MDD PDATR88 2023年6月 CSL

不同微生物超标调查的注意事项，主题专家 SME： 1.提供与检验方法和技术有关的技术协助支持调查； 2.设计调查测试； 3.根据需要，提供科学指导； 该专家可能在公司内部拥有分析或生产工艺相关的丰富经验和科学背景

PDA TR88 MDD

• 人员职责
  • 分析人员
    • 经过适当的培训，能够发现过程异常
      • 正确的观测条件、如光照等
      • 滤膜边缘长菌
      • 多个菌落叠在一起
      • 溶液丢弃前应确认结果是否符合质量标准
  • 微生物专家
    • 团队中必须有一名，QA、QC、集团、外部顾问都可以
    • 熟悉生产工艺和操作流程，经常参与生产监督
    • 在微生物调查方面有丰富的经验
    • 尽快参与调查，因为MDD的相关线索稍纵即逝
    • 即参与实验室调查，又参与生产调查，有权：
      • 1.进行生产区巡视，以发现可能与偏差直接相关的非常规情况和事件。
      • 2.查看相关检验结果，得到生产经理、主管、操作员和辅助人员的配合
      • 3.面谈员工、检查工艺设备、取微生物调查用的样品、审核变更和批记录。
      • 4.查看客户投诉记录。
      • 5.对于外购原料，加入对该物料供应商的审计团队，以进行调查审核
  • 实验室管理人员
    • 立即审核数据，看是否有低级错误，如计算错误、标准错误
    • 通知QCU及车间等，包括可能受到的影响及预期的完成实验室调查的时间
    • 组织调查原因，合理使用调查工具，如5why、鱼骨图
    • 确保原因是有证据支持的，否则，应假设结果是准确有效的
    • 合同实验室：质量协议应明确双方职责，包括一个调查时限表，并明确实验室调查的要求
  • 主题专家 SME
    • 1.提供与检验方法和技术有关的技术协助支持调查； 2.设计调查测试； 3.根据需要，提供科学指导；
    • 该专家可能在公司内部拥有分析或生产工艺相关的丰富经验和科学背景
  • QCU
    • 参与整个调查过程、协调、支持
    • 批准实验室测试计划
    • 如果是委托检验，负责质量协议签订
• 阶段一 实验室调查
  • 综述部分
    • MDD的原因通常不确定？
      • 可以由调查团队完善的调查来发现
      • 即使没有发现根因，可以根据调查过程确定可能原因
      • 没有时间调查 很少体现超标 不想体现真实的原因
    • 多问为什么。为什么假设原因不正确？为什么假设原因正确？
    • 没有发现明显错误时要立即开展实验室全面调查
    • Table4.0-1实验室调查的问题样板
      • 取样和/或运送到微生物实验室1.取样与样品转移
      • 检验程序2.无菌检查MDD实验室调查专用鱼骨图
    • 调查中注意：
      • 如果分析员认为在检验过程发生了错误，检验应终止，并且记录理由
      • 如可行，保留样品、溶液至调查结束
      • 调查性测试：
        • 调查性测试中产生的数据可以提供实际或潜在的产品污染或阳性对照处理不当或试管混淆的线索。
        • 调查性测试应该是明确定义和合理的、预先批准并有良好记录的。
        • 调查性分析不被认为是复验，不应用于物料放行，不能用于否定原结果。
      • 如果在阴性对照长菌，则应对这些分离菌进行鉴别以用于调查。
      • 由于微生物结果的可变性，调查不应局限于特定批次，而应延伸到在选定时间段内的更多批次、辅料或原料药。还应包括可能支持调查假设和/或调查结果的任何其他因素的历史趋势数据。
      • 如果确认是实验室原因，必须确认根本原因，以及影响了哪些批次的产品，并继续跟踪趋势
  • 微生物鉴定
    • 作用：提供调查线索
    • 鉴别系统局限性：数据库不一定全，不一定准
  • 不同实验具体的调查
    • 1. 无菌检查
      • 调查中应该注意的事项
        • 在摇晃或意外碰撞之前，把生长方式记录好：浑浊、菌膜、沉淀、小团？最好有照片，保留培养器
        • 建议对可疑的阳性培养器进行传代
          • 原始容器培养14天，如不确定是否是微生物，不要提前转接
          • 无菌条件下转接到新培养基；继续的培养方式需要考虑微生物生长的特点，如长得慢、厌氧层生长等；
          • 不建议分散培养基中肉眼可见的菌团，尤其是对于FTM，因为培养基的通气对于严格厌氧菌的存在可能是致命的
