药物分析 第三章 药品的鉴别试验

药物分析 第三章 药品的鉴别试验学习笔记，内容包括它的定义、鉴别试验的项目、鉴别方法和鉴别试验的条件及方法验证等等，希望对大家有所帮助。

药品的鉴别试验

• 定义
  • 药物的鉴别试验是根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪
  • 药物的鉴别试验是药品质量检验工作中的首项任务，只有在药物鉴别无误的情况下，进行药物的杂质检查、含量测定等分析才有意义
  • 各药品项下的鉴别试验方法，均为用来证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而不是对未知物进行定性分析，这些试验方法虽有一定的专属性，但不足以确证其结构，因此不能赖以鉴别未知物
• 鉴别试验的项目
  • 性状
    • 外观：外观是对指药品的色泽和外表感观的规定，包括药品的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质
    • 溶解度：药品在不同溶剂中的近似溶解度在中国药典以“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”表示
    • 物理常数：物理常数是评价药品质量的主要指标之一，其结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映该药品的纯度，药典中收载的物理常数包括相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值和酸值等
      • 熔点、比旋度、吸收系数（在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数，有两种表示方式——摩尔吸收系数和百分吸收系数）
  • 一般鉴别试验
    • 定义：一般鉴别试验是依据某一药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪
    • 有机氟化物
    • 有机酸盐：水杨酸盐；酒石酸盐
    • 芳香第一胺类：取供试品约加稀盐酸、亚硝酸钠溶液和等体积的脲溶液，振摇1分钟，添加碱性β-萘酚试液数滴，生成由粉色到猩红色沉淀
    • 托烷生物碱类
    • 无机金属盐
      • 钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰显各离子的特征颜色（钠离子火焰显鲜黄色；钾离子火焰显紫色；钙离子火焰显砖红色；钡离子火焰显黄绿色，自绿色玻璃中透视，火焰显蓝色）
      • 铵盐
    • 无机酸根
      • 氯化物
        • 鉴别一：取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成；如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验
        • 鉴别二：取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即产生氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色
      • 硫酸盐
      • 硝酸盐
  • 专属鉴别试验
    • 药物的专属鉴别试验是证实某一种药物的依据，它根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪
• 鉴别方法
  • 药物的鉴别方法要求专属性强，耐用性好，灵敏度高，操作简便、快速等
  • 原料药的鉴别试验常用的方法有化学反应法、色谱法和光谱法等
    • 光学异构体药物的鉴别应具有专属性
    • 某些特殊品种，如果用以上三类方法尚不能鉴别时，可采用其他方法，如用粉末X射线衍射方法鉴别矿物药的不同晶型等
  • 制剂的鉴别试验，其方法要求同原料药，通常尽可能采用与原料药相同的方法，但需注意
    • 由于多数制剂中均加有辅料，应排除制剂中辅料的干扰
    • 有些制剂的药含量甚微，必须采用灵敏度高、专属性强、操作较简便的方法，如色谱法等
  • 化学鉴别法
    • 特点：反应迅速、现象明显；反应原理明确、与结构相似化合物的反应相区别；反应现象包括熔点变化、颜色变化、产生荧光、褪色、生成沉淀或气体
    • 呈色反应鉴别法；沉淀生成反应鉴别法；荧光反应鉴别法；气体生成反应鉴别法；使试剂褪色的鉴别法；测定生成物的熔点
  • 光谱鉴别法
    • 特点：分析速度较快；操作简便，部分样品不经任何化学处理，即可直接进行光谱分析；可同时测定多种化合物，省去复杂的分离操作
    • 紫外光谱鉴别法（UV）
      • 测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度；规定吸收波长和吸收系数法；规定吸收波长和吸收度比值法；经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性
