制药洁净区环境监控评估方法

根据Biophorum 关于环境监控的指南总结，把网格分成不同的功能区，将网格分为不同功能区，评估时按功能区逐个网格分析。

环境监控评估

• EU 附录一 2023
  • 关于风险评估
    • Risk assessments should be performed in order to establish a comprehensive environmental monitoring programme, i.e. sampling locations, frequency of monitoring，monitoring methods and incubation conditions (e.g. time, temperature(s), aerobic and/or anaerobic conditions). 应通过风险评估建立全面的环境监测计划，即取样位置、监测频率，监测方法和培养条件（例如时间、温度、有氧和/或无氧条件）。
    • These risk assessments should be conducted based on detailed knowledge of; the process inputs and final product, the facility, equipment, the criticality of specific processes and steps, the operations involved, routine monitoring data, monitoring data obtained during qualification and knowledge of typical microbial flora isolated from the environment. 风险评估应该基于以下内容的详细知识开展：工艺输入与成品、厂房、设备、特定工艺和步骤的关键程度、涉及的操作、常规监测的数据、级别确认时获得的监测数据和环境中所发现的微生物菌群。
    • The risk assessment should include the determination of critical monitoring locations, those locations where the presence of microorganisms during processing may have an impact upon product quality, (e.g. grade A, aseptic processing areas and the grade B areas that directly interface with the grade A area). Consideration of other information such as air visualization studies should also be included. 风险评估应确定关键监测位置，这些位置在工艺过程中出现的微生物可能影响产品的质量（例如A级、无菌加工区域、作为A级背景的B级区域）。还应考虑其他信息，如气流可视化研究。
    • These risk assessments should be reviewed regularly in order to confirm the effectiveness of the site’s environmental monitoring programme. The monitoring programme should be considered in the overall context of the trend analysis and the CCS for the site. 风险评估应定期回顾，以确认环境监测计划的有效性，监测计划应在趋势分析和污染控制策略CCS的整体背景下综合考虑。
  • 具体的取样要求
• PDA TR 13
  • 生命周期法
    • 使用前：新设施、区域启用前，评估取样点、取样类型、取样量、取样频率，用于EMPQ
      • 定义工艺、人物流等，按网格法分网格
        • 现场评估
          • 风险识别
            • 风险分级/评估
              • 确定取样点、取样方法、频率；确定警戒限、行动限
                • EMPQ
                  • 数据评估 ，增减日常监控的取样点
    • 使用中：在常规EM和批次相关EM计划前，可能需要调整（增加或减少）；变更后（工艺变更、厂房变更等）重新评估
      • 数据评估与趋势分析 （如每年）
        • 若系统不符合要求就调整后进行EMPQ
    • 设备退役时，可能需要再评估，以证明EM控制一直合理
  • 风险评估的启动流程
    • 建立团队：风险协调员+微生物+CCS+公用工程+QC+QA+生产
    • 定义范围：一个房间？一个隔离器？整条生产线？
    • 全面了解工艺流程、人物流、废物流，绘制流程图纸
    • 选择使用的风险管理工具
      • FMEA故障模式和影响分析
      • HACCP危害分析和关键控制点
      • BioHorum EM评估
        • grid by grid assessment
          • •A级0.5m²
          • •B、C、D级为4.0m²
            • • For grades B, C and D, when room surface area is <=100m 2 : N° of grids = room surface area/4.0m²
