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药物分析
研究药品质量，制定药品标准，并围绕药物cGMP的生产全过程，实施分析，检测和控制，保障产品/药品的质量符合目标要求。
编辑于2024-04-12 19:10:56- 第九版药物分析
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药物分析
药品质量标准（药品标准）
内容：性状，鉴别，检查，含量测定—P2
正文内容/内涵：真伪鉴别，质量检查，含量要求（决定药品的安全性，有效性，质量可控性）
定义
系根据药物自身的理化与生物学特性，按照批准的处方来源，生产工艺，贮藏运输条件等所制定的，用以检测药品质量是否达到用药要求并衡量其质量是否稳定均一的技术规定
药品标准—P14
术语—P20
性状（外观，臭，味，溶解度，物理常数）
溶解度
易溶1-10，微溶100-1000，不溶10000
物理常数
相对密度，馏程，熔点（测定易粉碎固体药品第一法，第二法，第三法），凝点，比旋度（偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度，反应手性药物特征及纯度，用以区别药品，检查纯度，测定制剂的含量，钠灯D线589.3nm），折光率，黏度，吸收系数（百分吸收系数，当溶液浓度为1%，每100ml中含被测药物1g，液层厚度为1cm时的吸光度数值），碘值，皂化值，酸值
鉴别（判定真伪 ，已知物）
鉴别试验
一般鉴别（某一类）—P41
有机氟化物
氧瓶燃烧法，碱性，茜素氟蓝，硝酸亚锫，蓝紫色络合物
水杨酸盐
三氯化铁，中性红色，弱酸性紫色
加稀盐酸沉淀，醋酸铵沉淀溶解
酒石酸盐
氨制硝酸银，水浴加热，银镜
芳香第一胺
与亚硝酸，重氮化反应
与b-萘酚，颜色沉淀
托烷生物碱（莨菪酸）
Vitali反应
钠钾钙钡焰色反应
铵盐
氢氧化钠加热产生氨气，使湿润的红色石蕊试纸变蓝，遇硝酸亚汞润湿的滤纸生成黑色汞单质
氯化物
加稀硝酸成酸性后滴加硝酸银生成白色沉淀，沉淀加氨试液溶解，再加稀硝酸复生成（生物碱或其他有机碱的盐酸盐必须先加氨试液成碱性）
加二氧化锰，加硫酸，加热产生氯气，润湿的碘化钾淀粉试纸变蓝
硫酸盐
加氯化钡，白色沉淀在盐酸硝酸不溶解
加醋酸铅，白色沉淀在醋酸铵或氢氧化钠中溶解
加盐酸不产生白色沉淀（与硫代硫酸盐区别）
硝酸盐
加硫酸，沿管壁加硫酸亚铁，成两液层，接界面显棕色
加硫酸与铜丝，加热，产生红棕色蒸气
加高锰酸钾紫色不褪去（与亚硝酸盐区别）
专属鉴别（某一种）—P44
原料药/制剂鉴别方法—P44
化学鉴别法
呈色
酚羟基三氯化铁，芳香第一胺重氮化，托烷生物碱Vitali，肾上腺皮质激素四氮唑，含羰基的苯肼，氨基酸氨基糖苷类茚三酮，氨基醇双缩脲
生成沉淀
氯化物银盐沉淀，异烟肼银镜，肾上腺皮质激素/葡萄糖氧化亚铜红色沉淀，苯甲酸盐三氯化铁，利多卡因与重金属离子，含氮杂环与碘化铋钾硅钨酸，磺胺类的铜盐
荧光反应
硫酸奎宁的稀硫酸溶液呈蓝色荧光，氯普噻吨加硝酸绿色荧光，VB1硫色素反应
生成气体
巴比妥强碱加热产生氨气，盐酸雷尼替丁强酸加热产生硫化氢，碘苷加热紫色碘蒸汽，对乙酰氨基酚硫酸水解加乙醇产生乙酸乙酯香味
使试剂褪色
VC的二氯靛酚反应，氧烯洛尔的高锰酸钾，盐酸异丙肾上腺素的碘试液
测熔点
光谱鉴别法
UV
方法
测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长
规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度
规定吸收波长和吸收系数法
规定吸收波长和吸光度比值法
经化学处理，测定其反应产物的吸收光谱特性
横坐标波长，纵坐标吸光度0-1
IR
横坐标波数，纵坐标透光率，指纹1300-400，官能团4000-1300
