酶分离纯化思维导图

酶工程思维导图：酶的分离纯化：酶的提取和分离纯化定义、环节：预处理抽提纯化酶制品、三个阶段、基本原则；酶的活力测定。

酶的分离纯化

• 酶的分离纯化
  • 酶的提取和分离纯化定义
  • 环节：预处理抽提纯化酶制品
    • 胞内酶：细胞分离收集 破碎 匀浆 离心或过滤 沉淀分离 层析 电泳
    • 胞外酶：发酵液或固体培养物的酶浸提物 离心或过滤 膜分离 干燥 结晶
  • 三个阶段
    • 粗蛋白质 盐析沉淀法
    • 部分纯化 各种柱层析法
    • 均质酶 电泳或HPLC
  • 基本原则
    • 酶是蛋白质，防止失活变性
    • 手段可激烈一些，在工业生产中
    • 跟踪酶分离每一步的总活力和比活力，判断每步方法的可行性
• 酶的活力测定
  • 酶活力定义
  • 酶活力单位
    • 习惯单位
    • 国际单位
    • 其他
  • 催化活性和转化率
  • 酶比活力
    • 定义
    • 单位
    • 步骤
    • 酶的纯化倍数和回收率计算
  • 酶活力测定
    • 终止反应法
    • 连续反应法
    • 快速反应追踪法
  • 反应量测定
    • 光谱分析法
    • 化学法
    • 放射性化学法
• 酶溶液制备及分离纯化的基本过程
  • 细胞破碎
    • 对象：破坏细胞的外壳
    • 目的
    • 细胞破碎方法及其原理
      • 机械
        • 捣碎法
        • 研磨法
        • 匀浆法
      • 物理
        • 温力差 反复冻融法
        • 压力差
        • 超声波
      • 化学
        • 有机溶剂
        • 表面活性剂
      • 酶促
        • 自融法
        • 外加酶制剂法
  • 抽提
    • 抽提定义
    • 提取方式及对象
      • 盐溶液
      • 酸溶液
      • 碱溶液
      • 有机溶剂
    • 影响因素
      • PH
      • 盐浓度
      • 温度
      • 抽提液用量
      • 其他
  • 浓缩
  • 酶分离纯化的基本过程
    • 分离纯化的实质
    • 存在复杂性
      • 大分子
      • 小分子
    • 酶分离纯化方法的选择
      • 溶解度：盐析有机溶剂沉淀法选择性沉淀法
      • 分子大小差异
        • 胶过滤
        • 超过滤
        • 离心
        • 超离心
      • 解离特性差异 吸附离子交换电泳层析
      • 稳定性差异 热 酸碱 表面变性
    • 纯化方法的组合
      • 选择性变性
      • 吸附法或盐析，有机溶剂沉淀
      • 离子交换 胶过滤
      • 结晶
• 根据分子大小轻重建立分离纯化方法
  • 过滤
    • 非膜过滤
    • 膜过滤
  • 过滤
    • 定义
    • 常温 加压 减压过滤
    • 滤浆
    • 过滤介质
    • 滤液
    • 滤饼
    • 过滤的分类及其特性
      • 粗滤
      • 微滤
  • 膜分离
    • 定义
    • 实质物质透过或被截留于膜的过程
    • 种类
      • 膜分离
        • 加压膜分离
        • 电场膜分离
        • 扩散膜分离
  • 离心分离
    • 定义
    • 分类
      • 低速离心
      • 高速离心
      • 超速离心
    • 离心方法的选择
      • 差速离心
      • 密度梯度离心
      • 等密度梯度离心
    • 离心条件的确定
      • 离心力
      • 离心时间
      • 温度和PH
    • 凝胶层析
      • 定义
      • 类型
        • 葡萄糖凝胶
        • 琼脂糖凝胶
        • 聚丙烯酰胺
        • SphacryI
        • 聚乙烯醇系
• 调节溶解度的分离方法
  • 定义
  • 盐析法
    • 盐溶现象
    • 盐析现象
    • 盐析原理
      • 存在状态
        • 两性电解质
        • 蛋白质周围形成的水化膜
      • 盐析原因
        • 非中性盐
        • 中性盐
    • 常用盐（硫酸铵）
      • 优点
      • 子主题
      • 缺点