          • 如果传代培养不能回收微生物，则对可疑微生物生长的等分试样直接进行革兰氏染色。如果直接革兰氏染色没有检测到微生物存在，则浑浊可能是产品-培养基沉淀的结果，也可能是培养基长时间培养后的假象（例如，FTM中琼脂析出，造成培养基浑浊）。
        • 至少鉴定到种，如必要，至菌株
      • 药典可以重测的条件
        • 无菌检查设备的微生物监测数据显示有误（表4.2.1-1）。
        • 对有关测试期间使用的测试程序的审核发现有误（表4.2.1-2）
        • 阴性对照中发现有微生物生长（4.2.1.1节）
        • 在确定了从试验中分离出来的微生物鉴别后，该菌种（或这些菌种）的生长可以明确的归因于无菌检查过程中使用的材料和/或技术方面的错误（4.2.1.2节）。
        • 如果发现了微生物生长的证据，被检产品的无菌检查不符合，除非可以清楚地证明检验是由于与被检产品无关的原因而无效，否则被检产品不符合无菌检查。
      • 具体调查内容2.无菌检查MDD实验室调查专用鱼骨图1.取样与样品转移
        • 无菌检查设施显示有错误
        • 阴性对照长菌
        • 使用的检验程序显示有误
        • 基于微生物鉴别的决定
      • 解决无菌检查无效的CAPA
        • 无菌检查设施的微生物监测数据显示有误
          • 细化SOP，以确保所用培养基、稀释剂、物料和设备的无菌和促生长能力。
          • 使用杀孢子剂对有关区域进行清洁/消毒，并继续定期使用杀孢子剂。
          • 对人员进行无菌技术GMP和操作性能的再培训。
          • 建立或加强洁净室设备的预防维护保养和确认计划，并增加对人员和关键区域的微生物监测，以确保环境控制。
          • 验证和监控（利用每个灭菌周期的数据）用于洁净室设备灭菌的高压灭菌工艺。
        • 对相关检验过程中使用的检验程序的回顾发现错误
          • 建立适当的培养基配制、储存、库存控制和过期培养基销毁的SOP。
          • 在优化无菌处理和操作确认的同时，要求两名操作员进行，以减少疲劳。
          • 为传代培养活动建立单独的指定区域，并为此实验室区域的清洁和监控制定SOP。
        • 阴性对照中发现有微生物生长
          • 如阴性对照中发现阳性，需要第二个人，例如资历相当的人或实验室经理，观察污染情况。
          • 检查培养器的密封完整性，因为其可能在生产、储存或转移到微生物实验室的过程中损坏。
          • 回顾组件灭菌、物料转移、环境控制和检验过程中使用的无菌技术。
        • 在确定了检验中分离出来的微生物特性后，该菌种（或这些菌种）的生长可明确归因于无菌检查过程中使用的材料和/或技术的缺陷。
          • 当将检验失败产生的分离菌与人员和环境监测、以往的无菌性和培养基灌装失败对比时，采用相同或等同的鉴别技术来确认该失败检验中分离菌的身份。
    • 2. 细菌内毒素
      • 单管样品凝结、未到MVD的浓度凝结，都不算MDD
      • USP<1085>内毒素检查指南，“OOS结果和复检考虑”部分
        • 常规的调查项目
      • FDA内毒素问答的建议
        • 建立内毒素分析用样品储存、处理的规程
          • 防止吸附
          • 样品混合时，留好单独的样品以备复测
        • 为了评估产品污染的相对风险，定量检测可能比限度检测更可取，以跟踪产品质量趋势，并在超出质量标准导致产品失败之前识别和纠偏
        • FDA的检查技术指南：第40号 细菌内毒素/热原 FDA’s Inspection Technical Guides: No. 40 Bacterial Endotoxins/Pyrogens
          • 鲎试剂厂家会导致结果变化。因此，如果试剂来源发生任何变化，必须重新验证
          • 热原来源
            • 水；合成过程中最后阶段的水的微生物水平和内毒素水平影响较关键； 设备、包材：灭菌和清洗，储存潮湿包材会导致G-增加 原材料；发酵产品要格外注意纯化阶段微生物和热原的去除
    • 3. 生物指示剂
      • 失败的可能原因包括 严重的处理不当、灭菌参数中暴露不足、以及F0较低的灭菌循环中较高生物指示剂 D 值。
      • 生物指示剂在使用前是否按照生产商的建议进行储存和处理？
      • 生物指示剂是否按照法规预期和生产商的说明书进行培养？
      • 生物指示剂是否按照生产商规定的方式使用？
