临检血液概述及染色

医学检验之临检血液概述及染色知识梳理，包括血液组成、血液的性质、采血方法、细胞染色及制片等内容。

血液

• 血液概述
  • 血液组成
    • 血细胞45％
    • 血浆55％
      • 无Ca离子
      • 与血清的区别：血清无凝血因子l、II、V、VIII
  • 血液的性质
    • 血量
      • 成人4～5L，6%～8%
      • 动脉血-鲜红色 静脉血-暗红色 C0中毒或氰化物中毒者-樱红色 严重贫血患者-红色变浅
    • PH值7.35～7.45
      • 动脉血7.40 静脉血7.35
    • 血浆渗透量：290～310mOsm／（㎏•H2O）
  • 生理功能
    • 运输功能
    • 协调功能
    • 防御功能
    • 维护机体内环境稳定
• 采血方法
  • 静脉采血法
    • 肘部静脉
    • 手背静脉
    • 内踝静脉
    • 股静脉
    • 小儿可采颈外静脉
  • 皮肤采血法
    • WHO推荐：左手无名指指端内侧
    • 婴幼儿：大踇趾或足跟内外侧缘
    • 严重烧伤患者：皮肤完整处
  • 真空采血法
    • 采血装置
      • 套简式
      • 头皮静脉式
    • 采血顺序
      • 血培养→枸橼酸钠抗凝管→加或未加抗凝剂或分离胶的血清管→加或未加分离胶的肝素管→EDTA抗凝管→含氟化钠灰色管
    • 采血管
      • 红色
        • 化学、血清学、血库
      • 紫色
        • EDTA 与钙离子结合成鳌合物 EDTA-2k＞EDTA-2Na
          • 适合全血细胞计数（CBC）、糖化血红蛋白测定
          • ICSH建议：EDTA-K2•2H2O，1.5-2.2mg／mL血液
          • 不适合凝血检查，血小板功能试验
      • 淡蓝色
        • 枸橼酸钠1：9 与钙离子结合成鳌合物
          • 出凝血检查（PT、APTT、凝血因子、D-D、FDP、血栓弹力图）
          • 输血保养液（CPDA）
            • C 枸橼酸盐
            • P 磷酸盐
            • D 葡萄糖
            • A 腺嘌呤
      • 绿色
        • 肝素 加强抗凝酶（ATⅢ）灭活丝氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成， 并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固
          • 用于急诊生化、血气分析、浆膜腔积液化学检查
          • 红细胞渗透脆性的理想抗凝剂
          • 不适用：CBC、细胞形态学检查、PCR检测
          • 离子选择电极法测电解质应选：肝素锂
      • 灰色
        • 氟化钠、草酸钾 氟离子结合钙 用于葡萄糖、糖耐量、乙醇浓度检测（氟离子可抑制糖酵解中的烯醇化酶，防止糖酵解的发生）
      • 黄色
        • 多茴香脑磺酸钠（SPS） 血培养
      • 金黄色
        • 分离胶／凝块激活剂 化学、不适合血库用于生化、激素、肿瘤等项目
      • 淡绿色
        • 分离胶／肝素锂 钾测定
      • 黑色
        • 枸橼酸钠1：4 与钙离子结合成鳌合物
          • 血沉
            • 魏氏法
            • 影响因素：
              • 升高
                • 胆固醇（荡）
                • 球蛋白（秋）
                • 纤维蛋白原（千）
              • 降低
                • 白蛋白（白色）
                • 卵磷脂（鹅卵石路）
      • 草酸盐（已不再使用）
        • 双草酸盐盐：草酸铵＋草酸钾（6：4）
          • 单独使用草酸钾使RBC缩小 单独使用草酸铵使RBC胀大（单独草酸铵可以进行PLT计数）：
          • 适用于血细胞比容、CBC、网织红细胞计数
          • 不适用于：凝血检查（对V因子的保护非常差），PLT计数、WBC分类计数
  • 动脉采血法
    • 桡动脉
    • 股动脉
    • 肱动脉
  • 质量控制
    • 患者
      • 年龄、性别、药物、精神、活动等
    • 溶血
      • 强力振荡、容器不洁、操作不规范等可引起溶血导致LD、K＋、等假性升高
    • 样本处理
      • 采集后尽快送检，保存不当可直接直接影响检测结果
• 细胞染色及制片
  • 血涂片制备
    • 清洁
      • 新玻片带游离碱质用1moI／L HCLHCL浸泡24h处理
      • 载玻片载玻片应清洁、干燥、中性、无油腻
    • 特点
      • 厚薄适宜、头体尾分明，细胞分布分布均匀、 血膜边缘整齐，并留有一定空隙，血膜占玻片长度2／3左右
    • 制备
      • 血滴愈大、角度越大、速度越快，血膜越厚； 血滴越小、角度越小、速度越慢，血膜越薄。
      • HCT增高，血液黏度较大时，小血滴，小角度，慢推 HCT降低，血液黏度较稀时，大血滴，大角度，快推
      • 疟原虫，微丝蚴采用厚血膜涂片法
  • 血液细胞染色
    • 瑞氏染色法
      • 由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料溶于甲醇而成。 甲醇作用：1.溶解染料；2.固定细胞形态。
      • 染色原理：既有物理吸附作用，又有化学的亲和作用。
      • PH值的影响：酸性环境偏红；碱性环境偏蓝。缓冲液PH值应在6.4～6.8 PH＜PI 正电荷增多，与酸性伊红结合，（偏酸）红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，白细胞核呈淡蓝色或不染色 PH＞PI 负电荷增多，与碱性美蓝结合，（偏碱））所有细胞染色呈灰蓝色，颗粒呈深暗色；嗜酸性颗粒呈暗褐色甚至黑色或蓝色，中性粒偏粗，呈紫黑色。
      • 注意事项
        • 流水冲洗，不能倒掉染液
        • 血涂片上有染料颗粒沉积时，可滴加甲醇，然后立即流水冲洗
        • 染色过深时可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色
        • 涂片染色中勿先除染色液或直接对涂片进行冲洗，以免染料附着于涂片上，冲洗时间不宜过长，以免脱色
      • 评价：是最经典，最常用的染色法。对细胞质染色好，细胞核染色差
    • 吉姆萨染色法
      • 由天青和伊红组成
      • 原理与瑞氏染色法基本相同
      • 对细胞核，寄生虫（如疟原虫）着色较好，结构更清晰，对细胞质成分着色能力较差
    • 瑞氏-吉姆萨复合染液
      • 胞质，胞核染色效果好
      • 新鲜配制染料染料偏碱，须室温或37℃下贮存一段时间，待亚甲蓝转变为天青B。 贮存越久，染色效果越好。贮存过程中必须加塞，防止甲醇挥发和氧化成甲酸。 甲醇须为AR级。