    • 调节盐浓度的方法
    • 影响因素
      • 溶质浓度
      • PH
      • 温度
      • 无机盐种类
  • 有机溶剂沉淀
    • 定义
    • 原理
      • 降低溶质的介电常数
      • 降低自由水浓度
    • 常用的有机溶剂沉析剂
      • 乙醇
      • 丙酮
    • 影响有机溶剂沉析的主要因素
      • 温度
      • 搅拌速度
      • PH
      • 离子强度
      • 样品浓度
      • 金属离子的助沉晰析作用
  • 等电点沉淀法
    • 定义
    • 原理
    • 缺点
  • 其他沉淀法
  • 子主题
  • 子主题
• 萃取分离
  • 定义
    • 利用酶在互不相容，两相间溶解度不同，得到纯化与浓缩的方法
  • 萃取技术
    • 有机溶剂萃取
      • 定义
      • 基本操作
      • 常用有机溶剂
      • 特点
      • 应用
    • 双水相萃取
      • 双水相系统
      • 酶双水相萃取原理
        • 定义
        • 影响因素
          • 两相组成
          • 高聚物分子质量浓度极性
          • 离子种类浓度电荷
          • 两相溶液比例
          • 溶质分子质量电荷极性
          • PH温度
        • 特点
          • 高含水量
          • 界面张力小
          • 条件温和
          • 生物相容性好
          • 适合目的酶直接提纯精制
          • 分配系数可控
          • 缺点
        • 超临界流体萃取
          • 定义
          • 常用超临界流体
            • CO2
            • scf
        • 反胶束萃取
          • 定义
          • 反胶团
          • 与一般有机溶剂萃取的区别
  • 子主题
• 其他分离方法
  • 吸附交换分离
    • 定义
    • 吸附过程
    • 常见的吸附类型
      • 物理
      • 化学
      • 交换
  • 电泳分离
    • 定义
    • 原理
    • 分类
      • 凝胶电泳
      • sps凝胶电泳
      • 毛细管电泳
      • 等电聚焦电泳
      • 双相电泳
  • 亲水层析
    • 生物亲和作用
    • 亲和作用体系
    • 亲和层析
      • 原理
      • 操作
        • 吸附
        • 清洗
        • 洗脱
        • 再生
• 酶的浓缩干燥与结晶
  • 冷冻法
    • 冻成固体使水分子升华
    • 水结冰 酶不结冰
  • 蒸发法
    • 减压蒸发
    • 超蒸发
    • 薄膜浓缩
      • 优点
      • 缺点
  • 超过滤
    • 定义
    • 优点
    • 类型
      • 平面型
      • 管式型
      • 螺旋卷式
      • 中空纤维型
  • 胶过滤
  • 干燥
  • 结晶
    • 定义
    • 实质
    • 基本原理
      • 调整溶液使之缓慢地趋向于过饱和点
      • 调整溶液的性质和环境条件，使其尽可能多的溶质分子相互接触，形成结晶
    • 条件
      • 酶的纯度
      • 酶蛋白浓度
      • 晶种
      • 结晶温度
      • PH
      • 金属离子
      • 其他
  • 步骤
    • 过饱和溶液的形成
    • 晶核的形成
    • 晶体的生长
    • 方法
      • 盐析法
      • 有机溶剂法
      • 微量蒸发扩散法
      • 透析平衡法
      • 等电点法
  • 酶的剂型与保存
    • 液体酶制剂
    • 固体酶制剂
    • 纯酶制剂
    • 固体化酶制剂
    • 影响酶稳定性的因素
      • 温度
      • PH与缓冲液
      • 酶蛋白浓度
      • 氧
  • 稳定酶的方法
    • 添加底物抑制剂或辅酶
    • 添加巯基保护剂
    • 其他
      • 某些低分子无机离子
      • 表面活性剂
      • 高分子化合物
      • 有机溶剂