            • • For grades B, C and D, when room surface area is > 100m²: N° of grids = 25 + ((surface area – 100)/9.0m²)
          • multi-level grids
            • 多层设施，每层单独分网格
          • 这里的grid和ISO14644不同，后者用于OQ时的尘埃粒子采样点数量
        • grouping grids into functional sections
          • 将网格分为不同功能区，评估时按功能区逐个网格分析
            • A:上料 灌装 加塞 出料 冻干装载
            • B:灭菌器卸载、走廊
            • CD：清洗区、配料区、过滤区、记录区、发酵区等
        • factors to assess the risk of contamination
          • 1.设备和表面是否适合清洁和消毒
            • 1完全能清洁（如不锈钢平台） 经验证的CIP SIP或表面非常容易清洁消毒
            • 2完全可达，但有限制，如难以到达角落和/或复杂的细节(如槽，孔，穿孔的桌子和移动部件)。
            • 4 限制较多(难以到达和复杂或部分或完全闭塞(如传送带)。
          • 2.人员的存在和流动
            • 网格是在一个屏障系统内，通过手套进行干预 A级(背景)、B级、C级、D级:在整个生产过程中，网格没有常规活动或人员流动。
            • A级, A级(背景)，B, C, D：在生产运行期间，少量*人穿过网格，和/或一些人因工艺相关的活动停留。网格位于辅助房间内，用于人员流动，没有额外活动(例如，没有额外活动的走廊、过渡气闸)。
              • *数量少:在A级和B级中，这将少于流程最大验证人数的一半;在C级和D级中，这还不到流程或活动所需人员的一半。
            • 等级A、A(背景)、B、C、D:在生产运行期间，许多**人经过网格，并且/或许多**人因流程相关的活动或与网格相关的活动而停留。
              • **许多:在A级和B级中，这将是最大验证人数的50-100%;在C级和D级(或A级和B级房间没有经过验证的最大人数)，这是活动过程所需工作人员的一半或更多。
                • 即根据预期设计或工艺确定人数
          • 3.物流
            • 该区域没有常规的物料运输，或运输是自动化的(例如，房间的一个角落，在那里没有理由放材料)
            • A级:无直接人员干预。材料的引入是常规的，通过alpha/beta接口或转移是通过封闭的RABS/隔离器中的手套端口； B级、C级和D级:有时物料/设备在转运到另一地点的过程中暂时出现在网格中，但不是专用于物流的网格。
            • A级 通过无菌灌装线的开口人工引入物料，要求人员直接操作；B级、C级和D级:该区域被指定用于物品运输和/或作为常规工艺的一部分放置/使用物资/设备。
          • 4.接近暴露的产品或直接接触产品的材料
            • 大于60cm
            • 30-60cm之间
            • 小于30㎝
          • 5.人员的干预/操作及其复杂性
            • • Relatively short duration持续时间相对较短 • Frequently repeated by operators according to a standard依据SOP频繁的重复 • Easy to perform typically only one person and/or automated容易操作，通常是一个人或自动化 • Easy for person to handle tools and manipulate the equipment便于人员操作工具或设备
              • • Weighing of excipients辅料称量 • Harvesting filler press （收获） • Purification – open product loading纯化-打开产品装载 • Storage储存 • Aseptic connections无菌连接 • Micro-fluidization（均质） • Taking sample via a closed system (e.g. novaseptum)通过封闭系统采集样本 • Pooling混合 • Loading vials理瓶 • Filter testing滤芯测试 • Buffer or media compounding (relatively short duration, automated, small)缓冲液或培养基混合，相对短时间，自动，规模小 • Cleaning equipment materials (small parts, e.g. filling needle)设备材料清洁，小部件，如灌装针 • Packaging equipment/materials (e.g. simple bag) 包装设备/物料（如简单包装） • Assembly/disassembly of equipment (e.g. connecting a tube)（设备的装配与拆卸（如接管） • Capping vials (automated)自动轧盖 • Thawing (e.g. vials for cell culture, incubator)解冻（如细胞管） • Material movement/disinfection of materials (automated)物料移动/消毒剂
