医学-细菌检验

细菌检验方法汇总，培养与非培养的方法。

细菌检验

• 细菌培养检测
  • 一、生化
    • 利用细菌酶系统代谢产物鉴别
    • 1，糖（醇、苷）类发酵实验
      • 原理：是否能发酵葡萄糖或乳糖或产气产酸
      • 应用：特别运用于肠杆菌科
    • 2、氧化-发酵（O-F实验）
      • 原理：细菌分解葡萄糖过程必要氧的参与为氧化型、可无氧酵解为发酵型，不分解为产碱型。
      • 培养基：Hugh-Leifson 培养基
      • 应用：细菌种属间的鉴别
    • 3、β-半乳糖苷实验（ONPG实验）
      • 原理：利用细菌能否产生β-半乳糖苷酶，来分解ONPG产生黄色的邻-硝基酚
      • 试剂：0.75mol/L ONPG溶液
      • 应用：主要应用于迟发性酵乳糖菌株的快速鉴定
  • 二、PRO和氨基酸代谢实验
    • 1、吲哚实验
      • 原理：利用某些能产生色氨酸酶的细菌，分解PRO中的色氨酸，生产吲哚，吲哚与三甲基苯甲醛作用形成红色的玫瑰吲哚
    • 2、硫化氢实验
      • 原理：某些能分解胱氨酸，半胱氨酸等含硫氨基酸生成硫化氢再与铅或亚铁离子生成黑色硫化物
      • 培养基：醋酸铅培养基、克氏双糖铁或三糖琼脂培养基（KIA/TST琼脂）
      • 应用：主要用于肠杆菌科鉴别
    • 3、尿素酶实验
      • 原理：某些能产生尿素酶的细菌，分解尿素生成氨，使酚红变红
      • 培养基：尿素培养基
      • 应用：主要用于肠杆菌科（变形杆菌、摩根菌和普罗成登菌属鉴定）及普通变形杆菌和奇异变形杆菌、摩根摩根菌和雷极普罗威登斯菌阳性登鉴别
  • 三、碳源利用实验
    • 1、枸橼酸盐利用实验
      • 原理：某些细菌能利用铵盐和枸橼酸盐作为唯一的氮源和碳源，并可在此培养基上分解枸橼酸钠生成碳酸钠，使培养基变碱
      • 培养基：枸橼酸盐培养基
      • 应用：有助于肠杆菌科细菌鉴定
  • 四、呼吸酶类实验
    • 1、氧化酶实验
      • 快速、几分钟
      • 原理：具有氧化酶的细菌——氧化细胞色素C——氧化苯二胺——有颜色的醌类化合物 ，使用盐酸二甲基对苯二胺，产物呈紫红色；使用盐酸四甲基对苯二胺，产物呈蓝色
      • 试剂：1%盐酸二甲基对苯二胺或1%盐酸四甲基对苯二胺
      • 应用：主要用于肠杆菌科（-）和非发酵、弧菌（+）的测定
  • 五、凝固酶实验
    • 原理：葡萄球菌（凝固酶）——血浆中——纤维蛋白原——纤维蛋白——血浆凝固
    • 试剂：兔血浆
    • 应用：葡萄球菌致病性的重要指标
• 细菌非培养检测
  • 一、免疫学检测
    • 细菌Ag检测
      • 方法：
        • 菌体Ag：LFA、荧光菌球法、凝集实验 游离Ag：ELISA
      • 用已知抗体去检测未知抗原
    • 细菌Ab检测（血清学检测）
      • 原理：用已知抗原或细菌去检测病人血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断
      • 标本：双份血清标本，恢复期比急性期血清标本效价高≥4倍有意义
  • 二、分子生物学检测
    • 一、核酸杂交
      • 原理：利用DNA可进行变形、复性、杂交这一特性制备特定DNA片段，进行标记后用作探针，在一定条件下按照碱基互补配对原则与标本中已变性的细菌DNA杂交，通过检测杂交信号确定是否发生杂交反应，从而坚定标本中有无相应的病原菌基因
      • 探针种类：克隆片段DNA探针、寡核苷酸探针、质粒DNA探针、rRNA探针
      • 应用：细菌分类鉴定、细菌快速鉴定、细菌耐药性的检测、细菌毒素的检测、细菌流行病学调查
    • 二、聚合酶链反应
      • 1、特异性DNA体外扩增技术 2、特异、灵敏、快速、操作简便 2、广泛应用于细菌的鉴定
      • 应用：细菌的快速检测、细菌毒素的检测、细菌耐药性的检测、细菌的流病调查
    • 三、生物芯片技术
  • 细菌非培养检测
  • 三、细菌毒素的检测
    • 一、内毒素的测定
      • 用途：用于被G-菌感染病人的确诊，还用于注射用液和生物制品有无内毒素感染
      • 方法：鲎（hou)试验
    • 二、外毒素的测定
      • 1、体内毒力实验：动物实验，如破伤风毒素实验
      • 2、体外毒力实验：Ag-Ab反应，如ELEK平板毒力测定
  • 四、动物实验用途
    • 1、分离和鉴定病原微生物 2、测定细菌毒力 3、制备免疫血清 4、建立致病动物模型 5、动物的血液是配置细菌培养基必须的实验材料 6、用于生物制品或一些药物的安全、毒性、疗效检验