医学微生物学-024病毒感染的检查方法与防治原则

医学微生物学-024病毒感染的检查方法与防治原则学习笔记，适用于预习、复习的参照。适用于考前复习，也可以综合其他资料使用。

病毒感染的检查 方法与防治原则

• 第一节病毒感染的检查方法
  • 一、标本的采集与送检
    • ·采集急性期标本。
    • ·使用抗生素。
    • ·冷藏保存，快速送检。
    • ·采集双份血清。
  • 二、病毒的分离与鉴定
    • （一）病毒的分离培养
      • 1．动物接种
        • ·应用：无敏感细胞培养的病毒。
        • ·优点：结果易观察，可建立动物模型
        • ·缺点：要有饲养条件，费用高，有潜伏病毒，对许多人类病毒不敏感。
      • 2．鸡胚培养
        • ·优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作简单，成本较低。
        • ·缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚死亡。
      • 3．细胞培养
        • ·原代细胞：对多种病毒敏感；来源困难，获取成本高；可携带潜伏病毒。
        • ·二倍体细胞：对多种病毒敏感；不带病毒，无致癌潜能；用于病毒疫苗生产。
        • ·传代细胞：对多种病毒敏感；繁殖能力高，传代时间长；不能用于病毒疫苗生产。
      • 4．病毒在培养细胞中的增殖指征
        • ·细胞病变（细胞病变效应，cytopatlthie effect,CPE)
        • ·红细胞吸附（带有血凝素的病毒感染细胞后，能与脊椎动物红细胞结合）。
        • ·病毒干扰作用（某些病毒不引起CPE，但可干扰感染同一细胞另一病毒增殖，抑制该病毒的CPE)。
    • （二）病毒的鉴定
      • 1．形态学鉴定
        • ·光学显微镜：巨细胞病毒包涵体。
        • ·透射电镜：SARS病毒
      • 2．血清学鉴定
        • ·用已知特异性抗体对病毒进行种、型和亚型的鉴定。
        • ·ELISA。
        • ·中和试验。
        • ·血凝抑制试验。
        • ·补体结合试验。
      • 3．分子生物学方法鉴定
        • ·对病毒的蛋白抗原、核酸进行检测。
        • ·蛋白印迹技术。
        • ·核酸扩增。
        • ·核酸杂交。
        • ·基因芯片。
        • ·基因测序。
        • ·新病毒的鉴定：核酸类型的测定、理化性状的检测、基因测序和生物对比。
    • （三）病毒数量与感染性测定
      • 1. 50％组织细胞感染量（TCID50）
        • ·原理：测定使50％细胞出现CPE的最小病毒量。
        • ·以CPE作指标，判断病毒感染性和毒力。
        • ·测定活病毒数量。
      • 2．红细胞凝集实验
        • ·原理：测定使红细胞发生凝集的最小病毒量。
        • ·测定病毒总量（活病毒＋死病毒）。
        • ·凝集效价：能使红细胞呈＋＋凝集的病毒最高稀释度为凝集效价，该稀释度记为一个血凝单位。
      • 3．空斑形成试验
        • ·原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使感染的细胞脱落，形成肉眼可见的空斑。
        • ·空斑形成单位（plaquenit，PFU）：由一个感染病毒增殖所致。
        • ·测定活病毒数量。
  • 三、病毒感染的诊断
    • （一）形态学检查
      • ·电镜和免疫电镜检查。
      • ·光学显微镜检查。
    • （二）病毒成分检测
      • ·病毒蛋白抗原检测的常用方法有免疫荧光技术、酶免疫技术和蛋白印迹分析技术。
      • ·病毒核酸检测。
      • ·核酸扩增技术。
      • ·核酸杂交技术。
      • ·基因芯片技术。
      • ·基因测序技术。
    • （三）血清学诊断
      • 1．中和试验
        • ·原理：病毒＋中和抗体→病毒失去感染性。
        • ·检测血清中抗体的水平。
        • ·鉴定未知病毒。
        • ·对病毒进行半定量。
        • ·较少用于临床诊断，用于人群。
        • ·免疫情况的调查。
      • 2．血凝抑制试验
        • ·原理：病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞→不凝集。
        • ·带血凝素病毒感染辅助诊断。
        • ·鉴定病毒型和亚型。
      • 3．补体结合试验
        • ·原理：用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体。
        • ·特异性低，抗体出现早，消失快，近期感染指标。
      • 4．凝胶免疫扩散试验
      • 5．特异性IgM抗体检测
      • 6．血清学诊断的用途
        • ·分离病毒为时已晚。
        • ·无法分离或难以分离的病毒。
        • ·证实分离病毒的临床意义
        • ·血清流行病学调查
• 第二节病毒感染的特异性预防
  • 1．人工主动免疫
    • ·灭活疫苗。
    • ·减毒活疫苗
    • ·亚单位疫苗
    • ·基因工程疫苗。
    • ·重组载体疫苗。
    • ·核酸疫苗。
  • 2．人工被动免疫
    • ·免疫球蛋白：血清丙种球蛋白。
    • ·细胞免疫制剂：细胞因子。
• 第三节 病毒感染的治疗
  • 1．策略
    • ·抗病毒化制剂。
    • ·干扰素和干扰素诱生剂。
    • ·中草药。
    • ·新抗生素类。
    • ·治疗性疫苗。
    • ·治疗性抗体。
    • ·基因治疗剂。
    • ·多聚肌苷酸和多聚胞啶酸。
  • 2．抗病毒化学制剂
    • ·核苷类药物：阿昔洛韦、利巴韦林、拉米夫定等。
    • ·非核苷类反转录酶抑制剂：奈韦拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素。
    • ·蛋白酶抑制剂：塞科纳瓦、英迪纳瓦、瑞托纳瓦。
    • ·其他抗病毒药物：金刚烷胺、甲酸磷霉素。
  • 3．干扰素和干扰素诱生剂
    • ·干扰素。
    • ·干扰素诱生剂：Poly l：C、甘草酸、芸芝多糖。