免疫检测技术

免疫检测技术概括，包括免疫荧光技术、酶标记、免疫组织化学、MHC四聚体技术、免疫细胞功能检测、免疫细胞功能检测等等。

免疫检测技术

• 免疫荧光技术
  • 使用荧光素标记，更灵敏
  • 其原理同免疫酶标记
• 酶标记
  • 目的
  • 放大检测信号
  • 提高灵敏度
  • 分类
  • ELISA
  • 分类（判断情景使用方法）
  • 半抗原（单价抗原）
  • ➡️ 竞争 ELISA
  • 生物素
  • - 亲和素 -ELISA
  • 辅酶 R/ 维生素 K
  • 广泛存在于动植组织，可从卵黄和肝脏中提取
  • 现在已可以人工合成。
  • 亲和素
  • 生物素蛋白
  • 是从卵白蛋白中提取的一种糖蛋白
  • 可与生物素稳定结合。
  • 一个亲和素分子可结合４分子的生物素
• 免疫组织化学
  • 在细胞或组织的原位，对相应抗原进行定位、定性和定量检测
  • 组织切片、单层细胞类似于ELISA板
• 细胞因子检测
  • 常规ELIASA
    • 过程
    • 检测特定细胞因子（如
    • IFN-γ ）的特异性产生细胞，进行细胞计数
    • 捕获单抗
    • --- 样品细胞因子（抗原） --- 标记的检测抗体
  • ELISAPOT
    • 淋巴细胞受到抗原刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被ELISPOT板底PVDF膜上(预包被的)的特异性单抗捕获。去除细胞后，被捕获的细胞因子与生物素标记的单抗结合，其后再与碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记的亲和素结合。加底物显色后，PVDF膜上出现紫色或红褐色的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过酶联免疫斑点分析仪（ELISPOT Reader）对斑点的进行自动计数和分析
• 免疫细胞功能检测
  • 免疫细胞的分离
  • 外周血单个核细胞（
  • PBMC ）的分离
  • 根据各类细胞的密度差异，密度梯度离心
  • 淋巴细胞及其亚群的分离和分析
• 免疫细胞功能检测
  • 增殖试验
    • 计数和形态学
    • 特异性抗原或免疫刺激剂作用。
    • MTT比色法（代谢）：
  • 细胞毒试验
    • ^{51}Cr释放法
    • LDH释放法（Promega公司产品）
• MHC四聚体技术
  • 检测
  • CTL 数目
  • CTL的 TCR
  • 抗原肽
  • MHC-I +重链
  • 荧光标记
  • 流式细胞仪分选
• 影响因素
  • 电解质
  • 电解质是抗原抗体反应系统中的必需成分
  • 有多种缓冲系统可供选择，视具体反应而定
  • 温度
  • 15-40 °C
  • ，一般 37 °C
  • 酸碱度
  • pH: 6-9
  • 注意
  • 抗原、抗体的等电点
• 流式细胞仪（Flow cytometry ）
  • 是对细胞进行自动分析和分选的装置。
  • 用特异荧光染色或标记的细胞经合适的光源照射激发，发出特异性的发射荧光，供收集检测
• 免疫吸附法
  • 抗表面分子的单抗包被培养板。
• 免疫磁珠法
  • 特定细胞表面CD分子的单抗体包被磁珠，磁性吸附洗脱
• 主题