微生物的基本培养技术

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微生物的基本培养技术

• 培养基
  • 种类
    • 固体培养基（含凝固剂，如琼脂）
      • 鉴定，计数，分离，保存
    • 半固体培养基
      • 观察运动，分类鉴定
    • 液体培养基（不含凝固剂）
      • 扩大培养，工业生产
  • 作用：培养、分离、鉴定、保存微生物或积累 其代谢物
  • 营养
    • 碳源
      • 构成细胞物质和代谢产物→自养
      • 有机碳源又是能源（如葡萄糖）→异养
    • 氮源
      • 形成含氮物质
      • 无机氮源也能提供能量
    • 水
    • 无机盐
    • 其他需求
      • 乳酸杆菌：加维生素
      • 霉菌：酸性环境
      • 细菌：中性或弱碱性环境
      • 厌氧微生物：无氧条件
    • 特殊营养物质：生长因子（微量有机物）
      • 来源：酵母膏、蛋白胨等
• 无菌技术
  • 消毒
    • 方法
      • 煮沸消毒法
      • 巴氏消毒法：不超过100℃，用于牛奶、酒类、 酱油等
        • 优点：达到消毒目的的同时，营养损失较少
      • 化学药物消毒法：酒精擦拭双手、氯气消毒水 源
        • 酒精体积分数为70%时最好
          • 浓度高，菌体表面蛋白质凝固形成保护膜，酒精不能渗入其中
          • 浓度低，杀菌力较弱
      • 紫外线消毒法：接种室、接种台等
    • 芽孢（休眠体）、孢子（繁殖体）一般不能被消灭
  • 灭菌
    • 方法
      • 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌（用于培养基）
      • 干热灭菌：玻璃器皿、金属用具等
      • 灼烧灭菌：用火焰的充分燃烧层（外焰）灼烧 （用于金属用具）
      • 芽孢、孢子能被消灭
  • 其他作用：防止操作者自身被微生物污染
• 纯培养
  • 纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群 体
  • 步骤：配置培养基→（调节pH）→灭菌→接种 →分离→培养
  • △实验：酵母菌的纯培养
    • 分散方法
      • 平板划线法
      • 稀释涂布平板法
    • 原理：微生物群——（分离或稀释）→单个细 胞——（繁殖）→单个菌落
    • 倒平板时将培养基冷却至50℃左右
      • 温度过高，易烫伤
      • 温度过低，培养基易凝固
    • ▲防杂菌污染
      • 每次划线前灼烧接种环
      • 消毒双手
      • 瓶口通过火焰
      • 培养皿开一条缝
      • 在酒精灯火焰附近操作
    • 培养皿倒置
      • 防止拧盖上的冷凝水珠落入培养基造成污染
      • 避免培养基中的水分过快挥发
    • 从第一次划线末端进行 第二次划线 ：末端微生物数量较 多，便于分散
    • 每次划线前都要灼烧：保证下次划线时环上的 菌种直接来源于上次划 线的末端
    • 结束划线后灼烧：杀死残留的菌种，避免污染 环境和感染操作者