      • 被测产品是否使用了合适的生物指示剂（例如，安瓿生物指示剂用于液体产品）？
      • 如果将生物指示剂直接接种于溶液中或基质上，那么在该形式下使用的D值是多少？
      • PDA TR 51-气体和气相消毒工艺的生物指示剂：质量标准、生产、控制和使用
        • 灭菌循环审核内容
          • •确认灭菌参数
          • •审核与BIs提供的合格证书和内部测试数据的结果
          • 审核工艺记录以符合相关标准操作规程
          • •审查与杀孢子剂一起提供的合格证书
          • •设备校准数据的审核
          • •检查维护记录
          • •回顾以往周期的趋势
          • 审核温度和化学指标数据
        • 调查还应考虑到BI失败地点以及邻近和类似地点的以前的灭菌程序和历史。 可以在有问题的部位暴露多个BIs，并确定阳性的数量。 100%的阳性率可能表明灭菌条件的改变，或灭菌程序不稳定; 偶尔、随机位置的阳性能表明是由于BIs耐受性强。
          • 即使在合适的灭菌循环中，偶尔也会出现阳性的BIs。这样的异常结果可能并不意味着一个失败的灭菌循环。在首次验证和再验证程序中，可以使用适当的统计方法来支持接受这样的高耐受性BI的结果。
        • 初步调查内容 （部分需要供应商调查）
          • 在载体上的接种物的变化(体积和孢子计数)
          • 载体上接种物的纯度
          • 孢子群体间的基因型变异性
          • 聚合的孢子
          • 接种物中存在细胞/培养基碎片
          • 内包装中载体接种面的朝向
          • 载体的表面特性
          • 裸露的(即无包装)BIs处理(无菌的，带手套的手，UAF罩，以避免添加会堵塞接种物的油或污垢)
          • 包装材料的组成(在灭菌过程中未去除时)
          • BIs的存储条件
          • 在暴露之前，平衡载体上孢子的相对湿度
          • 在进行孢子计数时从载体释放孢子的方法
          • 被包装、载体吸附的灭菌气体(以及随后的排气)
          • BIs暴露到培养的时间
          • 培养培养基的组成，包括可能刺激/抑制受损孢子的萌发和后续生长的物质的存在
        • 第二部调查内容
          • 遗传补充-物种/菌株变异(基因型变异)
          • 生长/产孢培养基的组成(例如，二价阳离子的浓度变化，特别是Mn++和Ca++)
          • 孢子形成温度
          • 产孢期间的生长限制性营养素
          • 孢子的年龄
          • 储存孢子悬浮液的温度和温度波动
          • 悬浮介质的pH值
          • 悬浮介质的化学组成
    • 4. 模拟灌装
      • 培养基中微生物的生长可能包括任何轻微雾状、膜状形成、絮状聚集或沉淀。
      • 在打开容器进行传代之前的首要任务是：确定容器是否有任何可能的破坏培养基无菌性的缺陷。如，压接不充分、容器密封处泄露、或容器中可能威胁完整性的碎屑或裂缝。任何破损都应充分记录，如有可能，附上照片。
      • 让可以评估损坏程度的包装专家参与实验室调查可能会有所帮助，例如，进行物理化学完整性测试以确认损坏是否会导致微生物进入。
      • 任何分离菌应至少被鉴别到种，最好按菌株分型以帮助后续调查。
    • 5. 环境监控（实验室、取样有关问题）
      • 样品收集
        • 是否采用了正确的取样方法/技术？
        • 取样人员是否适当培训并具备资格？
        • 取样人员是否按照区域要求正确更衣？
        • 阴性对照是否处理得当？结果是否为阴性？
        • 是否使用了正确的棉签或接触碟？
      • 培养基处理
        • 培养基是否与预期的监测相适宜（种类、灭菌方式、包装）？
        • 培养基是否正确接收并储存完好？
        • 培养基是否进行了促生长？结果是否通过和批准？
        • 促生长试验是否支持在有效期内使用该批次？
        • 棉签、无菌稀释剂和液体培养基是否在有效期内？
      • 设备
        • 浮游菌采样器是否在当前校验效期内使用？
        • 施加到流速是否适当？
        • 取样过程中设备是否正常工作？
        • 设备电池是否充电？