ChP标准图谱对照法，USP对照品法
分辨率为2cm-1，基线在90%透光率以上，供试品取样量控制在使其最强吸收峰在10%透光率以下
试样制备
压片法，糊法，膜法，溶液法
聚苯乙烯薄膜校正
粉末X射线衍射法
衍射角
色谱法
TLC，HPLC
化学药物
化学法，光谱法，色谱法，生物学法
中药材
显微鉴别法，特征图谱，指纹图谱
定义
是根据药物的分子结构，理化性质，采用物理，化学或生物学方法来判断药物的真伪，不是对未知物质进行定性分析，对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认
影响因素
溶液的浓度，溶液的温度，溶液的酸碱度，试验时间
验证
专属性
其他成分存在的情况下，采用的鉴别方法能否正确的鉴别出被测物质的特性
证明能与可能共存的物质或结构相似的化合物区分，确证被分析物的供试品成正反应，不含被测成分的阴性对照成负反应，结构相似或组分中的有关化合物也成负反应
耐用性
测定条件发生小的变动时，测定结果受到的影响程度
检查
安全性，有效性，均一性，纯度
杂质—P74
分类
来源
分类
一般杂质（信号杂质，无机杂质）
检查—P82
氯化物
条件：硝酸（避免弱酸银盐沉淀的干扰，加速氯化银沉淀的生产，产生较好的乳浊）➕硝酸银
标准氯化钠溶液10ug Cl/ml
供试品溶液带颜色，用内消色法
黑色背景，从上向下
硫酸盐
条件：稀盐酸（防止弱酸形成钡盐）➕氯化钡
标准硫酸钾溶液100ug SO4/ml
同上
铁盐（硫氰酸盐法）
条件：盐酸（防止Fe3+水解）➕硫氰酸盐=红色可溶配离子
标准铁溶液10ug Fe/ml
加入过硫酸铵氧化剂可氧化Fe2+，防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色
可逆，正丁醇提取增加颜色深度，环状结构炽灼破坏，硝酸加热除去
重金属
硫代乙酰胺法
溶于水，稀酸，不含金属离子强配位基团
条件：ph3.5与硫化氢反应
标准铅溶液10ug Pb/ml（加硝酸防止铅盐水解）
白纸，从上向下
炽灼后的硫代乙酰胺法
难溶于水，稀酸，含有
500-600度，控制时间，必须蒸干除尽氧化氮
钠盐，氟的有机物用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿，其他用瓷坩埚
硫化钠法
溶于碱性水溶液，难溶于稀酸（磺胺类，巴比妥）
临用新制
砷盐
古蔡氏
砷化氢遇溴化汞试纸产生砷斑
标准砷溶液1ug As/ml
醋酸铅棉花：吸收H2S
碘化钾与氯化亚锡的催化作用
促进五价砷酸根还原为三价，碘化钾与锌离子形成稳定的配位离子，被氧化生成的碘和高价锡离子被还原为碘离子和亚锡离子
氧化亚锡与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地产生
抑制锑化氢生成
暗处
DCC-Ag
红色胶态银
含量范围广
灼烧残渣
非挥发性无机杂质
700-800度，重金属检查500-600度
干燥失重测定法
检查水分，残留溶剂，其他挥发性物质
水分测定法
结合水，吸附水
易炭化物
遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质
溶液颜色
溶液澄清度
微量不溶性杂质
定义
多种药物在生产和贮藏过程中引入的杂质
特殊杂质（有关物质，有机杂质）
定义
特定药物在生产和贮藏过程中引入的杂质
化学类别和特性
无机杂质，有机杂质，有机挥发性杂质（残留溶剂）
毒性
毒性杂质
重金属，砷盐，钯，基因毒性杂质（亚硝基胺，甲磺酸酯，苯磺酸酯）
信号杂质
定义
无治疗作用，影响药物的纯度，稳定性或疗效，甚至影响患者健康的其他物质
来源
生产过程
贮藏过程
水解，氧化，分解，异构化，晶型转变，聚合，潮解，发霉
不包括变更工艺或变更原辅料进行生产而产生的新杂质，也不包括掺入或污染的外来物质
杂质限度L—P76
药物中所含杂质的最大允许量，用百分之几或百万分之几表示
