细胞铺板

这是一篇关于细胞铺板的思维导图，记录 96 孔板细胞铺板完整实验流程，先提前处理孔板：96 孔板最外圈孔加入适量培养基，减少液体挥发，同时做好标记，注明细胞名称、日期、培养基类型与操作人。实验开始后用胰酶消化细胞，置于培养箱待大部分细胞脱落，吹打收集细胞悬液转入离心管，加入等体积培养基终止消化后离心；弃去上清，先后加入培养基重悬细胞，吹打混匀。吸取细胞悬液上机计数，浓度过高时可稀释后再测，最终结果需要乘以稀释倍数。本方案设定每孔铺 1000 个细胞，考虑损耗按 100 孔计算，单块板总共需要 1×10⁵个细胞；依据测得的细胞悬液浓度，计算需要吸取的悬液体积，再补加培养基配成总体积 10 mL 的工作液，混匀后每孔加入 100 μL，多板铺板时按比例放大体系，且每次铺板都必须重新测定细胞浓度。加样铺板结束后，在显微镜下检查细胞状态与分布均匀度，确认无误后放入培养箱培养。整套步骤包含孔板预处理、细胞消化收集、计数、配液铺板和铺后检查，实操细节清晰，适合细胞实验参考。

细胞铺板

• 96孔板，最外圈只加适量培养基，防止挥发；标记细胞名称，日期，培养基类型，姓名
• 胰酶消化细胞，放入培养箱至大部分细胞脱落，吹打，吸出至离心管中，加入等体积培养基（1：1）终止消化，离心
• 弃去上清，加入2ml培养基，吹打混匀，离心
• 弃去上清，加入1ml培养基，吹打混匀，吸取20ul加入细胞计数板上，细胞计数仪计数； 若浓度太高，可适当稀释，以稀释5倍为例：吸取10ul悬液+40ul培养基(不必全部稀释），吹打混匀，计数，得出结果记得x5
• 96孔板每孔加1000个细胞，考虑上损耗，每板算100孔，即每板需要1X10^5个细胞； 记上述细胞浓度为c 个/ml，即细胞悬液浓度为c 个/ml。需要从细胞悬液中抽取适当体积，来得到铺板所需的细胞个数，可设该体积为a ml，则细胞浓度c 个/ml x 要抽出的体积a ml =1x10^5 个，得到a即为要从细胞悬液中要抽出的体积。 每孔体积加100ul，即可以算出每板需要体积为1x10^4ul=10ml，为终体积。为计算方便，可将a ml 的细胞悬液加入10ml培养基中，混匀，即为铺板所需的浓度，每孔加100ul 即可实现每孔有1000个细胞。 多板可在结果上乘上相应比例，例如6板，即需要从悬液中抽取6a ml加入60 ml的培养基中。每次铺板都计算细胞浓度。
• 完成铺板后，镜下观察细胞状态、是否均匀，放入培养箱。