高中生物——专题2 微生物的培养与应用

高中生物选修——专题知识整合:微生物的培养与应用

为微生物的培养与应用

• 微生物的实验室培养
  • 培养基:①固体培养基②液体培养基
  • 培养基成分:水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物)质和无机盐
  • 无菌技术
    • 消毒
      • 巴氏消毒法(在100°煮沸5~6min)
        • 应用范围:牛奶，啤酒，果酒和酱油等不易进行高温灭菌的液体。
      • 煮沸消毒法(在70~75°煮30min或80°煮min)
        • 应用范围:日常食品、罐装食品
      • 化学药剂消毒法(用体积为70%～75%的酒精，来擦拭双手)
        • 应用范围:用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒，空气、手术器械、塑料或玻璃器皿消毒等
      • 紫外线消毒法(紫外线照射30min)
        • 应用范围:接种室、接种箱、超净工作台
    • 灭菌
      • 灼烧灭菌法(酒精灯火焰灼烧)
        • 应用范围:微生物接种工具，如接种环，接种针或其他金属用具等，接种过程中，是广阔瓶口等。
      • 干热灭菌法(干热灭菌箱160~170°加热1～2h)
        • 应用范围:玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等不适合用其他方法灭菌而又能耐高温的物品
      • 高压蒸汽灭菌法(100kPa 、121°C维持15－30min)
        • 应用范围:培养基及多种培养器材、物品。
  • 配置培养基的原则
    • 第一,要满足六大营养即水,碳源,氮源,无机盐,营养因子,能源
    • 第二,对于特殊的菌要查文献补充必需因子.
  • 配制培养基的方法 即:实验操作
    • 计算→称量→溶化→调节pH→分装→加棉塞→灭菌→倒平板
  • 纯化大肠杆菌 (实验操作)
    • 平板划线法
    • 稀释涂布平板法
      • 系列稀释
        • 涂布平板
• 分解纤维素的微生物的分离
  • 纤维素(高分子多糖)，自然界中棉花含量最高
  • 纤维素酶(复合酶)
    • 种类:C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶
      • ←作用原理
  • 纤维素分解菌的筛选
    • 方法:刚果红染色法
      • 方法一:先培养微生物，再加入刚果红进行颜色染色。
      • 方法二:在倒平板时就加入刚果红。
    • 原理
      • 或者
  • :计设验实
    • 土壤取样
      • 选富含纤维素的土壤
    • 选择培养
      • 利用富含纤维素的液体培养基进行培养
    • 梯度稀释与涂布样品
      • 诶稀释倍数足够大，依次(稀释10的4次方是十～10的6次方)倍
    • 鉴别培养
      • 利用刚果红进行染色，使纤维素分解菌的菌落周围产生透明圈。
    • 挑选菌落
      • 选择透明圈大的菌落挑取
• 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
  • 分离筛选微生物的原理
    • ←人为条件
      • 有利于目的菌株的生长，抑制或阻止其他微生物生长
  • 微生物计数方法与原理
    • 稀释涂布平板法
    • 显微镜直接计数法
  • 设置对照
    • 控制单一变量原则
      • 空白培养基
      • 完全培养基
  • 实验设计:①实验方案②所需仪器③材料④用具⑤药品⑥具体的实施步骤以及⑦时间安排等
  • 实验操作:土壤取样→选择培养→微生物的培养与观察→计数
  • 操作提示:⒈无菌操作⒉做好标记⒊制定计划
  • 结果分析: （一）培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落 （二）样品的稀释操作是否成功 （三）重复组的结果是否一致
  • 计算公式:每克样品中菌株数＝(C÷V)×M C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V:涂布平板时所用的稀释液的体积(ml) M:稀释倍数