控制方法
限度检查法
对照法（平行操作原则，计算），灵敏度法（加试剂不得有正反应，无杂质对照品溶液），比较法（测定吸光度等参数）
定量测定法
色谱
检查项目
降解产物和毒性杂质
残留溶剂（四类）测定法—P103 GC
第一法（毛细管柱顶空进样等温法）
数量不多，极性差异小
第二法（毛细管柱顶空进样系统程序升温法）
第三法（溶液直接进样法）
高沸点残留溶剂
日允许暴露量PDE
某一物质被允许长期摄入，而对人体不产生毒性的最大可接受剂量
有关物质的检查 HPLC
色谱检查法—P107
TLC
杂质对照品法
已知杂质并能制备杂质对照品
供试品溶液自身稀释对照法
杂质斑点颜色与主成分斑点颜色相同或相近，没有杂质对照品
杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法
对照药物法
无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异
HPLC
外标法（杂质对照品法）
有杂质对照品
加校正因子f的主成分自身对照法
已知杂质
不加校正因子的主成分自身对照法
没有杂质对照品
面积归一化法
供试品中结构相似，相对含量较高且限度范围较宽的杂质含量（异构体），一般不用于微量杂质的检查
GC
HPLC方法➕标准溶液加入法
挥发性
毛细管电泳法
光学异构体，多肽，酶
化学检查法
光谱检查法—P116
紫外
红外
不同晶型
原子
重金属
其他—P118
热分析法（多晶型）
热重分析法TG
利用热天平在程序控制温度的条件下，测量物质质量随温度变化的曲线
样品用量少，测定速度快，常用于区分药物中所含水分或溶剂是吸附状态还是结晶状态
差示扫描量热分析法DSC
在程序控温条件下，对供试品与热惰性参比物进行同时加热或冷却时，当供试品发生物理或化学变化时，供试品与参比物之间将产生温度差
适用于测量物质在物理变化或化学变化中焓的变化
横坐标温度，纵坐标热量差
基因毒性杂质GTI—P132
类型
芳香氨基化合物，烷基/芳基化合物，含杂原子的化合物
定义
体内外试验中，能够对DNA具有直接或间接破坏性，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或倾向的杂质，基因毒性也称遗传毒性
潜在基因毒性杂质PGI，化学结构与基因毒性杂质相似，具有警示性，但未经实验证明
ICH使用毒理学关注阈值（毒性杂质限度TTC）控制遗传毒性杂质，1.5ug
色谱-质谱联用
元素杂质检查
原子吸收分光光度法，电感耦合等离子体质谱法
含量测定（测定API）
化学，仪器，生物测定方法
制剂的规格（制剂的标示量）
贮藏
阴凉处：不超过20度，凉暗处：避光并不超过20度，冷处2-10度
检验方法和限度
原料药的含量按重量计，制剂的含量限度用标示量的百分含量表示
标准物质
定义
系指供药品检验中使用的，具有确定特性或量值，用于校准设备，评价测量方法，给供试药品赋值或鉴别用的物质
分类
标准品
系指用于生物检定，抗生素或生化药品中效价，毒性或含量测定的标准物质
对照品
系指采用理化方法进行鉴别，检查，或含量测定等检验及仪器校准时所用的标准物质，其特性量值一般按含量% 计
对照药材，对照提取物，参考品
计量
1➡️10:固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml的溶液
乙醇：未指明浓度，95%
%（g/g）：溶液100g含有溶质若干克，从后往前
ppm：百万分比，ppb：十亿分比
一号到九号筛越来越小
精确度
恒重
系指供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg 以下的质量，干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h 后进行，炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30min 后进行
