仪器分析生物样品成分

仪器分析生物样品成分主要包括了有机物、金属物质、步骤一确定样品物质数量、步骤二分离生物样品以及步骤三分离分析。

仪器分析生物样品成分

• 有机物
  • 推测物质分子式
    • 质谱分析法 （MS）
      • 大致步骤
        • 确认分子离子峰，并由其求得相对分子质量和分子式， 计算不饱和度
        • 找出主要的离子峰，并记录这些离子峰的质荷比（m/z值） 和相对强度
        • 按照拜诺表确定分子式，再按照氮数规律确定最终的分子式
      • 是有效的分离和分析方法，适合定量分析，定性比较困难
      • 结合红外光谱法、核磁共振波谱法推测样品的结构
  • 测定物质的含量
    • 分子发光分析法
      • 主要定量：化学发光反应的发光强度和反应物的浓度 在几个数量级的范围内成良好的线性关系
      • 激发过程：荧光和磷光的产生涉及光子的吸收和再发射两个过程
      • 定性：可以分析某些物质的平面结构
  • 推测物质的分子结构
    • 紫外可见吸收光谱法 （UV-Vis）
      • 当分子吸收一定能量的辐射能时，有机化合物分子中有形成单键的σ电子、有形成双键的π电子、有未成键的孤对n电子就会跃迁到较高的能级，（反键轨道），电子跃迁同内部的结构有密切的关系，得到物质的吸收峰，进而可以推测物质的分子结构
      • 定量分析
    • 红外吸收光谱法 （IR）
      • 红外光照射分子时，分子中某个基团和外界红外辐射的频率一致时，光的能量通过偶极矩变化而传递给分子，基团吸收一定频率的红外光，振动跃迁，得到试样的红外吸收光谱图，利用光谱图中吸收峰的波长、强度和形状来判断分子中的基团，对分子进行结构分析
      • 定量分析
    • 核磁共振法 （NMR）
      • 原子核自旋的进动发生能级跃迁需要能量，当外加射频场的频率与原子核自旋进动的频率相同时，即入射光子的频率与Larmor频率γ相符时，射频场的能量被原子核吸收，为能级跃迁提供助力。因此某种特定的原子核，在给定的外加磁场中，只吸收某一特定频率射频场提供的能量，形成了核磁共振信号，得到核磁共振谱，进而可以推测物质的分子结构
      • 也可测无机物
      • 主要是定性，有时可以定量
• 金属物质
  • 原子发射光谱法 （AES）
    • 火焰光度法
      • 以火焰作为激发光源，使被测元素的原子激发，用光电检测系统来测量被激发元素所发射的特征辐射强度，从而进行元素的含量分析
      • 定量分析
    • 色谱法
      • 样品进入检测器，得到色谱峰，进而可以进行物质鉴定和测定物质含量
      • 定量分析
  • 原子吸收光谱法 （AAS)
    • 各种原子中电子的能级不同，有选择性地共振吸收一定波长的辐射光，当光源发射的某一特征波长的光通过原子蒸气时，（第一激发态），电子吸收其同种元素所发射的特征谱线，使入射光减弱。特征谱线因吸收而减弱的程度称吸光度A，在线性范围内与被测元素的含量成正比：A=KC，得到样品的共振吸收线，进而能够分析含量
    • 定量分析
• 步骤3 分类分析
  • 无机物
  • △有机物
  • △金属物质
• 步骤2 分离生物样品
  • 高效液相色谱法 （HPLC）
    • 定性：以液体为流动相，采用高压输液系统，将混合液泵入装有固定相的 色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，分离、分析样品
    • 定量：根据峰面积定量
  • 气象色谱法
    • 对气体物质或可以在一定温度下转化为气体的物质进行检测分析
    • 定性：物质的物性不同，各组分在气相和固定液液相间的分配系数不同， 汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行，组分在两相间进行反复多次分配， 经过流动后分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，得到色谱峰。 根据出峰 位置，确定组分的名称
    • 定量：根据峰面积确定浓度大小
  • 超临界色谱法
  • 双向电泳
  • 毛细血管电泳
• 步骤1 确定样品物质数量
  • 纯净物
    • 无机物
    • △有机物
    • △金属物质
  • 混合物