            • Longer duration持续时间长 • Often manually performed经常手工操作 • Added degree of difficulty due to size and weight of equipment由于设备的重量或增加了难度 • Multiple steps多个步骤
              • Examples:例子 • Buffer or media compounding (relatively longer duration, manual)缓冲液或培养基混合（相对长的时间，手动） • Cleaning equipment materials (manual cleaning)手动清洗设备/材料 • Packaging equipment/materials (e.g. multiple tubing connections)包装设备材料（如多管连接） • Assembly/disassembly of equipment (e.g. centrifuge assembly)安装拆卸设备，如离心机 • Capping vials (manual)手动加盖 • Thawing (e.g. vials for cell culture, water bath)解冻，如细胞培养瓶水浴 • Material movement/disinfection of materials (manual)手动物料移动、物料消毒
            • • Requires higher degree of skill/many process steps要求较高的技巧，许多工艺步骤 • Few people involved少数人参与 • Larger and/or heavier equipment and tools较大或较重的设备或工具 • More complex equipment irrespective of size 更复杂的设备，无论大小 • Weight and/or volume of raw and intermediate materials 原料或中间体称重或量取 • Manual手动 • Harder to detect/correct errors 难以发现/纠正错误
              • • Assembly/disassembly of equipment (e.g. single-use bioreactor assembly, multiple tubing connections, preparation of vessels with spray ball)设备的组装/拆卸(例如，一次性生物反应器组装，多管连接，用喷雾球制备容器) • Chromatography column packing色谱柱包装 • Unloading centrifuge卸载离心机 • Wet operations (e.g. equipment washing)湿操作 • Setup of filing line灌装线组装
          • 6.干预/工艺操作的频率。
            • 无干预或极少干预/工艺操作(平均每批或每班<=1次*)
            • 偶尔干预/工艺操作(平均每批或班次>1但<=5 *)。
            • 多重干预/工艺操作(平均每批>5)，特别是在灌装线最关键的区域(例如灌装和加塞区域)。
        • the scoring system
          • 14种可能的总分
            • 1-16低风险
            • 32-256中风险
            • 512-8192高风险
        • additional considerations
          • 烟雾流型
          • 空调OQ中尘埃粒子较高的区域
          • 网格中已采取控制措施来降低污染，如自动去污染、使用屏障系统、清洁隐藏的区域
          • 历史数据：中低风险区域超标（已经投入使用的灌装线/洁净区）
          • 考虑有微生物增殖风险的位置(如水槽、排水道、湿面、洒水系统、安全淋浴，如果适用)
        • recommendations on frequency of sampling and methods of sampling
          • 取样方法特性
            • 浮游菌
              • 活动时间短、人员移动（如干预设备移动人员/机器人移动）等可能造成湍流的位置
              • 建议在无菌区域靠近关键工艺步骤(如填充和加塞)的区域，以及有复杂干预措施的区域
            • 沉降菌
              • 用于连续监测和局部湍流对产品的潜在影响
              • 建议在无菌区域中，在与产品接触的部件或内包材暴露在环境中的时间较长(例如塞斗、振动碗、转盘)的区域
            • 尘埃粒子
              • 推荐用于靠近产品关键位置和关键操作的位置，如加塞和填充。在所有A级区域，应使用固定粒子计数器的连续尘埃粒子监测来监测无菌工艺