        • 使用前取样头是否适当灭菌或消毒？
        • 设备是否适当处理且在使用过程中没有掉落？
      • 培养基培养
        • 培养时间和温度是否正确？
        • 在整个培养过程中培养箱温度是否在可接受范围内？
        • 在培养过程中是否发生任何设备报警或停电故障？
        • 样品是否被小心处理没有掉落？
      • 微生物鉴别
        • 评估污染是从何而来
    • 6. 公用系统
      • 制药用水调查发起要求：
        • 单个检测结果超过行动限。
        • 多个检测结果超过警戒限，从而表明有不良趋势。
        • 分离出生产的剂型不能有的控制菌。
      • 审核被测水样的采集和微生物检验，以确定任何潜在的取样和实验室错误。收集的数据应包括取样位置、样品容器、取样技术和任何与取样位置、循环系统或水系统、和水样采集人员相关的任何警戒限或行动限偏离。
      • 样品处置
        • 用于准备、储存、连接软管和取样装置到取样端的方法至关重要。应对每个使用点采用与生产工艺中相同的冲洗程序进行冲洗。
        • 应通过限制检验前的放置时间和控制储存温度来限制样品中微生物菌群的潜在变化；2+24h；在24小时都不可能检验的情况下（如，使用厂外的合同实验室），确认微生物样品的放置时间和储存条件尤为重要
        • 吸取样品检测前应该先混匀
      • 检验方法的评估
        • 耗材、试剂的无菌性
        • 灭菌时效
        • 培养基、缓冲液等有效期
        • 与膜或平皿上的离散菌落相比，融合性微生物生长可能表明设备受到污染
        • 化验员的头部、手和胳膊在被测物料上方气流路径中的位置（最好是在水平气流的层流罩中）可能也是微生物污染的一个来源
      • 人员的考虑
        • 见5.2.1（无菌阳性调查）3.无菌阳性时无菌车间的调查汇总
      • 鉴别
        • 可能提供污染源的线索
        • 最常见的水分离菌是革兰氏阴性、非发酵、杆状细菌，历史上被描述为假单胞菌，这可能是水系统内生物膜形成的指标。
        • 在制药用水系统中发现的在低离子强度/低碳条件下不能繁殖和存活的微生物可能表明样品受到污染或控制不充分或连接端口的样品装置和/或软管冲洗不充分。
          • 常见于人皮肤上的革兰氏阳性球菌，如表皮葡萄球菌，可暗示潜在的样品污染
          • 革兰氏阳性孢子形成菌，如芽孢杆菌或真菌枝孢菌，可暗示潜在的环境污染。
      • 趋势回顾
        • 回顾历史检验数据有利于确定不良趋势是否与个别使用点、回路和水系统有关。该信息也将有助于生产调查。
  • 总结
    • 找到根本原因，分离菌和来自检验环境相同的污染污染菌之间可能有直接联系
      • CAPA+重测
    • 找到可能的原因，但没有明确证据
      • 继续阶段II调查
    • 没有找到实验室的问题
      • 继续阶段II调查
• 阶段二生产调查
  • 一般注意事项
    • 每项生产调查都要都包括以下措施
      • QCU组织跨部门团队进行调查，微生物专家参与很重要
      • 详细记录调查内容， 包括每项调查完成时间，规定期限内完成，超期要申请
      • 明确识别偏差。明确偏差是什么，它是怎么超出限度的？尽可能具体、简明。
      • 决定在调查期间应停止哪些生产（如果有的话）。根据偏差的性质（例如，高微生物计数、设施损坏、微生物鉴别），调查组应考虑建议中止受影响区域的生产，直到纠正（例如，额外的清洁和消毒、更多环境取样）完成及调查结束。应记录所有证明控制偏差所采取的所有行动。
      • 保持清晰的沟通。面谈相关人员并根据需要修订调查。定期向管理层提供调查的更新情况，并确保调查团队成员充分获知并及时了解调查最新进展情况。
      • 检查偏差发生区域。在设施平面图上找出偏差位置并查看可能导致微生物污染的周围区域。考虑人流和物流、非常规事件、以及温湿度和空间压差偏离。
      • 寻找趋势。回顾之前相关调查进行评估。是否有不良趋势——相同的位置、共同的人员参与、反复出现的微生物、根本原因？如果发现不良趋势，应立即采取行动纠正问题。
      • 评估数据。应对生产或批记录进行全面审核，以确定在记录结果期间是否因有意或无意的人为错误导致数据的篡改或错误记录(35)。
      • 虽然SOP对有效管理调查至关重要，但其他工具可在识别偏差的可能原因上提供有价值的帮助，如头脑风暴、鱼骨图、FMEA/ HAACP、因果分析和5-why技术。
