血细胞分析仪检验(4)

临床检验基础，主要包含血细胞分析仪检验原理、血细胞分析仪安装、使用、保养和维护 血细胞分析仪校准、性能评价及比对等。

血细胞分析仪检验

• 血细胞分析仪检验原理
  • 电学检验原理
    • 电阻抗法（库尔特原理）是三分群血细胞分析仪的核心技术可以准确测出细胞的大小和数量，并可与其他检验原理组合应用于五分类血细胞分析仪中。
      • 1.仪器组成
        • 信号发生器
        • 放大器
        • 阈值调节器
        • 甄别器
        • 整形器
        • 计数器
      • 2.血细胞计数原理
      • 3.白细胞三分群原理
        • 电阻抗法白细胞三分群的界定
        • 小细胞群（细胞数）
          • 35～90（体积）
            • 淋巴细胞（主要细胞）
              • 单个核细胞，颗粒少或无，细胞小（脱水后特点）
        • 中间细胞数
          • 90～160
            • 嗜酸/嗜碱性粒细胞，单核/幼稚细胞
              • 单个核细胞或核分叶少，细胞中等大小
                • 子主题
        • 大细胞群
          • >160
            • 中性粒细胞
              • 核分叶多，颗粒大，细胞大
      • 4.红细胞和血小板检验原理
    • 射频电导法
      • 不单独使用，联合其他技术应用于白细胞五分类
  • 血细胞分析仪除了能够测定血红蛋白浓度，主要具有血细胞计数和白细胞分类两大功能。
  • 光（化）学检验原理
    • 激光散射法
      • 1.仪器组成
        • 光源
        • 鞘流
        • 细胞悬液
        • 光检测器
      • 2.各种角度的散色光及意义
        • 低角度散射光（前向散射光）
          • 反映细胞的数量和表面体积
        • 高角度散射光（侧向散射光）
          • 反映细胞内部颗粒、细胞核等复杂性
        • 散射荧光（侧向荧光）
          • 荧光染料染色后的细胞或颗粒被微光照射，用于分析细胞内脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的含量
      • 3.染料组成
        • 荧光染料：碱性槐黄、聚亚甲基蓝和碘化丙啶，主要用于核酸染色
        • 非荧光染料：亚甲基蓝（用于核酸染色）、氯唑黑E（用于单核细胞，嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和白细胞的膜结构染色）和过氧化物酶试剂
    • 分光光度法
      • 1.仪器组成
        • 单色光源
        • 检测池
        • 比色容器
        • 光检测器
      • 2.检验原理
        • 主要用于血红蛋白测定
      • 3.溶血剂的种类
        • 改良氰化高铁血红蛋白溶血剂
          • 测定波长为540nm,稀释液含有毒的氰化物成分
        • 非氰化高铁血红蛋白溶血剂
          • 稀释液不含氰化物成分
  • 联合检验原理
    • 1.体积，电导和光散射法联合检验方法
      • 主要用于网织红细胞计数和有核红细胞计数
    • 2.光散射与细胞化学法
      • 激光与过氧化物酶染色通道
        • 主要是用于白细胞的计数和分类
      • 嗜酸性粒细胞/核分叶性通道
        • 主要用于有核红细胞的计数
      • 未染色大细胞技数检测
        • 主要用于检测反应性淋巴/浆/毛/幼稚淋巴/原始细胞
    • 3.多角度偏振光散射法
      • 可鉴别有核红细胞
      • 无活性白细胞
      • 脆性白细胞
      • 计算活性白细胞比例
      • 计算有核红细胞
      • 白细胞亚群
      • 异常细胞
    • 4.电阻抗、射频、流式细胞术与核酸荧光染色法（主要用于白细胞计数和分类）
      • 白细胞分类通道
        • 测定荧光和侧向散射光信号
      • 白细胞/嗜碱性粒细胞通道
        • 测定前向和侧向散射光信号
      • 未成熟髓细胞信息通道
    • 5.双流体（双鞘流）技术和细胞化学染色法
      • 嗜碱性粒细胞通道
      • 其他白细胞分类通道
        • 检测除嗜碱性粒细胞以外的各类白细胞
• 血细胞分析仪安装、使用、保养和维护
  • 安装
    • 工作环境
      • 室内温度：15～25度之间
      • 相对湿度：30%~85%
    • 工作电压
      • 保持在（220➕/➖22）V之间
    • 仪器安装
      • 仪器上不能放任何液体和腐蚀性物品、远离易产生干扰的设备
    • 仪器摆放
      • 仪器前后（后距强30cm以上），左右离出一定的空间，有利于仪器散热、保养、维护和检修。 试剂废液桶的位置要低于仪器，以免废液反流，损坏仪器。
  • 使用
    • 标本准备
      • 抗凝静脉血（EDTA），适合各类血细胞分析仪； 末梢血适合半自动血细胞分析仪，另外推制一张外周血涂片备用
    • 准备仪器
      • 开机前准备
      • 开启电源
      • 检测空白本底
    • 质控物检测
      • 室内质控品使用高、中、低值质控物进行（至少使用两个水平质控物），确定各项目检测结果在允许范围内后才可检测临床标本。
    • 血液标本检测
    • 结果审核与报告
  • 保养和维护
    • 保养
      • 日保养
      • 周保养
      • 月保养
    • 维护
      • 检测器维护
      • 液路维护
      • 机械传动部分维护
• 血细胞分析仪校准、性能评价及比对
  • 校准条件
    • 1.新仪器验收合格后，仪器检修更换关键零部件（更换线路板，IPU，流动池等）后
    • 2.室内质控失控
