 3）同工酶鉴定
      • 常用作分析的有乙醇脱氢酶、乳酸脱氢酶、过氧化物酶、酯酶、 氨肽酶、核酮糖二磷酸羧化酶等。
    • 4）DNA 分子标记鉴定
      • 随机扩增多态性DNA（RAPD）、限制性片段长度多态性（RFLP