      • 确定影响范围内的所有批次。基于实验室调查发现，最初的调查范围是否需要扩展？调查批次不得放行。
      • 确定其是否为之前偏差的再次发生还是第一次发生的事件。是否有一样的微生物污染途径？之前的CAPA是否有效？
      • 确定潜在影响。该事件对设施中生产的其他批次可能有什么影响？该影响评估可包括原料、生产设备、或相同设施中的其他工艺线、公司内生产相同或相关产品的其他场地、以及已销售的产品。
      • 确定风险等级。对服用该药品的人可能有什么风险？在产品有效期内对其稳定性、安全性和有效性有何影响？
      • 确定所需的CAPA并制定执行计划。
  • 根本原因分析
    • 根因分析时建议使用鱼骨图，确保不遗漏
    • 充分考虑影响的范围，记录所有的潜在原因，即使不太可能是根本原因。例如，如果对原料和包装材料评估并确定其不是引起偏差的因素，则调查应反映出这一信息。这证明调查人员对这些物料作为污染源的潜在影响进行了尽职地调查之后排除它们作为潜在的根本原因
    • 表5.1-1 根本原因分析中考虑因素3.无菌阳性时无菌车间的调查汇总
    • 根本原因评估和跟踪考虑因素
      • 调查结果总结
        • 偏差的原因是什么？结论的确定程度有多少？
          • 根本原因：高度确定吗？
          • 最可能的原因：最有可能的原因？
          • 可能的原因：有可能但不是绝对的，已证明的原因？
          • 未知原因？
      • 影响评估
        • 基于有关微生物及其档案，对患者的风险是什么？对货架期内产品的质量、有效性和安全性有何影响？产品的无菌保障是否受影响？
        • 产品是哪种给药途径（口服、注射、外用、植入等）？对患者的风险是高、中还是低？
        • 该产品是否有特殊的目标患者群体（小儿、免疫缺陷的、术后、老年人）？
        • 该微生物是否有可能在产品中生存和生长？
        • 是否考虑了防腐效果、水活度、pH 值和营养来源等产品属性？
        • 如果该产品含有抗生素物质，是否对分离微生物的抗生素耐药性进行了确认？
        • 该微生物是否有可能产生有毒物质？即使没有发现该生物体对患者有健康风险，其是否会引起异味、粘度降低或褪色？
        • 该生物体是否能破坏产品的活性成分或组分，并潜在影响其效价或货架期？是否还有其他上市后的影响？
    • 确定CAPA考虑因素
      • 确定CAPA时，是否对解决方案进行了评估并与工艺所有者达成了共识以确保其被认可？ 除非为长期行动（例如资本支出和设施改造）提供充分的理由，否则 CAPA 的截止日期是否合理且时间线尽可能短？ 是否为每个行动和完成日期指定了负责人？
      • CAPA效果跟踪 延期要有申请
      • 警戒限和行动限是否适用于洁净级别和/或执行的生产工艺？
  • 具体考虑要点
    • 1. 无菌阳性调查3.无菌阳性时无菌车间的调查汇总
    • 2. 确定内毒素来源
      • 水系统和设施
        • 水系统是否在受控状态下运行？水系统是否有任何内毒素超标？水系统中是否回收到革兰氏阴性菌？
        • 生产设施中是否有任何条件可能利于革兰氏阴性菌的繁殖（例如，死水、存放不当的工艺设备、泵、软管或用于设备润滑的喷水瓶）？
        • 是否检查压缩空气或气体管线是否有水？
      • 原料和组分
        • 是否对原辅料内毒素进行了适当的检查？ 历史证据显示原料，尤其是自然来源的原料（即动物源或植物源物料）可能是内毒素的潜在来源。
        • 原料供应商是否报告了可能影响原料内毒素含量变更？
        • 所有产品接触的材料，包括工艺设备和内包材，是否适当清洁、除热原和存放，以确保其没有可检测到的内毒素？
      • 操作
        • 是否有可能导致MDD的工艺偏差发生或进行了生产变更（例如，使用纯化水代替注射用水淋洗无菌设备，水系统的滤芯没有定期更换）？
        • 生产过程中使用的隧道烘箱或内毒素去除柱或过滤设备，是否进行了验证？
        • 如果是CMO，是否进行过与公司产品物料接触的工艺的任何变更？
    • 3. 外购原料的调查
      • 该类调查特点
        • 制药企业可能无法全面获得原料供应商生产工艺的详细信息或访问生产场地进行调查，除非在质量协议中有要求。
        • 很多药用辅料为供应给其他非GMP行业的大宗商品。
        • 很多辅料供应商仅根据相关USP各论要求制定其质量标准，可能不包含微生物方面的要求。
