1. 光学显微镜技术(Light microscopy)
(1) 原理:凸透镜的放大原理,利用自然光或电光源
(2) 单位:微米μm,1微米 = 1/1000毫米= 10(-6)米
(3) 切片:石蜡切片,冷冻切片,振动切片
(4) 染色:HE染色,PAS染色,镀银染色,醛复红染色等
(5) 观察:器官、组织或细胞的形态结构
(6) 投射:到视网膜上石蜡切片(Paraffin section) 流程
•取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片(5~10 µm)→裱片→脱蜡→入水→染色→脱水→透明→封片
石蜡切片(Paraffin section) 流程
•取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片(5~10 µm)→裱片→脱蜡→入水→染色→脱水→透明→封片
HE染色★
•苏木精-伊红染色法(Haematoxylin-Eosin staining)
•苏木精-碱性染料-蓝紫色
•伊红-酸性染料-粉红色
•嗜碱性-对碱性染料亲和性强-染色质、核糖体
•嗜酸性-对酸性染料亲和性强-细胞质、胞外基质
•中性-对酸性或碱性染料亲和力都不强
PAS染色
•过碘酸-希夫反应(Periodic acid-Schiff reaction)
•阳性反应为紫红色
•显示多糖和糖蛋白的糖链
2. 透射电镜术(Transmission electron microscopy, TEM)
(1) 原理:电磁透镜和电子束
(2) 单位:纳米nm,1纳米= 1/1000微米= 10(-9)米
(3) 切片:树脂包埋+超薄切片
(4) 染色:重金属盐染色,如:锇酸
(5) 观察:细胞,细胞器内部结构
(6) 投射:到荧光屏
(7) 电子密度高(色深)
(8) 电子密度低(色浅)
3. 扫描电镜术(Scanning electron microscopy, SEM)
•原理:组织表面喷涂碳粉与金属粉,利用电子束扫描表面•观察:组织表面立体结构
4. 免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)及免疫荧光(Immunofluorescence, If)
•利用抗原抗体特异反应原理,观察切片中特定分子的分布
•免疫组织化学:酶催化底物,引起颜色变化
•免疫荧光:荧光基团受激发荧光,产生颜色