第八章 分枝杆菌属细菌检验

结核分枝杆菌，简称结核杆菌，引起人和动物结核病的病原体。对人致病的主要有人型·牛型·非洲型结核分枝杆菌，人型分枝杆菌发病率最高，肺结核最为常见

第八章 分枝杆菌属细菌检验

• 第一节 结核分枝杆菌
  • 简称结核杆菌，引起人和动物结核病的病原体。对人致病的主要有人型·牛型·非洲型结核分枝杆菌，人型分枝杆菌发病率最高，肺结核最为常见
  • 一·生物学特性
    • 形态与染色
      • 是细长略弯，呈单个、分枝状·束状·索状排列的杆菌。无芽跑、无鞭毛。近年来发现有夹膜。革兰染色阳性.但不易着色。抗酸染色后菌体呈红色
    • 培养特性
      • 专性需氧，培养时给予5%~10%CO2促进生长，适生长温度35°C,ph6.5~6.8。营养要求高，必须在含有血清，卵黄·甘油·马铃薯等有机物以及某些无机盐的特殊培养机上才能生长，常用罗氏培养基，生长缓慢，15~20小时繁殖一代，2~4周才能生长出周才能生长出乳白色或淡黄色、表面干燥呈颗粒状或结节状、形似菜花样的粗糙型菌落，牛型结核分枝杆菌的菌落为光滑型。在液体培养基中形成菌膜。有毒株在液体培养基中呈索状生长
    • 生化反应
      • 不活泼。不发酵糖类。耐热触酶、耐热磷酸酶试验阴性，可与非结核分枝杆菌鉴别。结核分枝杆菌硝酸盐还原试验烟酸试验和烟酰胺酶试验为阳性，可与牛型结核分枝杆菌鉴别
    • 抵抗力
      • 结核分枝杆菌细胞壁内含有大量的脂质，对理化因素抵抗力强。耐干燥，在干燥的痰中可存活6~8个月。对75%乙醇敏感
    • 变异性
      • 结核分枝杆菌可发生菌落·形态·毒力和耐药性的变异。
  • 二·临床意义
    • 致病物质
      • 结核分支杆菌不产生内毒素·外毒素和侵袭性酶类，其致病主要是细菌在体内大量繁殖引起炎症，细菌菌体成分其代谢产物引起超敏反应，从而导致组织学上的变化
        • 脂质
          • 占细胞壁干重的60%，与毒力有密切关系
          • 1.磷脂:刺激单核细胞增生，引起结核结节的形成
          • 2.具有破坏细胞线粒体膜，影响细胞呼吸，抑制白细胞游走，引起慢性肉芽肿等作用
          • 3.可刺激机体发生迟发型超敏反应
          • 4.能抑制吞噬细胞中的吞噬体与溶酶体结合，降低溶酶体对细菌的杀伤力
        • 蛋白质
          • 与蜡质D结合可诱导机体发生迟发型超敏反应
        • 荚膜
          • 有抵抗吞噬和抗杀菌物质的作用
    • 所致疾病
      • 脑结核，肾结核，结核性胸膜炎等
    • 免疫性
      • 结核分支杆菌是胞内感染菌，其免疫主要是细胞免疫
    • 结核菌素试验
      • 纯蛋白衍生物
        • 原理：用结核菌素进行皮肤试验以检查受试者对结核分枝杆菌能否有细胞免疫及迟发型超敏反应
        • 方法：受试者前臂掌侧皮内注射PPD5U48~72小时后，观察结果。
        • 结果及意义
          • 红肿硬结的直径：<5mm 结果：阴性反应 意义：无结核杆菌感染或接种过卡介苗或细胞免疫功能低下
          • 红肿硬结的直径;5mm~15mm 结果：阳性反应 意义：表示曾感染过结核杆菌或接种过卡介苗
          • 红肿硬结的直径大于或等于15mm 结果：强阳性反应 意义：表示有活动性结核
  • 第三节·微生物学检验
    • 1.标本采集
      • 根据病变部位的不同采集不同的标本
        • 【1】痰：留取清晨第一口痰3~5ml。合格痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出，以干酪痰·血痰·或黏液痰为合格标准
        • 【2】其他标本：如(2)其他标本:如脓液、穿刺液(脑脊液胸水心包液、关节液·鞘膜积液)、尿液、粪便等标本
    • 2.检验程序
      • 标本
        • 涂片
          • 直接涂片
            • 染色
              • 荧光染色
                • 报告分枝菌
              • 抗酸染色
                • 报告抗酸菌
          • 集菌涂片
        • 分离培养
          • 标本处理
            • 接种
              • 固体培养基
                • 抗酸染色
                • 鉴定试验
                  • 鉴定报告群别或种别
              • 动物试验
                • 病变脏器涂片再培养
                  • 鉴定报告群别或种别
        • 动物试验
        • 基因诊断
          • 鉴定报告群别或接种
    • 3.检验方法
      • 【1】抗酸染色镜检
        • 1】1直接涂片:①薄涂片:取0.01ml标木均勾涂抹呈10mmx 10mm圆形范围。 2.厚涂片：0.1ml标本均匀涂抹早20mmx 15mm椭圆形范围。二者行妻尼抗酸染色·镜检
        • 2】集菌涂片
          • 1.沉淀集菌法：将处理后的标本离心沉淀，取沉淀物涂片
          • 2.漂浮集菌法：是住处理后的际本内加人汽油成甲米1ml.放人振荡器振荡30分钟再加人牛理盐水静置30分钟然后吸取液体和汽油层之间的乳油样物质涂片。再进行抗酸染色·镜检
• 第二节 麻风分枝杆菌
• 第三节 非典型分枝杆菌