空白试验
系指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下，按同法操作所得的结果
精密称定：千分之一，称定：百分之一
2.00g称取1.995-2.005
检验程序—P31
取样（样品收检），检验，留样，报告
类型
企业药品标准
国家药品标准—P2
药品应当符合国家药品标准，国家药品标准是保证药品质量的法定依据
中国药典收载国家药品标准
中国药典ChP—P15
收载国家药品标准，由凡例，通用技术要求，品种正文构成，药物的生产必须符合GMP 要求
一部收载中药，二部收载化学药品，三部收载生物制品及相关通用技术要求，四部收载通用技术要求和药用辅料
2020 版，第11 版，2020 年12 月30 开始施行
外国药典
USP，EP，BP，JP，Ph
国务院药品监督管理部门（NMPA ）颁布的中国药典2020 版➕ 药品标准
制定原则
科学性，先进性，规范性，权威性
药物分析主要任务
研究药品质量，制定药品标准，并围绕药物cGMP的生产全过程，实施分析，检测和控制，保障产品/药品的质量符合目标要求
人用药品注册技术要求国际协调理事会ICH—P6
质量，安全性，有效性，综合
GLP药物非临床研究质量管理规范，GCP临床试验，GMP药品生产，GSP药品经营—P8
原料药重点分析项目
实施过程控制的关键措施
全面进行质量意识的教育培训
严格执行工艺规程
设置合理的质量控制点
建立畅通的质量信息传递渠道
进行不良产品的有效控制
质量特性（质量控制要点）
生产工艺稳定，化学结构明确，成品质量可控
质量标准制定包括
性状，鉴别，检查，含量测定
质量标准特点
科学性，项目齐全（完整性），方法精准（准确性），便捷易行（便利性）
定义
不能直接用于临床治疗，是生产药物制剂的活性物料API
质量控制内容
关键工艺路线和过程的控制
关键物料的质量控制
成品关键质量属性指标的控制
重点项目
晶型
外观观察
目视法，显微镜法，电子显微镜法，偏光显微法
晶型表征
X射线衍射法（首选，衍射峰），振动光谱法（IR，拉曼光谱），热分析检测（熔点）
粒度
方法
显微镜法
筛分法
大颗粒准确
光散射法
小颗粒，供试品消耗少，操作简便，重复性好
不是对粒径的直接测定，假设颗粒均为球体
有关物质
质量控制点包括化学结构鉴定，晶型分析，粒度，中间体质控
药物结构鉴定常用方法
UV，IR，MS，NMR，X射线衍射，圆二色谱，热分析
药物制剂重点分析项目—P173
性状
鉴别
排除辅料干扰
溶剂提取API，滤除不溶性辅料，挥干溶剂
复方制剂
色谱法
检查
杂质检查
检查项少，常受辅料干扰，特殊杂质检查选用HPLC
剂型检查
片剂—P178
重量差异（均一性）或含量均匀度
检查含量均匀度不再检查重量差异
崩解时限（有效性）或溶出度
检查溶出度不再检查崩解时限
普通：15min6片，薄膜衣片：30min6片，糖衣片：1h6片
注射剂—P181
装量或装量差异（均一性）
渗透压摩尔浓度（安全性）
可见异物（安）
注射液20，注射用无菌制剂5，无菌原料药5，眼用液体制剂20
不溶性微粒（安）
无菌（安）
细菌内毒素或热原（安）
含量测定
表示方法
原料药物
百分含量，按重量计算
药物制剂
标示量的百分含量
测定方法
HPLC，UV-Vis
分析项目
活性药物成分，药用辅料与药包材
与原料药差异
样品检测需要预处理，使用专属性强的分析方法，排除干扰
需要针对剂型进行针对性检查
药物的稳定性试验与分析—P213
目的
考察原料药物或制剂在温度，湿度，光照等环境因素影响下质量随时间变化的规律
特点
整体性，系统性，阶段性
内容
影响因素试验（1批，生物制品3批）—P214
定义
高温，高湿，强光照射等比加速试验更剧烈条件下进行的实验
目的