      • 原料调查的其他考虑
        • 总体设计/储存
          • 是否为合成或矿物、植物或动物来源的成分？
          • 原料是粉状还是液体？
          • 是否包含防腐剂？如果是，是否进行防腐剂有效性检测或是否进行了化验？
          • 原料是否从待检正确放行？
          • 运输和储存期间温湿度条件是否维持良好？
        • 供应商/来源
          • 供应商或生产商最近是否有任何变更？
          • 是否执行了供应商资质确认计划？审计是否是最新的并通过？
          • 物料的历史情况如何？结果是否有趋势化？是否发现有偏离平均值的情况？
          • 是否基于预期用途完成了供应商和生产商风险评估？
          • 是否有跳批计划？如果有，是否应当中止该计划？
          • 供应商COA中的检验项目是否每年确认？
          • 生产商的质量标准是否符合药典各论？
        • 取样
          • 容器的尺寸如何？是从上部、中间和底部取样吗？
          • 物料接收后是否执行取样计划？
          • 样品混合吗？混合样可能降低最终结果。
          • 取样罩或房间是否定级？或是CNC？
          • 是否使用了适当的无菌取样装置和容器？
          • 对于无菌工艺产品： 如何获得样品？ 是否有随货样品，或者物料是否通过隔膜垫无菌取样？
          • 是否有用于微生物检测的物料或未使用的库存物料的留样？
          • 样品是否具有容器/批次代表性或在大宗物料中是否有潜在的污染件数？
    • 4. 包材调查
      • 让供应商尽早参与到调查中最好
      • 药用容器
        • 除了微生物项目外，尺寸和形状检查也很重要
          • 不圆、裂缝，模制玻璃可以追溯到工厂特定模具
        • 确认运输包装是否损坏；破损、潮湿
        • 热缩包装可以稳定容器并且减少颗粒污染
      • 药用密封件
        • 应特别考虑弹性体的半渗透性。对灭菌工艺验证的审核可能也是有用的
        • 不同类型的内包材，如未清洗、免清洗的和免灭菌的。在调查过程中应考虑这些不同的准备工作。
        • 调查其他内容同药用容器
      • 组件污染
        • 通常，与玻璃和弹性体生产相关的高热挤压工艺是不利于微生物的；然而，生产车间的环境控制通常不足以在分拣和包装货物期间维持这些条件。下游工艺控制是必须的，且必须包括严格的工艺控制
      • 容器包装完整性
        • 容器和密封件的物理变性、损坏和超出尺寸标准可能导致无菌产品通过微生物入侵变成非无菌。
    • 5. 环境监控
      • 总体考虑
        • 超标样品来源
          • 无菌产品洁净区
          • 非无菌产品洁净区
          • 低微生物负载洁净区
          • QC工作台或隔离器
        • 洁净区设计时注意：
          • 通过结合良好的设施设计、合理的布局、高效的人物流、以及健全的供应商控制来最大限度地减少污染的引入。
          • 采用成熟的工艺和设备控制减少生产过程中的污染
          • 建立和维持适当的卫生和个人防护用品
          • 制定适当的无菌技术和洁净室行为要求
          • 通过日常环境监测和分析确保受控状态
        • 洁净区潜在污染源
          • 药用辅料
            • 玉米淀粉、磷酸氢二钙、纯化水
          • 空气供应
            • 未过滤的空气、湍流空气、混合空气
          • 建筑材料
            • 塑料、木材、金属、环氧树脂
          • 设备
            • 零部件清洗器、软管、空气采样器、液压车、转运车
          • 消毒剂
            • 制备、效期、无菌（如适用）
          • 容器
            • 储物袋、废弃物收纳箱
          • 包装
            • 纸板箱、洁净服、纸
          • 用品
            • 拖把、抹布、标签、鞋套
      • 历史数据评估
        • 连续超过警戒、行动或污染频率
        • 在多个位置、监测类型或房间中分离出相同的微生物或相关微生物