            • 表面菌
              • A级:产品关键位置、难以消毒的表面(手动消毒)、与B级的屏障和隔离器/RABS手套
              • 其他等级：略
              • 手套：建议监控所有使用过的rabs或隔离器手套
          • 选择取样方法和取样位置的原则
            • EMPQ期间，中高风险必须取样
            • 日常监测的频率和数量可以优化，如专注于高风险网格和EMPQ期间有菌生长的区域
            • EMPQ期间低风险网课可以取样，要看哪些低风险的网格可以提供环境控制相关的最佳数据
            • 逐条线评估；通常，隔离器的监测少于A级监测
            • 根据FDA的规定，A级区域的微生物和尘埃粒子监控应在工作地点30厘米内进行，最好是在工作高度。
            • “污染进入点”的表面菌取样也遵循30CM的原则；如手套端口、门、进出料口、不同功能区域的端口
            • 开放式的RABS灌装或原料药生产后或组装后，应按照A级标准监控人员菌
            • 必须在生产活动结束结束后进行表面菌取样，除非有合理理由
            • 对于中风险网格，应该根据EMPQ或历史数据减少取样计划
            • Following successful EMPQ cycle and cleanroom validation, the EM program will switch to routine monitoring. A determination must be made as to which sample locations will remain for the routine program. It is recommended to maintain sampling locations in higher-risk grids. There may have been cases within the EMPQ where more locations were added to a grid than would be needed to adequately monitor a grid in routine operations, so specific locations may be removed, or the frequency of monitoring may be reduced, based on an assessment of the obtained EMPQ data and RA outcome. Consideration can also be given to surrounding grids to create sections that are captured by individual samples, as applicable.在EMPQ周期和洁净室验证成功后，EM程序将转为常规监测。必须确定哪些取样位置将保留用于常规程序。建议在风险较高的网格中保留采样位置。在EMPQ内，可能存在这样的情况，即添加到一个网格的位置比常规操作中充分监测一个网格所需的位置多，因此根据对所获得的EMPQ数据和RA结局的评估，特定位置可能被删除，或监测频率可能降低。也可以考虑使用周围的网格来创建由单个样本捕获的切片(如适用)
            • 低风险位置通常不需要监测
            • 无论风险属于什么基本，EMPQ中结果超预期或超过行动限都要继续监测；只有低风险的区域需要一些位置来证明清洁程序和洁净区维护的有效性
            • 取样计划应定期检查，特别是变更过程中，已确定风险评估是否需要调整
            • 房间按不同洁净级别使用，那么建议按高级别进行PQ和日常监测
            • 移动的设备，应在所有网格内进行评估，评分因素可能因活动不同而不同，如可清洁性评分依据设备在哪里存放，与产品的接近程度依据设备被用的开发工艺或产品暴露处。
          • 基于洁净级别，建议的最低取样标准
            • A
              • 关键操作期间，尘埃粒子持续监控
              • 关键工序，包括组织期间，进行微生物空气监测，考虑新的快速检测方法
              • To determine if passive and/or active air monitoring is to be used, the respective risks of the cleanroom concept should be considered (e.g. isolator, RABS, UDF cabinet)为了确定是否使用沉降菌和/或浮游菌监测，应考虑洁净室概念的各自风险(例如隔离器、RABS、单向流工作台)
              • 表面菌在操作结束后，或每批后进行
            • A级送风
              • 再确认是和定期在日常操作期间进行，目的是为了确认HEPA过滤后的空气质量
              • 额外的操作相关的测试，如表面菌，根据所进行的操作和A级送风的基本确定
            • B
              • 作为A级背景的B级：至少每天检测微生物和尘埃粒子
              • 批次或周期结束后进行表面菌检测