    • 红外光谱鉴别法（IR）
      • 根据红外光通过物质时其分子内部原子间的相对振动和分子转动等信息鉴别化合物的方法，是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法，主要用于组分单一、结构明确的原料药
      • 试样制备方法——压片法、糊法、膜法、溶液法；原料药鉴别；制剂的鉴别；注意事项
    • 近红外光谱法（NIR）
      • 近红外光谱法系通过测定被测物质在近红外谱区780~2500nm（12800~4000cm-1）的特征光谱并利用适宜的化学计量方法提取相关信息后，对被测物质进行定性、定量分析的一种分析技术
      • 近红外光谱法具有快速、准确、对样品无破坏的监测特有，不仅可用于“离线”供试品的检验，还能直接对“在线”样品进行检测
    • 原子吸收法（AAS）
      • 原子吸收法是利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度可用进行定性、定量分析
    • 核磁共振法（NMR）
      • 核磁共振法是利用原子核的物理性质，采用当代先进的电子和计算机技术，用于各种分子物理和化学结构的研究；NMR仪在灵敏度、分辨率、动态范围等方面不断提高，NMR分析法在药学中的应用范围日益广泛
    • 质谱鉴别法（MS）
      • 质谱法是将被测物质离子化后，在高真空状态下按离子的质荷比（m/z）大小分离，而实现物质成分和结构分析的方法
      • 质谱广泛应用于药物的定性鉴别和定量测定
    • 粉末X射线衍射法
      • 化合物的晶体无论是单晶还是多晶，都有其特定的X射线衍射图
  • 色谱鉴别法
    • 色谱鉴别法是利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱性味（Rf值或保留时间）进行的鉴别试验，采用对照品（或经确证的已知药品）在相同的条件下进行色谱分离，并进行比较，根据两者保留性味和检测结构是否一致来验证药品的真伪
    • 此法操作较费时，一般在检查或含量测定项下已采用色谱法的情况下，采用此法鉴别
    • 薄层色谱鉴别法：供试品溶液和对照标准溶液，在同一薄层板上点样、展开与检视，供试品色谱图中所显半点的位置和颜色（或荧光）应与标准质色谱图的斑点一致；必要时化学药品可采用供试品溶液与标准溶液混合点样，展开，与标准物质相应斑点应为单一、紧密半点；选用与供试品化学结构相似药物对照品或杂质对照品，两者的比移值应不同
      • 单独试验TLC鉴别时，需要进行色谱系统适应性试验内容，对斑点的比移值（Rf）和分离效能进行考察，必要时进行灵敏度考察——Rf=基线至展开斑点中心的距离/基线至展开剂前沿的距离
      • TLC法除色谱行为外，还可将斑点颜色作为鉴别依据
    • 高效液相色谱和气相色谱鉴别法
  • 显微鉴别法
    • 显微鉴别主要用于中药及其制剂的鉴别，通常采用显微镜对药材的（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法
  • 生物学法
    • 生物学法就是利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法，主要用于抗生素、生化药物以及中药的鉴别，通常分为生物效应鉴别法和基因鉴别法两大类
    • 按照鉴定目的和对象不同，可分为免疫鉴别法、细胞生物学鉴别法、生物效价测定法、DNA遗传标记鉴别法、mRNA差异鉴别法等
    • 随着分子生物技术的迅速发展，DNA分子标记技术已越来越多地应用于中药材的鉴别研究，并且具有准确性高、重复性好的特点，它是指通过比较药材间DNA分子遗传多样性差异来鉴别遗传基源、确定学名的方法
  • 指纹图谱与特征图谱鉴别法
    • 建立中药指纹图谱的目的是通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面地控制中药质量地方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠
    • 其具体实践是采用指纹图谱模式，将中药内在物质特性转化为常规数据信息，用于中药鉴别和质量评价
• 鉴别试验的条件及方法验证
  • 影响鉴别试验的因素
    • 溶液的浓度：观察沉淀、颜色或测定各种光学参数
    • 溶液的温度：合适范围内
    • 溶液的酸碱度：处于稳定和易于观测的状态
    • 试验时间：一定时间
  • 鉴别方法的验证
    • 鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其他物质，因此用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性
    • 鉴别试验一般需要对方法的专属性和耐药性进行验证
    • 专属性：指其他成分（其他药物成分、杂质、降解产物、辅料等）存在的情况下，采用的鉴别方法能否正确地鉴别除被测物质的特性
    • 耐用性：是指测定条件发生小的变动时，测定结构受到的影响程度