      • 防止微生物污染
• 浮动主题
• 浓缩
• 酶的剂型

酶的分离纯化

• 酶的分离纯化
  • 酶的提取和分离纯化定义
  • 环节：预处理抽提纯化酶制品
    • 胞内酶：细胞分离收集 破碎 匀浆 离心或过滤 沉淀分离 层析 电泳
    • 胞外酶：发酵液或固体培养物的酶浸提物 离心或过滤 膜分离 干燥 结晶
  • 三个阶段
    • 粗蛋白质 盐析沉淀法
    • 部分纯化 各种柱层析法
    • 均质酶 电泳或HPLC
  • 基本原则
    • 酶是蛋白质，防止失活变性
    • 手段可激烈一些，在工业生产中
    • 跟踪酶分离每一步的总活力和比活力，判断每步方法的可行性
• 酶的活力测定
  • 酶活力定义
  • 酶活力单位
    • 习惯单位
    • 国际单位
    • 其他
  • 催化活性和转化率
  • 酶比活力
    • 定义
    • 单位
    • 步骤
    • 酶的纯化倍数和回收率计算
  • 酶活力测定
    • 终止反应法
    • 连续反应法
    • 快速反应追踪法
  • 反应量测定
    • 光谱分析法
    • 化学法
    • 放射性化学法
• 酶溶液制备及分离纯化的基本过程
  • 细胞破碎
    • 对象：破坏细胞的外壳
    • 目的
    • 细胞破碎方法及其原理
      • 机械
        • 捣碎法
        • 研磨法
        • 匀浆法
      • 物理
        • 温力差 反复冻融法
        • 压力差
        • 超声波
      • 化学
        • 有机溶剂
        • 表面活性剂
      • 酶促
        • 自融法
        • 外加酶制剂法
  • 抽提
    • 抽提定义
    • 提取方式及对象
      • 盐溶液
      • 酸溶液
      • 碱溶液
      • 有机溶剂
    • 影响因素
      • PH
      • 盐浓度
      • 温度
      • 抽提液用量
      • 其他
  • 浓缩
  • 酶分离纯化的基本过程
    • 分离纯化的实质
    • 存在复杂性
      • 大分子
      • 小分子
    • 酶分离纯化方法的选择
      • 溶解度：盐析有机溶剂沉淀法选择性沉淀法
      • 分子大小差异
        • 胶过滤
        • 超过滤
        • 离心
        • 超离心
      • 解离特性差异 吸附离子交换电泳层析
      • 稳定性差异 热 酸碱 表面变性
    • 纯化方法的组合
      • 选择性变性
      • 吸附法或盐析，有机溶剂沉淀
      • 离子交换 胶过滤
      • 结晶
• 根据分子大小轻重建立分离纯化方法
  • 过滤
    • 非膜过滤
    • 膜过滤
  • 过滤
    • 定义
    • 常温 加压 减压过滤
    • 滤浆
    • 过滤介质
    • 滤液
    • 滤饼
    • 过滤的分类及其特性
      • 粗滤
      • 微滤
  • 膜分离
    • 定义
    • 实质物质透过或被截留于膜的过程
    • 种类
      • 膜分离
        • 加压膜分离
        • 电场膜分离
        • 扩散膜分离
  • 离心分离
    • 定义
    • 分类
      • 低速离心
      • 高速离心
      • 超速离心
    • 离心方法的选择
      • 差速离心
      • 密度梯度离心
      • 等密度梯度离心
    • 离心条件的确定
      • 离心力
      • 离心时间
      • 温度和PH
    • 凝胶层析
      • 定义
      • 类型
        • 葡萄糖凝胶
        • 琼脂糖凝胶
        • 聚丙烯酰胺
        • SphacryI
        • 聚乙烯醇系
• 调节溶解度的分离方法
  • 定义
  • 盐析法
    • 盐溶现象
    • 盐析现象
    • 盐析原理
      • 存在状态
        • 两性电解质
        • 蛋白质周围形成的水化膜
      • 盐析原因
        • 非中性盐
        • 中性盐
    • 常用盐（硫酸铵）
      • 优点
      • 子主题
      • 缺点
    • 调节盐浓度的方法
    • 影响因素
      • 溶质浓度