              • 若无A级操作时，频率应基于操作的关键性确定，最少每周一次
              • 与A级房间相邻的房间，如走廊、储藏室、气锁间至少每周检测一次
            • C
              • 产品开放操作的房间，如产品离心后收货，称量，或与产品接触的部件准备的房间
              • 倾向于在产品处理发生时进行环境监控
              • 其他操作区域，如走廊、物料气锁间、人员气锁间、储藏间，每周轮流监控， 或可以放宽至每月一次
            • D
              • 至少每月一次
            • 厌氧测试
              • 基于工艺，建议有书面文件说明监测或不检测的原因
          • EM中操作上的限制可能导致不能取样
            • 物理空间限制
            • 干预可能增加污染风险，如越过漏斗，任何监测都不用增加污染风险
            • 取样点不应被打扰，包括初始气流
          • 基于评分的最少监测原则
            • If functional sections have been defined, each functional section should include a selected combination of the following monitoring methods:每一个功能区都要有选自以下四种取样方法的组合
              • 粒子
              • 沉降菌
              • 浮游菌
              • 表面菌
            • 如果没有分功能区，如小的房间，可以看做一个功能区，如果有两个级别，如C+A，算两个功能区
            • 通常
              • EMPQ期间，每个功能区至少一个微生物（沉降或浮游）一个尘埃粒子一个表面菌监测，对于功能区，每个网格应按一下原则确定监控原则：
                • 低风险
                  • EMPQ中不强制，可选
                  • 日常监控中不强制
                • 中风险
                  • EMPQ中至少包括四种方法中的一种
                  • 日常监控中，取决于EMPQ结果（通常比EMPQ中少）；若超过预先确定的限制，则建议监测
                • 高风险
                  • EMPQ和日常监控中，至少四选一；除非同一个功能区、相邻网格中有取样点，采样位置可以在两个相邻网格之间。
                  • 建议在初始确认 中，有高评分的功能区要取微生物和尘埃粒子，若采取的控制措施不能降低污染风险，那么日常监控中也盈亏包括这些点
                  • 取样类型取决于网格内的操作或生产线/工艺配制
        • examples
          • 组建跨学科团队 ，成员应接受过风险评估工具的培训
            • 无菌保证或有微生物背景的SME
            • QA
            • 验证
            • 生产
            • QC
            • 工程
          • 划分网格，给网格编号，描述各个网格的活动，和现有的降低污染的措施
            • 表14是对应的例子
          • 画出工艺流程
            • 要有组织和干预的SOP信息，如烟雾流型、灌装线照片和人员路线
            • 在图纸上或最好在现场梳理工艺流程，重点关注清洁通道、人物流、产品暴露、干预等等
          • 将网格分成功能区
            • 如灌装区、加塞区
          • 按6因素打分
            • 看表15-16
          • 收集可能影响评估的其他因素
          • 逐功能区、逐网格分析相应活动，以确定取样点和取样位置
            • 看表17和图4
  • 警戒限和行动限
    • 根据法规指南要求制定行动限
    • 根据历史数据制定警戒限
      • 新系统警戒限设定为行动限的50-60，收集一年数据或100个数据后再评估（卓越绩效完整指南）
    • USP 1116，使用污染回收率评价洁净区好坏
    • 设置方法
      • nonparametirc approach 非参数法
        • 样本数大于1000
        • 警戒限：99.9的数值在警戒限以下，超过后触发调查
        • 行动限：日常检测中99.99%的数值在行动限以下。超过后表面工艺控制或系统出现显著偏离
      • nonparametric tolerance limit approach非参数公差极限法
      • cutoff value approach截止值法
    • 什么是data piont
    • 子主题 6
• 自由主题
• 现场评估应考虑的因素
  • 法规指南
  • 高风险点
    • 产品暴露位置，如灌装针、胶塞料斗
    • 与干预有关的活动
    • 难清洁消毒或难接近
    • 活动频繁，如触摸屏，镊子，门把手
    • 人流量大
    • 物流量大
  • 划分网格，覆盖整个区域
  • 未纳入EM计划的位置做合理说明，如有某些限制，或可替代的点/最差条件已覆盖
