循环系统生理学

循环系统是分布于全身各部的连续封闭管道系统，它包括心血管系统和淋巴系统。心血管系统内循环流动的是血液。淋巴系统内流动的是淋巴液。淋巴液沿着一系列的淋巴管道向心流动，最终汇入静脉，因此淋巴系统也可认为是静脉系统的辅助部分。

肝星状细胞(HSC)中NLRP3炎症小体可以直接调节其激活并促进肝纤维化

• LPS在离体的肝星状细胞中触发典型NLRP3炎症小体激活
  • LPS刺激WT细胞可诱导Nlrp3和proIl1b mRNA水平上调
  • 在LPS和ATP孵育后，WT的上清液中观察到成熟IL-1β的产量增加
  • WT细胞能够增加IL-1β的表达，而Nlrp3−/−HSC则没有——免疫染色
  • LPS和ATP刺激后，在WT细胞中观察到caspase 1活性增加——流式
  • Casp11、Il1a和Hmgb1 mRNA水平没有变化，排除了非典型NLRP3炎症小体激活的存在——mRNA
  • LPS/ atp处理后，在WT HSC中Cathepsin B才增加——免疫荧光
  • ROS的产生在LPS后增加——FACS测定的DCF强度
  • 使用Cathepsin B抑制剂后Cathepsin B、Nlrp3和IL-1β变化证明NLRP3的激活与ROS和Cathepsin B有关
  • TGF-β(一种已知的促纤维化因子)的评估
• lps驱动的NLRP3炎症小体激活后，离体的肝星状细胞上调纤维化标记物
  • HSC形态学变化，胶原蛋白的产生（coll1）和αSMA的表达增加——免疫染色
  • vimentin（纤维化标志物）的表达增加——流式
  • Ctgf、aSma、Tgfb、Vim和Col1a1 mRNA水平的增加
• NLRP3炎症小体过表达诱导肝星状细胞纤维化
  • 4oh -他莫西芬诱导NLRP3炎症小体高度激活
  • LPS刺激后纤维化标志物的水平进一步升高—— mRNA水平
  • 上一步结论的进一步证明
• 体内HSC中NLRP3的激活导致向肌成纤维细胞的表型切换
  • 炎性小体成分，特别是NLRP3、成熟的IL-1β和分裂的p-10 Caspase 1增加——肝裂解液WB
  • αSMA和desmin蛋白表达水平增加——免疫荧光（从静止状态切换到肌成纤维细胞表型），WB，mRNA，蛋白表达量
• HSC中持续的NLRP3激活导致肝纤维化
  • 模型鼠中αSMA和desmin阳性细胞的显著增加——石蜡包埋肝组织进行染色
  • 肌成纤维细胞转分化的下游效应——胶原沉积增加——天狼星红染色
  • Col1a1、Col3a1和Timp1 上调——mRNA
  • 胶原蛋白产量增加——模型鼠肝裂解液中羟脯氨酸蛋白浓度的增加
• 肝脏的纤维化改变与炎症或损伤无关
  • 模型鼠未发现任何因炎症引起的肝细胞损伤迹象——HE染色，TUNEL染色对比
  • 与对照组相比ALT水平不变——血清浓度
• Nlrp3过度激活导致LPS刺激后肝内HSC激活和纤维化改变
  • HSC激活标记物增加——Ctgf、Coll1a1、Tgfb aSma和Vimentin上调——mRNA
• F4/80和CD68都可以标记巨噬细胞，F4/80是表面marker，特异性更高；CD68需要破膜，也就是胞内细胞因子染色。髓过氧化物酶(MPO)是髓细胞的特异性标志，升高提示有炎症
• 肝纤维化是一个动态的、涉及到进展与逆转两方面的病理过程。细胞外基质(ECM)合成增加、降解减少最终导致ECM在肝内的过度沉积是肝纤维化的主要病理改变。ECM的主要成分是I型胶原（COL-I）和Ⅲ型胶原（COLⅢ），基质金属蛋白酶（MMPs）及其抑制物（TIMPs）是调节ECM降解的主要酶，其主要成分MMP-1及其抑制因子（TIMP-1）在抗肝纤维化中发挥了关键作用。TIMP-1增加导致胶原降解减少