探索药物可能的降解途径和降解产物，初步确定药物的包装，贮藏条件和加速试验的条件，同时验证处方的合理性和分析方法的可行性
分类
高温试验
高于加速试验10度
高湿试验
25度，90%，0，5，10
强光照射试验
4500lx
加速试验（3批）
定义
比影响因素试验条件更温和，比长期试验条件更剧烈（模拟极端气候）
目的
研究药物在偏离正常贮藏条件下的降解情况，确定长期试验的条件
当加速试验6个月中任何时间点的质量发生显著变化，都要进行中间条件试验
40度，75%，0，3，6
长期试验（3批）
定义
为确立标签上建议的复检期和货架期，在推荐的贮藏条件下进行的稳定性研究
目的
确定影响因素试验和加速试验的结果，确定药物的有效期
结果与0个月比较，以确定药物的有效期
是在接近药物的实际贮存条件下进行的稳定性试验，能反映药物稳定性的实际情况，为制定药物的有效期提供依据
25度，60%，0，3，6，9，12
冻融循环试验和短期温度偏离试验
需要冷冻保存，特殊的药物制剂
配伍稳定性试验
需要临时溶解/配制成溶液，或稀释后再使用的药物制剂
稳定性重点考察项目
显著变化
含量与初始值相差5%，或采用生物或免疫法测定时效价不符合规定
任何降解产物超过标准限度要求
外观，物理常数，功能试验等不符合标准要求
ph不符合规定
12个剂量单位的溶出度不符合标准的规定
药包材与药物的相容性，容器密封性是保证药物质量稳定性的重要因素
括号法（极端）和矩阵法（子集）
药物的分析方法与验证—P228
分析样品的制备—P243
分析目的
鉴别试验
化学，光谱，色谱
检查
杂质，特征元素
定量测定
稳定性试验
热分解法，酸分解法，碱分解法，氧化分解法，光分解法
样品制备常用方法
直接溶解法
具有特征基团的化学原料药或其简单制剂
分类
溶剂溶解法，固体分散法
提取分离法
基质复杂
萃取浓集法
复杂基质中微量或痕量物质
分类
溶剂萃取法，固相萃取法
化学分解法
分子结构无特征反应，但具有潜在特征基团或含金属及卤素
分类
水解法（结合不牢固）
酸水解法（卤素原子与脂肪族碳原子以共价结合的含卤素有机药物及水难溶性含金属有机药物），碱水解法（含酯或酰胺结构，或结合不牢固的含卤素有机药物）
锌粉还原法（结合较牢固），杂原子直接与芳环连接
化学衍生化法
无可检测基团或特征元素
有机破坏法
含金属药物及含结合牢固的卤素，N，P，S等元素的有机药物
分类
酸破坏法（湿法破坏）
金属性无机杂质，含氮有机药物，金属元素，（硫酸为分解剂，硝酸，高氯酸，过氧化氢为辅助分解剂）
碱破坏法（干法破坏，高温炽灼法）
卤素，硫，磷等元素的分解，（金属氧化物，氢氧化物或盐为分解剂，无水碳酸钠，硝酸镁，氢氧化钙或氧化锌为辅助分解剂）
氧瓶燃烧法（密闭）
F，茜素氟蓝比色法，水为吸收液 Cl，银量法，水-氢氧化钠为吸收液 Br，银量法，水-氢氧化钠加入二氧化硫饱和溶液 I，硝酸银滴定法，水-氢氧化钠-二氧化硫 间接碘量法，水-氢氧化钠 S，重量法，浓过氧化氢与水
分析方法的验证内容
专属性
在其他成分存在下，采用的分析方法能正确测定被测物质的能力
准确度
用该方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度，一般用回收率%表示
同一浓度至少六份，三种不同浓度，每种浓度至少三份
精密度
同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度，用偏差，标准偏差，相对标准偏差表示
分类
重复性
相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度
同一浓度至少六份，三种不同浓度，每种浓度至少三份
中间精密度
在同一实验室内的条件改变，如不同时间，不同分析人员，不同设备等测定结果之间的精密度
重现性
不同实验室测定结果之间的精密度
已有重现性验证，不须验证中间精密度
检测限LOD
试样中被测物质能被检测出的最低量，没有定量意义