  • EMPQ数据分析
  • 厌氧微生物
    • 基于风险定期或调查时监测，注意用于发现一些微需氧菌
    • 通常氮气或二氧化碳吹扫不会产生厌氧条件，但气体得定期监测
    • 厌氧监测频率可能不同于常规监测，出现的重要原因是更衣技术差，但有氧监测足以检测到这种情况。无菌检测出厌氧菌时应考虑厌氧环境监控
  • 流型

Biophorum EM评估

• 分网格
  • •A级0.5m²
  • •B、C、D级为4.0m²
    • • For grades B, C and D, when room surface area is <=100m 2 : N° of grids = room surface area/4.0m²
    • • For grades B, C and D, when room surface area is > 100m²: N° of grids = 25 + ((surface area – 100)/9.0m²)
  • multi-level grids
    • 多层设施，每层单独分网格
  • 这里的grid和ISO14644不同，后者用于OQ时的尘埃粒子采样点数量
• 把网格分成不同的功能区
  • 将网格分为不同功能区，评估时按功能区逐个网格分析
    • A:上料 灌装 加塞 出料 冻干装载
    • B:灭菌器卸载、走廊
    • CD：清洗区、配料区、过滤区、记录区、发酵区等
• 污染风险评估的六因素
  • 1.设备和表面是否适合清洁和消毒
    • 1完全能清洁（如不锈钢平台） 经验证的CIP SIP或表面非常容易清洁消毒
    • 2完全可达，但有限制，如难以到达角落和/或复杂的细节(如槽，孔，穿孔的桌子和移动部件)。
    • 4 限制较多(难以到达和复杂或部分或完全闭塞(如传送带)。
  • 2.人员的存在和流动
    • 网格是在一个屏障系统内，通过手套进行干预 A级(背景)、B级、C级、D级:在整个生产过程中，网格没有常规活动或人员流动。
    • A级, A级(背景)，B, C, D：在生产运行期间，少量*人穿过网格，和/或一些人因工艺相关的活动停留。网格位于辅助房间内，用于人员流动，没有额外活动(例如，没有额外活动的走廊、过渡气闸)。
      • *数量少:在A级和B级中，这将少于流程最大验证人数的一半;在C级和D级中，这还不到流程或活动所需人员的一半。
    • 等级A、A(背景)、B、C、D:在生产运行期间，许多**人经过网格，并且/或许多**人因流程相关的活动或与网格相关的活动而停留。
      • **许多:在A级和B级中，这将是最大验证人数的50-100%;在C级和D级(或A级和B级房间没有经过验证的最大人数)，这是活动过程所需工作人员的一半或更多。
        • 即根据预期设计或工艺确定人数
  • 3.物流
    • 该区域没有常规的物料运输，或运输是自动化的(例如，房间的一个角落，在那里没有理由放材料)
    • A级:无直接人员干预。材料的引入是常规的，通过alpha/beta接口或转移是通过封闭的RABS/隔离器中的手套端口； B级、C级和D级:有时物料/设备在转运到另一地点的过程中暂时出现在网格中，但不是专用于物流的网格。
    • A级 通过无菌灌装线的开口人工引入物料，要求人员直接操作；B级、C级和D级:该区域被指定用于物品运输和/或作为常规工艺的一部分放置/使用物资/设备。
  • 4.接近暴露的产品或直接接触产品的材料
    • 大于60cm
    • 30-60cm之间
    • 小于30㎝
  • 5.人员的干预/操作及其复杂性
    • • Relatively short duration持续时间相对较短 • Frequently repeated by operators according to a standard依据SOP频繁的重复 • Easy to perform typically only one person and/or automated容易操作，通常是一个人或自动化 • Easy for person to handle tools and manipulate the equipment便于人员操作工具或设备
      • • Weighing of excipients辅料称量 • Harvesting filler press （收获） • Purification – open product loading纯化-打开产品装载 • Storage储存 • Aseptic connections无菌连接 • Micro-fluidization（均质） • Taking sample via a closed system (e.g. novaseptum)通过封闭系统采集样本 • Pooling混合 • Loading vials理瓶 • Filter testing滤芯测试 • Buffer or media compounding (relatively short duration, automated, small)缓冲液或培养基混合，相对短时间，自动，规模小 • Cleaning equipment materials (small parts, e.g. filling needle)设备材料清洁，小部件，如灌装针 • Packaging equipment/materials (e.g. simple bag) 包装设备/物料（如简单包装） • Assembly/disassembly of equipment (e.g. connecting a tube)（设备的装配与拆卸（如接管） • Capping vials (automated)自动轧盖 • Thawing (e.g. vials for cell culture, incubator)解冻（如细胞管） • Material movement/disinfection of materials (automated)物料移动/消毒剂
