药学-动物细胞工程制药

生物制药技术中的动物细胞工程制药。

动物细胞工程制药

• 概念
  • 指利用动物细胞为宿主或者反映器，也包括利用转基因动物作为生物反应器，进行疫苗、多肽和蛋白质等生物制品的生产。
• 体外培养动物细胞的类型
  • 贴壁细胞
  • 悬浮细胞
  • 兼性贴壁细胞
• 基本要求
  • 环境条件
    • 培养温度
      • 最适35到37度
    • pH
      • 大多数动物细胞适合在pH7.2至7.4生长
    • 通气量
      • 95%空气＋5%二氧化碳的混合气体环境中
    • 防止污染
      • 细胞体外生存的最重要条件
    • 基本营养物质
    • 渗透压
      • 大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性
  • 营养要求
    • 碳源不能为无机物
    • 氮原亦不能为无机物
    • 在很多情况下尚需添加5%至20%的小牛血清或适量的动物胚胎浸出液。
• 冻成与复苏
  • 原理:
    • 融解时,用最快的速度使细胞悬液回升至37°C.细胞内外的冰晶都溶解,水分迅速回至细胞内。
  • 冻存:
    • 90%: 1.完全培养基; 2.小牛血清; 3.50%小牛血清和40%的合成培养基
      • 10%的DMSO
  • 复苏:
    • 将细胞从液氨罐中取出迅速放入温水中，不停晃动使尽快完全溶解，这一过程大约需1-1.5分钟
  • 冻存与复苏的关键:
    • 加保护剂DMSO ;慢冻速融
• 生产用动物细胞的种类
  • 原代细胞
  • 传代细胞系
  • 转化细胞系
  • 工程细胞系
• 动物细胞培养基种类
  • 天然培养基
    • 是直接采用取自动物体液或组织中提取的成分作培养液
  • 合成培养基
    • 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成
  • 无血清培养基
    • 不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基
• 动物细胞的大规模培养方法
  • 悬浮培养法
    • 细胞在培养液中呈悬浮状态生长繁殖的培养方法
  • 微载体培养法
    • 通过搅拌可使贴壁依赖性和兼性贴壁细胞吸附于颗粒表而生长成单层，在培养液中进行悬浮培养
  • 多孔载体培养法
    • 把细胞接种在多孔载体上培养
  • 微囊化培养法
    • 把细胞包裹在微囊里进行悬浮培养
  • 中空纤维培养法
    • 把细胞接种在中空纤维的外腔，利用中空纤维膜拟人红毛细血管供给营养