        • 在与特定生产工艺相关的关键位置回收到的霉菌或革兰氏阴性或革兰氏阳性芽孢菌
      • 生产过程的评估
        • 环境监测调查的生产部分常见问题详见表5.1-1.3.无菌阳性时无菌车间的调查汇总
        • 温湿度、压差梯度、尘埃粒子水平、以及清洁和消毒活动的偏离会导致洁净区环境的微生物污染。
        • 微生物污染可以通过各种方式进入到洁净区
          • 真菌孢子和细菌芽孢在洁净室污染的最常见的原因是进入洁净室的物品导致的。
          • 其他途径包括工具、工艺设备、通信装置、箱子、推车、清洁和消毒设备、批记录
          • 纸板箱和其他已知会脱落颗粒的纤维材质的物料不得进入GMP生产区。
          • 进入关键无菌加工区域的物品：双层包装、脱包装、用杀孢子剂擦拭。
        • 设施的老化和维护水平会影响洁净区的污染率。天花板的墙面、高效过滤装置、洁净区地面、建筑材料、地漏系统和管道是老化设施需要关注的领域，可能需要维持定期维修。
        • 生产设施中的地漏需要定期用杀孢子剂进行消毒，以防止微生物繁殖。
      • 纠正生产中微生物污染的CAPA实例
        • 设施
          • 审核产品或组分接触的风险
          • 减少该位置的设备或物料
          • 升级设施表面抛光，即，地面、门、墙面和天花板
        • HVAC系统
          • 增加该区域的换气次数
          • 降低温湿度设置值
          • 修理或替换高效过滤器或外壳
          • 增加低处墙壁回风以消除微粒
        • 人员
          • 减少在受限区域内的操作员数量
          • 减少操作员干预的次数
          • 面谈生产人员，获得改进建议
          • 用改进的技术对操作人员进行再培训或再确认
      • 重新取样或调查性监测
        • 应在早期增加监测，以确定或排除假设的原因，避免浪费时间
        • 增加取样频率
          • 原计划中低频检测的位置
          • 现场调查期间发现的重要位置
            • 例如，墙壁而非地面回收到霉菌，可能要对附近的天花板、临近的墙面和相同墙面的其他部分进行取样，以确定真菌在房间内的分布程度。
          • 必要时更换培养基
    • 6. 模拟灌装中已确认的污染源的调查
      • 5.2.7-1 代表性微生物的可能来源
        • 洁净室人员
          • 黄体微球菌、莱氏微球菌、 表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、头葡萄球菌、沃氏葡萄球菌 结核硬脂棒状杆菌、乙型链球菌和痤疮丙酸杆菌
          • 白色念珠菌、近平滑假丝酵母菌、深红酵母、球拟酵母属、皮状丝孢酵母 石膏样小孢子菌、红色毛癣菌、链格孢菌属、镰刀菌属、拟青霉属、黄曲霉和青霉属。
        • 层流空气、压缩空气、灌装设备、设施门帘、墙和天花板
          • 芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属
          • 链格孢属、曲霉属（杂色曲霉、黑曲霉、烟曲霉）、枝孢属、镰刀菌属
        • 包装材料
          • 青霉属，曲霉属
        • 配制不当的消毒剂
          • 洋葱伯克霍尔德菌、恶臭假单胞菌/荧光假单胞菌和栖稻黄色单胞菌
          • 链格孢属、曲霉属、枝孢属
        • 转移至无菌灌装区的物料、手提袋和推车
          • 芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属
          • 链格孢属、曲霉属、枝孢属、镰刀菌属
      • 阳性瓶是在灌装操作中的位置
        • 灌装开始： 可能是灌装岗位罐装活塞或灌装针的无菌组装过程中的微生物污染导致的；
        • 灌装中间： 可能与人员干预有关，如清除传送带上倾倒小瓶、进行定期装量检查、或补充胶塞料斗；
        • 灌装结束： 可能与较差的无菌操作有关或操作疲倦的结果。
        • 有录像：查看培养基灌装的视频，确定是否发生了意外事件或干预，以及具体是何时被污染的。 无录像：应当有一个观察员记录所操作发生的时间，以便于调查。（可能会被提缺陷）