    • Longer duration持续时间长 • Often manually performed经常手工操作 • Added degree of difficulty due to size and weight of equipment由于设备的重量或增加了难度 • Multiple steps多个步骤
      • Examples:例子 • Buffer or media compounding (relatively longer duration, manual)缓冲液或培养基混合（相对长的时间，手动） • Cleaning equipment materials (manual cleaning)手动清洗设备/材料 • Packaging equipment/materials (e.g. multiple tubing connections)包装设备材料（如多管连接） • Assembly/disassembly of equipment (e.g. centrifuge assembly)安装拆卸设备，如离心机 • Capping vials (manual)手动加盖 • Thawing (e.g. vials for cell culture, water bath)解冻，如细胞培养瓶水浴 • Material movement/disinfection of materials (manual)手动物料移动、物料消毒
    • • Requires higher degree of skill/many process steps要求较高的技巧，许多工艺步骤 • Few people involved少数人参与 • Larger and/or heavier equipment and tools较大或较重的设备或工具 • More complex equipment irrespective of size 更复杂的设备，无论大小 • Weight and/or volume of raw and intermediate materials 原料或中间体称重或量取 • Manual手动 • Harder to detect/correct errors 难以发现/纠正错误
      • • Assembly/disassembly of equipment (e.g. single-use bioreactor assembly, multiple tubing connections, preparation of vessels with spray ball)设备的组装/拆卸(例如，一次性生物反应器组装，多管连接，用喷雾球制备容器) • Chromatography column packing色谱柱包装 • Unloading centrifuge卸载离心机 • Wet operations (e.g. equipment washing)湿操作 • Setup of filing line灌装线组装
  • 6.干预/工艺操作的频率。
    • 无干预或极少干预/工艺操作(平均每批或每班<=1次*)
    • 偶尔干预/工艺操作(平均每批或班次>1但<=5 *)。
    • 多重干预/工艺操作(平均每批>5)，特别是在灌装线最关键的区域(例如灌装和加塞区域)。
• 评分系统
  • 14种可能的总分
    • 1-16低风险
    • 32-256中风险
    • 512-8192高风险
• 额外考虑的因素
  • 烟雾流型
  • 空调OQ中尘埃粒子较高的区域
  • 网格中已采取控制措施来降低污染，如自动去污染、使用屏障系统、清洁隐藏的区域
  • 历史数据：中低风险区域超标（已经投入使用的灌装线/洁净区）
  • 考虑有微生物增殖风险的位置(如水槽、排水道、湿面、洒水系统、安全淋浴，如果适用)
• 建议的取样频率和取样方法
  • 取样方法特性
    • 浮游菌
      • 活动时间短、人员移动（如干预设备移动人员/机器人移动）等可能造成湍流的位置
      • 建议在无菌区域靠近关键工艺步骤(如填充和加塞)的区域，以及有复杂干预措施的区域
    • 沉降菌
      • 用于连续监测和局部湍流对产品的潜在影响
      • 建议在无菌区域中，在与产品接触的部件或内包材暴露在环境中的时间较长(例如塞斗、振动碗、转盘)的区域
    • 尘埃粒子
      • 推荐用于靠近产品关键位置和关键操作的位置，如加塞和填充。在所有A级区域，应使用固定粒子计数器的连续尘埃粒子监测来监测无菌工艺
    • 表面菌
      • A级:产品关键位置、难以消毒的表面(手动消毒)、与B级的屏障和隔离器/RABS手套
      • 其他等级：略
      • 手套：建议监控所有使用过的rabs或隔离器手套
  • 选择取样方法和取样位置的原则
    • EMPQ期间，中高风险必须取样
    • 日常监测的频率和数量可以优化，如专注于高风险网格和EMPQ期间有菌生长的区域
    • EMPQ期间低风险网课可以取样，要看哪些低风险的网格可以提供环境控制相关的最佳数据
    • 逐条线评估；通常，隔离器的监测少于A级监测
    • 根据FDA的规定，A级区域的微生物和尘埃粒子监控应在工作地点30厘米内进行，最好是在工作高度。
