基因工程工具酶

这是一篇关于基因工程的思维导图，包括限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、末端脱氧核苷酸转移酶等内容。

基因工程工具酶

• 限制性核酸内切酶
  • 寄主细胞的限制与修饰现象
    • 定义
    • 寄主细胞的限制与修饰现象作用
      • 保护自身DNA不受限制
      • 破坏入侵的外源DNA使之降解
  • 限制性核酸内切酶的类型
    • 定义
    • 类型及其特性
      • I型
      • II型
      • III型
  • 限制性核酸内切酶的命名
  • II型限制性核酸内切酶的基本特性
    • 识别序列
    • 切割方式
    • 不具有甲基化功能
  • II型限制性核酸内切酶的反应条件
    • 标准酶解体系的建立
    • 酶解过程
      • 酶解体系
      • 混匀
      • 反应终止
      • 酶解结果鉴定
    • 限制性核酸内切酶对DNA分子的不完全酶解
    • 酶解反应中的注意事项
  • 影响因素
    • 酶的纯度
    • DNA样品纯度
    • DNA的甲基化程度
    • 酶切反应的温度与时间
    • DNA分子构型
    • 反应缓冲液
    • 星号活性
    • DNA末端长度
  • 应用
• DNA连接酶
  • 概念与作用机理
    • 概念
    • 作用机理
  • 种类
    • T5噬菌体DNA连接酶
    • 大肠杆菌DNA连接酶
    • T4噬菌体RNA连接酶
  • 反应体系
  • 影响连接反应的因素
    • DNA末端浓度
    • 反应温度
    • ATP浓度
  • 应用（基因的针线）
• DNA聚合酶
  • 大肠杆菌DNA聚合酶I
    • 3’-5’聚合酶活性
    • 5’-3’外切酶活性
    • 3’-5’外切酶活性
  • Klenow片段
  • T4噬菌体DNA聚合酶
  • T7噬菌体DNA聚合酶与测序酶
  • Taq DNA聚合酶
  • 逆转录酶高保真DNA聚合酶
  • 应用
• 末端脱氧核苷酸转移酶
  • 概念
  • 作用机理
• 核酸酶
  • 概念及分类
    • 概念
    • 分类
      • 核糖核酸酶
      • 脱氧核糖核酸酶
      • 核酸酶
  • 核糖核酸酶A
  • 核糖核酸酶T1
  • 核糖核酸酶II
  • 脱氧核糖核酸酶I
  • S1核酸酶
• 核酸外切酶
  • 概念及分类
  • 大肠杆菌核酸外切酶VII
  • 大肠杆菌核酸外切酶III
  • Bal31核酸酶
• T4噬菌体多核苷酸激酶
  • 性质
    • 定义
    • 激酶活性
      • 正向反应
      • 交换反应
    • 3’磷酸酶活性
  • 应用
• 碱性磷酸酶
  • 性质
    • 分类
      • 细菌碱性磷酸酶
      • 小牛肠碱性磷酸酶
    • 实验注意事项
  • 应用
    • 5’末端标记前的处理
    • 去除DNA片段的5’磷酸基团，防止自身连接
• 聚合酶链式反应技术
  • PCR概念
  • 步骤及原理
  • PCR在反应中的主要成分
    • 引物
    • dNTPs
    • 模板
    • DNA聚合酶
    • 反应缓冲液
  • 影响PCR反应的主要因素
    • 循环温度设计
      • 模板的变性温度
      • 引物的退火温度
      • 延伸温度
      • 保存温度
    • 引物设计
      • 引物长度
      • 5’端序列常用来添加修饰位点或标记物
      • 四个碱基随机分布
      • 上下游两条引物之间尽量避免互补形成引物二聚体
    • 高保真DNA聚合酶KOD-Aplus最高
      • 最高的准确性
      • 热启动 提高了PCR性能
      • 优良耐热性
      • 扩增平台期
  • RT-PCR及其应用
    • RT-PCR的步骤
      • cDNA第一链的合成
      • 葡萄PC反应
    • 应用
      • 获得cDNA
      • 检测基因的表达
  • 特点
    • 特异性强
    • 灵敏度高
    • 简便 快速
    • 对标本的纯度要求低
• DNA修饰酶