      • PH
      • 温度
      • 无机盐种类
  • 有机溶剂沉淀
    • 定义
    • 原理
      • 降低溶质的介电常数
      • 降低自由水浓度
    • 常用的有机溶剂沉析剂
      • 乙醇
      • 丙酮
    • 影响有机溶剂沉析的主要因素
      • 温度
      • 搅拌速度
      • PH
      • 离子强度
      • 样品浓度
      • 金属离子的助沉晰析作用
  • 等电点沉淀法
    • 定义
    • 原理
    • 缺点
  • 其他沉淀法
  • 子主题
  • 子主题
• 萃取分离
  • 定义
    • 利用酶在互不相容，两相间溶解度不同，得到纯化与浓缩的方法
  • 萃取技术
    • 有机溶剂萃取
      • 定义
      • 基本操作
      • 常用有机溶剂
      • 特点
      • 应用
    • 双水相萃取
      • 双水相系统
      • 酶双水相萃取原理
        • 定义
        • 影响因素
          • 两相组成
          • 高聚物分子质量浓度极性
          • 离子种类浓度电荷
          • 两相溶液比例
          • 溶质分子质量电荷极性
          • PH温度
        • 特点
          • 高含水量
          • 界面张力小
          • 条件温和
          • 生物相容性好
          • 适合目的酶直接提纯精制
          • 分配系数可控
          • 缺点
        • 超临界流体萃取
          • 定义
          • 常用超临界流体
            • CO2
            • scf
        • 反胶束萃取
          • 定义
          • 反胶团
          • 与一般有机溶剂萃取的区别
  • 子主题
• 其他分离方法
  • 吸附交换分离
    • 定义
    • 吸附过程
    • 常见的吸附类型
      • 物理
      • 化学
      • 交换
  • 电泳分离
    • 定义
    • 原理
    • 分类
      • 凝胶电泳
      • sps凝胶电泳
      • 毛细管电泳
      • 等电聚焦电泳
      • 双相电泳
  • 亲水层析
    • 生物亲和作用
    • 亲和作用体系
    • 亲和层析
      • 原理
      • 操作
        • 吸附
        • 清洗
        • 洗脱
        • 再生
• 酶的浓缩干燥与结晶
  • 冷冻法
    • 冻成固体使水分子升华
    • 水结冰 酶不结冰
  • 蒸发法
    • 减压蒸发
    • 超蒸发
    • 薄膜浓缩
      • 优点
      • 缺点
  • 超过滤
    • 定义
    • 优点
    • 类型
      • 平面型
      • 管式型
      • 螺旋卷式
      • 中空纤维型
  • 胶过滤
  • 干燥
  • 结晶
    • 定义
    • 实质
    • 基本原理
      • 调整溶液使之缓慢地趋向于过饱和点
      • 调整溶液的性质和环境条件，使其尽可能多的溶质分子相互接触，形成结晶
    • 条件
      • 酶的纯度
      • 酶蛋白浓度
      • 晶种
      • 结晶温度
      • PH
      • 金属离子
      • 其他
  • 步骤
    • 过饱和溶液的形成
    • 晶核的形成
    • 晶体的生长
    • 方法
      • 盐析法
      • 有机溶剂法
      • 微量蒸发扩散法
      • 透析平衡法
      • 等电点法
  • 酶的剂型与保存
    • 液体酶制剂
    • 固体酶制剂
    • 纯酶制剂
    • 固体化酶制剂
    • 影响酶稳定性的因素
      • 温度
      • PH与缓冲液
      • 酶蛋白浓度
      • 氧
  • 稳定酶的方法
    • 添加底物抑制剂或辅酶
    • 添加巯基保护剂
    • 其他
      • 某些低分子无机离子
      • 表面活性剂
      • 高分子化合物
      • 有机溶剂
      • 防止微生物污染
• 浮动主题
• 浓缩
• 酶的剂型