基因工程、基因诊断和基因治疗

医学上,基于基因水平进行的诊断和治疗,称为基因诊断和基因治疗。 人类疾病都直接或间接与基因相关,在基因水平上对疾病进行诊断和治疗,既可达到病因诊断的准确性和原始性,又可

基因工程、基因诊断和基因治疗

• 重组DNA技术
  • 工具酶
    • 限制性核酸内切酶（DNA内部切割3'-5'磷酸二酯键）
      • 保护细菌
      • 分类
        • REⅠ
        • REⅡ：精确切割
          • 回纹序列（反向重复序列）→粘性末端
        • REⅢ
    • DNA连接酶
      • 两条DNA链上，有一条链上有缺口→催化形成3’-5'磷酸二酯键
    • DNA聚合酶Ⅰ
      • 功能
        • 5’-3'的聚合活性
        • 3’-5'的核酸外切酶活性
        • 5’-3'的核酸外切酶活性
      • 类型
        • 大片段Kelown：5’-3'的聚合活性、3’-5'的核酸外切酶活性
          • 3'端标记
          • 逆转录酶→cDNA（互补DNA）→DNA
            • 参与互补DNA的第二条链的合成
        • 小片段：5’-3'的核酸外切酶活性
    • 多聚核苷酸激酶
      • 5’端标记
      • （ATP）磷酸化标记
    • 末端转移酶
      • ＋dC（脱氧胞嘧啶）
  • 载体（顺风车）
    • 克隆载体（顺风车＋复制）
      • 特点
        • 自主复制功能（最基本）
        • 至少有个选择标志（抗嘌呤霉素标志）
        • 单一酶切位点
      • 质粒
    • 表达载体
• 基因工程的基本步骤
  • 分→选→接→转→筛
  • 分：目的基因的获取分离
    • 化学合成法
    • 基因组DNA文库法
      • 探针找到基因片段
    • cDNA文库法
      • 找mRNA→cDNA
    • PCR法
      • 扩张
  • 选
  • 接：RE+连接酶
  • 转
    • 转化：最常用，质粒→细菌、酵母细胞
    • 转染：质粒→真核（不包括酵母细胞）
    • 感染：质粒→病毒
  • 筛
    • 借助载体遗传标志筛选
    • 标志补救方法
    • 亲和方法
    • 序列
• 基因治疗
  • 基因的矫正、基因的置换（理想）
  • 基因增补（最主要）
  • 基因的失活、沉默
• 基因诊断