    • 3.室内质评失控
    • 4.更换不同厂家试剂
    • 5.排除试剂故障和试剂的影响因素后
    • 6.仪器使用半年后
  • 性能评价
    • 总体评价
    • 性能评价
      • 1.空白检测限
      • 2.稀释效应
      • 3.携带污染
      • 4.精密度
      • 5.准确度
      • 6.可比性
      • 7.标本老化
  • 比对
    • 1.按CLSI文件EP9-A比对法
    • 2.简易比对方法
• 血细胞分析仪检验结果的质量保证
  • 分析前质量控制
    • 1.检验人员的要求
    • 2.合适的检验环境
    • 3.合格的血细胞分析仪
    • 4.配套试剂
    • 5.合格的检验标本
  • 分析中质量控制
    • 1.仪器启动
    • 2.室内质控
    • 3.标本检验
    • 4.仪器清洁
  • 分析后质量控制
    • 1.检验结果审核
      • 分析有密切关联参数之间的关系
      • 确定是否需要显微镜复检
    • 2.结合临床情况进行相关分析
    • 3.建立危急值报告制度
    • 4.定期征求临床意见
• 血细胞分析仪的临床应用
  • 各项参数及临床应用
    • 红细胞参数及临床应用
      • RDW
        • 用于贫血的形态学分类
        • 鉴别缺铁性贫血（IDA)和轻型珠蛋白生成障碍性贫血
        • IDA早期诊断和疗效观察
      • 红细胞血红蛋白分布宽度（HDW）.
        • 反映外周血红细胞内血红蛋白含量异质性的参数
        • MDW在遗传性球蛋形红细胞增多症时明显增高，可代替红细胞脆性试验用于该病的筛查
      • 球形平均红细胞容积（MSCV ）
        • 健康人 MSCV比MCV大，但有些病人则相反。如当：MSCV<MCV 时该遗传性球形红细胞增多症的灵敏度为100%.特异性93.3%
      • 网织红细胞参数
        • 网织红细胞百分率（RBT%）、网织红细胞计数
        • 高荧光强度网织红细胞（HFR）、中荧光强度网织红细胞（MFR）、低荧光强度网织红细胞（LFR）、未成熟网织红细胞比例（IRF）
        • 网织红细胞血红蛋白量(RET-He):反应网织红细胞的质量变化. RET-HE在缺铁性贫血的治疗过程中有重要意义
        • 网织红细胞平均血红蛋白量:可用于评价骨髓红系的功能状态，在缺铁性贫血的治疗中，CHr 最早出现升高
    • 白细胞参数及临床应用
      • 1.未成熟粒细胞（IG）
        • 主要包括：晚幼粒细胞，中幼粒细胞，早幼粒细胞
        • IG增高
          • 感染
          • 肿瘤
          • 类白血病反应
          • 骨髓增生性疾病
          • 慢行粒细胞白血病
      • 2.大型未染色细胞（LUC）
        • 包括：反应性淋巴细胞，浆细胞，毛细胞，幼稚淋巴细胞，原始细胞
        • LUA增高
          • 感染
          • 免疫性疾病
          • 白血病
    • 血小板参数及临床应用
      • 1.平均血小板体积（MPV）
        • 参考区间：7～11fl
        • 增高：骨髓纤维化、血栓性疾病、血栓前期状态、脾切除、慢行粒细胞白血病、巨大血小板综合症
        • 降低：严重感染伴有败血症、脾功能亢进、化疗后，再生障碍性贫血和巨幼细胞贫血
      • 2.血小板分布宽度（PDW）
        • 参考区间：15%~17%
      • 3.大血小板比率（P-LCR）
        • 参考区间：10%～30%
        • 增高：免疫性血小板减少、慢性出血、血小板增多症、感染
      • 4.血小板比容（PCT）
        • 参考区间
          • 成人：0.108%~0’282%
          • 儿童：0.221%～0.406 %
          • 增高：反应性及原发性血小板增多症、慢性粒细胞白血病早期
          • 降低：再生障碍性贫血，化疗后及血小板减少时
      • 5.未成熟血小板比率（IPF）
        • 增高：骨髓造血功能良好，外周血中血小板破坏增多，IPF会增高
        • 降低：骨髓造血功能抑制、血小板增生不良时，IPF会降低
  • 细胞分布图形及临床应用
    • 1.红细胞直方图的临床应用（有助于贫血的诊断如：缺铁性贫血、巨幼细胞贫血、铁粒幼细胞性贫血，）
      • 正常红细胞直方图
      • 异常红细胞直方图
    • 2.白细胞直方图的临床应用
      • 正常白细胞直方图
      • 异常白细胞直方图
        • 1.淋巴细胞峰左侧区域异常
        • 2.淋巴细胞峰与单个细胞峰之间区域异常
        • 3.单个核细胞区与中性粒细胞之间区域异常
        • 4.中性粒细胞峰右侧区域异常
        • 5.多部位警报
    • 3.血小板直方图的临床应用
    • 4.散点图的临床应用
      • 白细胞散点图
      • 红细胞散点图
  • 常见预警和干扰因素
    • 预警主要有：图形、符号、文字三种形式
    • 干扰因素
      • 1.干扰RBC、HGB、MCV、MCH和MCHC等参数的常见因素
        • 冷凝血标本
        • 脂血标本
        • 红细胞缗线状标本
        • 溶血标本
        • 红细胞对EDTA抗凝剂敏感
      • 2.干扰WBC的常见因素
        • 有核红细胞
        • 巨大血小板标本
        • 难溶血或溶血不良标本
      • 3.干扰PLT的常见因素
        • 小细胞性贫血标本
        • 血小板聚集或血小板卫星现象
        • 细胞碎片
      • 4.干扰RET的常见因素
        • 疟原虫和Howell- Jolly小体使网织红细胞假性增高
  • 检验结果显微镜复检规则
    • P88～91页