    • 7. 公用系统监控
      • 水系统
        • 调查团队
          • 应熟悉与水系统设计、安装、操作、使用和维护有关的潜在风险。以及系统确认和监测中的数值和限度。
        • 关于取样计划
          • 监测计划应明确取样位点和频次以及检测项目。
          • 计划应包括整个系统，水源、制备、分配、使用点
          • 在处理系统前后进行的检测，如炭床、去离子器、紫外灯和反渗透系统，可以提供数据来评估它们是否继续按照预期的功能运行。
          • 应仔细选择监测点以确保它们能够提供系统控制相关的预期信息，包括支持MDD调查的信息。
          • 取样计划应反映确认期间集中取样的结果、最近的历史数据、风险因素和降低风险措施。
          • 定期检测化学项目，化学结果可作为MDD调查的参考
        • 调查中注意到点
          • 关注MDD样品的位置和时间
            • 如果发现多个相同类型和水平的偏差，则更有可能是一个影响整个系统的原因。
            • 如果偏差与其他同期样品的结果不一致，可能会与样品位点或取样或检验有关的原因。
          • 考虑系统的设计、安装、操作、维护、变更历史和使用相关的因素。监测历史（包括以往偏差调查、相关CAPA和该系统典型的微生物菌群）可以提供有用的参考。
          • 菌种鉴别（仅限微生物计数）
            • 能在水中生长并形成生物膜的菌可能是一组原因
            • 不能在水中生长繁殖的菌是另一组原因，可能与环境污染有关。
          • 饮用水来源
            • 由于融雪径流或枯水期引起的季节变化，饮用水的质量可能受季节变化的影响。
            • 农业或工业水可能进入地表水源或含水层。老化的基础设施可能会增加污染通过受损的总水管进入供水系统的机会。
            • 通过卡车运送的水会带来各种各种的风险，这些风险可能因每天和每卡车而异。
          • 系统边界与死角
            • 呼吸滤器使用与维护
            • 垫圈大小
            • 不良焊接与不规则表面
            • 分支长度与管径比值
          • 对系统运行物理参数和非微生物监测结果的回顾
            • 温度、流速、压力；以及炭床、去离子器和反渗透系统的其他运行参数。
            • 硬度、电导率和总有机碳的线上测试
            • 水的利用率影响水在系统中的停滞时间
          • 对常规和纠正性维护记录的回顾审核。
            • 侵入式的维护会增加污染的风险，所以应尽可能提前制定措施，减少这些风险并使系统恢复运行。
            • 关键部件的定期更换，如储罐上的密封部件和呼吸过滤器
            • 考虑耐用部件（如管道）的磨损和损坏的可能性。管道可能随着时间的推移变薄，可能由于意外事件（如水压冲击）导致发生损坏。漏水的部位应及时修理以减少污染的机会；然而，偏差调查应认识到，并不是所有的泄露都很容易被发现，例如，换热器管的冷却水的微小泄露。
          • 取样和使用点的操作（尤其是偏差与其他点的结果不一致时）
            • 取样（和使用）前的冲洗对于物理去除软管、取样装置或样品口上的微生物很重要
            • 使用程序应确保水系统与下游使用点之间的阀门的使用不会产生死角。
            • 软管不用时应移走并以排水畅通的方式存放。
      • 压缩气体
        • 水分多
        • 压缩空气过滤不彻底
        • 即使4Q确认符合要求，但在其建设过程中使用的材料可能包含非预期的缺陷（即，焊接不良或钝化不完全）以及润滑脂和油的引入。
        • 随着时间的推移，金属和塑料可能会变质，导致管道材料或管道连接部件（如压力表、截止阀）出现缺口或泄露。

MDD调查流程,以无菌检查为例

• 组建调查团队
  • 实验室调查
    • CAPA后复测
  • 取样调查
    • CAPA后复测
    • 原因未知
  • 生产调查
    • CAPA后复测
    • 产品不合格
      • 评估其他批次
        • 不影响
        • 召回、改判
    • 原因未知
• 附加测试
  • 原样测试 重新取样
    • CAPA后复测
    • 报告所有结果
      • QA判定产品是否放行
• 调查测试