信噪比3:1
定量限LOQ
试样中被测物质能被定量测定的最低量，测定结果应符合准确度和精密度要求
信噪比10:1
线性
回归方程，相关系数，残差平方和，线性图
范围
耐用性
在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度
验证内容选择原则—P259
非定量分析：专属性，检测限，耐用性
定量分析：无检测限，定量限
微量定量分析：无检测限
分析方法的转移
转移类型
对比试验，两个或多个实验室间共同验证，再验证，转移豁免
目的
证明一个实验室在采用另一实验室建立并经过验证的非法定分析方法检测样品时，该实验室有能力使用该方法，其检测结果与方法建立实验室检测结果一致
分析方法确认
首次使用法定分析方法时，由现有的分析人员对分析方法中关键的验证指标进行有选择性的考察，以证明方法对所分析样品的适应性，同时证明分析人员有能力使用该法定分析方法
标准物质的作用与建立—P265
药品标准物质的特性
稳定性，均匀性，准确性，可获得性，适应性
两级五类
国家药品标准物质系指供国家法定药品标准中药品的物理，化学及生物学等测试用，具有确定的特性或量值，用于校准设备，评价测量方法，给供试药品赋值或鉴别用的物质
药物的含量测定
含量测定（化学或物理学原理）
容量分析法（API ）/滴定法
系统误差来源：滴定误差，选择合适的指示剂或指示方法
特点
简便易行，耐用性高，准确度高，专属性差
滴定度T
每1ml 规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量 计算mg/ml
滴定方式（计算）
直接滴定法
间接滴定法
生成物滴定法
剩余量滴定法（空白试验）
光谱分析法（药物制剂的定量检查）
紫外200-400nm
特点
简便易行，灵敏度高，准确度较高，专属性较差
吸光度在0.3-0.7
方法
对照品比较法计算，吸收系数法计算，计算分光光度法，比色法（没有强吸收）
荧光
特点
高灵敏度，荧光自熄灭，易受干扰（空白试验）
色谱分析法（复方制剂）
HPLC （分配）
特点
高灵敏度，高专属性，高效能与高速度
检测器
紫外，荧光，电化学（选择性），蒸发光，示差折光（通用型）
流动相
反相色谱
甲醇-水，乙腈-水
适用性试验
理论板数，分离度，灵敏度（定量，信噪比S/N>10，定性>3），拖尾因子T，重复性
测定法
内标法
避免因供试品前处理及进样体积误差对结果的影响
外标法
进样量准确及操作条件稳定
GC （分配）
具有挥发性的物质（残留溶剂）
检测器
FID（碳氢） ，TCD 热导，NPD ，ECD电子捕获（卤素），FPD火焰光度检测器（磷硫）
测定法
内标（手动进样）
外标（自动进样）
标准溶液加入法（顶空进样）
效价测定（生物学原理）
生物检定法，微生物检定法，酶法
体内药物的分析评价
定义
体内生物样品（生物体液，器官或组织）中的药物及其代谢产物或内源性生物活性物质的定性定量分析
常见体内样品
血样，尿样，唾液，组织
影响生物样本检测的因素
干扰杂质多，待测物浓度低，采样量少，待测物的易变性，样本数量大，内标法的应用
预处理
目的
使待测药物分离，满足测定方法的要求，改善分析环境
方法
蛋白沉淀法
溶剂沉淀法，亲水性有机溶剂（乙腈，甲醇，乙醇，丙酮，四氢呋喃），体积比1:（2-3），上清液偏碱性
中性盐盐析法，饱和硫酸铵，硫酸钠，硫酸镁，氯化钠，磷酸钠，1:2，中性
强酸沉淀法，10%三氯乙酸，6%高氯酸，1:0.6，强酸性
热凝固法，90度，只能除去热变性蛋白且只适用于热稳定性良好的药物
重金属盐沉淀法
CuSO4-Na2WO4，ZnSO4-NaOH，汞盐，1:（1-3）
分离与浓集
液相萃取法，固相萃取法，超滤法
缀合物的水解
酸水解法，酶水解法，溶剂解法
化学衍生物法
GC，HPLC
分析方法选择
色谱分析法，免疫分析法，生物学方法
生物样品分析方法验证
完整验证，部分验证，交叉验证