2A法灭菌验证

该方法根据GB18280.2—2015和ISO11137-2:2006标准，总结了2A法的全部内容，可以按照此法建立起特定产品特有的无菌验证体系，能够建立低剂量辐照水平下（相对于15KGy以及25KGy的验证法），与之类似的有2B法，亦可参考此法步骤，能够建立更低剂量的灭菌验证，适合产品不耐受高剂量辐照的产品进行验证。这几种方法都能达到10^-6的SAL值。另注GB18280.2—2015和ISO11137-2:2006标准中有些角标以及公式是有误的（不确定是印刷还是盗版的问题），需要自行根据上下文判别。

2A法灭菌验证 （本方法根据GB18280.2—2015/ISO11137-2:2006，2B法亦可参考）

• 该方法根据GB18280.2—2015和ISO11137-2:2006标准，总结了2A法的全部内容，可以按照此法建立起特定产品特有的无菌验证体系，能够建立低剂量辐照水平下（相对于15KGy以及25KGy的验证法），与之类似的有2B法，亦可参考此法步骤，能够建立更低剂量的灭菌验证，适合产品不耐受高剂量辐照的产品进行验证。这几种方法都能达到10^-6的SAL值。另注GB18280.2—2015和ISO11137-2:2006标准中有些角标以及公式是有误的（不确定是印刷还是盗版的问题），需要自行根据上下文判别。
• 缩略语、术语
  • A
    • 调整中值ffp向下到FFP的剂量
  • CD*
    • 在方法2的验证剂量试验中,从100个产品单元的无菌试验中获得的阳性数
  • D*
    • 对供试产品达到10^-2 SAL的最初估计剂量
  • ffp
    • 用增量剂量系列辐射从给定的产品批中抽出的产品单元,经过辐射后20个产品单元中至少有一个 无菌试验为阴性的最低剂量
  • FFP
    • 使20个无菌试验中19个为阳性的剂量,通过从3ffp的中值减去A 计算得到
  • D**
    • 对样品提供10^-2 SAL的最终估计剂量
  • SAL
    • 无菌保证水平
  • SIP
    • 用于测定D** 和DS使用的样品单元
  • DS
    • 杀灭90%经过DD*辐照后存活下来的微生物的估计剂量。 剂量计算数据应报告到小数点后一位。
  • d*
    • 从给定的生产批中抽取产品单元,做增量剂量试验,从试验得到的剂量
  • FNP
    • 10^-2 SAL的估计剂量,用于计算DS
• 方法程序
  • 步骤1 :选择SAL和取得样品
    • 记录预使用产品的SAL，（按照医疗器械等行业的要求，一般设置10^-6，该数据最后一步会用到）
    • 根据5.1、5.2和5.3,从3个独立的生产批中每ー批至少选择280件产品单元。当SIP<1时, 需要额外的产品验证SlP的充分性,见5.
  • 步骤2:实施增量剂量试验
    • 对3批产品的每ー批,用ー个剂量系列中的每ー个剂量辐照20个产品単元，ー个剂量系列 至少有9个剂量,从2 kGy开始,以2 kGy的标称剂量增加。确定每ー个增量剂量。増量剂量中的最高 剂量用于确定首次阳性分数剂量（ ffp） 和d*。这些剂量可以大于标称增量剂量+1.0 kGy或+10%.选 较大的值。如果增量剂量中的任何ー个剂量的最高剂量和最低剂量的算术平均值小于最低值 ,用这个 剂量重新辐照另外20件产品单元。
    • 对于辐射过的产品单元,依照ISO 11737-2（ 见5.4.1） 对每ー个产品单元做无菌试验,记录无 菌试验的阳性数
    • 从该试验结果中获得下列数据: a） A和首次阳性分数剂量（ FFP） （见8.2.3.2） ; b） D* （见 8.2.3.3） ; c） CD* 批（见 8.2.3.4)
    • A 和 FFP
      • 从3个批次每批增量剂量系列确定20个样品中至少1个阴性的最低剂量。指定这个剂量 为某批产品的ffp并找出3个ffp的中值。如果2批或者3批产品有同样的ffp,选择阳性数较高或最 高的批的剂量为中值ffp
      • 用中值ffp的无菌试验阳性数,查表7,记录A值
        • 式中的n 是无菌试验阴性数
      • 用式(2)计算 FFP：FFP =中值 ffp-A
    • D*
      • 对于3批产品中的每ー批.用以下任意方法确定 d*
        • a） 找出所有无菌试验均阴性的两个连续剂量中较低的剂量 ,在随后的增量剂量试验系列中阳性 不得多于1;
        • b） 找出20个样品出现ー个阳性的最低剂量,紧随前后的是所有样品均阴性的增量剂量 。
      • 如果三批中的任何ー批都不能满足 8.2.3.3.1 a） 或b） 的标准.剂量递增试验不成功。在这种 情况下,在对试验方法做了检查并实施了纠正的前提下，可以重复剂量增量试验。
      • 规定D*如下:
        • 若最高批d*超过中间批d*<5 kGy.则中间批d*就成为D* ;或
        • b） 若最高批d*超过中间批d* ≥5 kGy,则最高批d*就成为D*
    • CD*批
      • 找出d*=D*的批次并将其标定为CD*批。如果ー个以上的批d*=D* ,则随机选定这些批 中的任何一批为CD*批。保留在方法2A的步骤3中使用的CD*批样品。从3批样品中留下的样品 的保存条件应能防止微生物的生长。第4批产品可以作为CD*批。
  • 步骤3:完成验证剂量试验
    • 用D*幅射CD*批的100件产品单元。测定实施剂量并将测定的最大剂量标定为DD *， DD*可在D*的基础上有+1.0 kGy或+10%的变化,取其中较大值。如果产品得到的最大剂量和最低剂量的算术平均值小于D*的90%,则该验证剂量试验可用CD*批的另外100个产品单元重做。如 果产品得到的最大剂量和最低剂量的算术平均值小于 D*的90%,且无菌试验的结果被接受,不必重做 验证剂量试验。
    • • 根据ISO11737-2（ 见5.4.1） 对产品单元独立实施无菌试验并记录阳性试验数。定义阳性数 为 CD*
  • 步骤4:结果的考虑
    • 从本试验得到首次无阳性的剂量（ FNP） ：
    • a） 如果 CD* ≤2, FNP=DD* ；
    • b） 如果 2<CD* <10, FNP=DD*+2.0 kGy；
    • c） 如果 9<CD* <16, FNP=DD*+4.0 kGy；
    • d） 如果CD* ,>15.应分析情况,采取纠正措施.重新确定D*
  • 步骤5:建立灭菌剂量
    • 1
      • 依据FFP和FNP的不同,使用式（ 3） 或式（ 4） ,由FFP和FNP值测定DS。 当(FNP-FFP＜10 kGy.使用式(3)：
      • DS = 2 + O.2(FNP-FFP) ..................( 3 )
      • 注:在使用式(3)时.如果(F、P-FFP)Co.设定(FNP-FFP) = O
      • 当(FNP-FFP) >10 kGy,用式(4)：
      • DS =0.4 (FNP-FFP) ..................( 4 )
    • 2
      • 用式(5)建立 D**：D**=DD*+(lgCD*)DS..................( 6 )
        • 注:当产品份额使用在设定剂量时,式（ 6） 中的IgSlP提供了一个校正因子.
    • 3
      • 用式(6)计算灭菌剂量:
        • 灭菌剂量=D** + (-lgSAL-lgSIP-2)(DS) ……………………(6) 剂量计算数据应报告到小数点后一位