    • “污染进入点”的表面菌取样也遵循30CM的原则；如手套端口、门、进出料口、不同功能区域的端口
    • 开放式的RABS灌装或原料药生产后或组装后，应按照A级标准监控人员菌
    • 必须在生产活动结束结束后进行表面菌取样，除非有合理理由
    • 对于中风险网格，应该根据EMPQ或历史数据减少取样计划
    • Following successful EMPQ cycle and cleanroom validation, the EM program will switch to routine monitoring. A determination must be made as to which sample locations will remain for the routine program. It is recommended to maintain sampling locations in higher-risk grids. There may have been cases within the EMPQ where more locations were added to a grid than would be needed to adequately monitor a grid in routine operations, so specific locations may be removed, or the frequency of monitoring may be reduced, based on an assessment of the obtained EMPQ data and RA outcome. Consideration can also be given to surrounding grids to create sections that are captured by individual samples, as applicable.在EMPQ周期和洁净室验证成功后，EM程序将转为常规监测。必须确定哪些取样位置将保留用于常规程序。建议在风险较高的网格中保留采样位置。在EMPQ内，可能存在这样的情况，即添加到一个网格的位置比常规操作中充分监测一个网格所需的位置多，因此根据对所获得的EMPQ数据和RA结局的评估，特定位置可能被删除，或监测频率可能降低。也可以考虑使用周围的网格来创建由单个样本捕获的切片(如适用)
    • 低风险位置通常不需要监测
    • 无论风险属于什么基本，EMPQ中结果超预期或超过行动限都要继续监测；只有低风险的区域需要一些位置来证明清洁程序和洁净区维护的有效性
    • 取样计划应定期检查，特别是变更过程中，已确定风险评估是否需要调整
    • 房间按不同洁净级别使用，那么建议按高级别进行PQ和日常监测
    • 移动的设备，应在所有网格内进行评估，评分因素可能因活动不同而不同，如可清洁性评分依据设备在哪里存放，与产品的接近程度依据设备被用的开发工艺或产品暴露处。
  • 基于洁净级别，建议的最低取样标准
    • A
      • 关键操作期间，尘埃粒子持续监控
      • 关键工序，包括组织期间，进行微生物空气监测，考虑新的快速检测方法
      • To determine if passive and/or active air monitoring is to be used, the respective risks of the cleanroom concept should be considered (e.g. isolator, RABS, UDF cabinet)为了确定是否使用沉降菌和/或浮游菌监测，应考虑洁净室概念的各自风险(例如隔离器、RABS、单向流工作台)
      • 表面菌在操作结束后，或每批后进行
    • A级送风
      • 再确认是和定期在日常操作期间进行，目的是为了确认HEPA过滤后的空气质量
      • 额外的操作相关的测试，如表面菌，根据所进行的操作和A级送风的基本确定
    • B
      • 作为A级背景的B级：至少每天检测微生物和尘埃粒子
      • 批次或周期结束后进行表面菌检测
      • 若无A级操作时，频率应基于操作的关键性确定，最少每周一次
      • 与A级房间相邻的房间，如走廊、储藏室、气锁间至少每周检测一次
    • C
      • 产品开放操作的房间，如产品离心后收货，称量，或与产品接触的部件准备的房间
      • 倾向于在产品处理发生时进行环境监控
      • 其他操作区域，如走廊、物料气锁间、人员气锁间、储藏间，每周轮流监控， 或可以放宽至每月一次
    • D
      • 至少每月一次
    • 厌氧测试
      • 基于工艺，建议有书面文件说明监测或不检测的原因
  • EM中操作上的限制可能导致不能取样
    • 物理空间限制
    • 干预可能增加污染风险，如越过漏斗，任何监测都不用增加污染风险
    • 取样点不应被打扰，包括初始气流
  • 基于评分的最少监测原则
    • If functional sections have been defined, each functional section should include a selected combination of the following monitoring methods:每一个功能区都要有选自以下四种取样方法的组合
      • 粒子
      • 沉降菌
      • 浮游菌
      • 表面菌
    • 如果没有分功能区，如小的房间，可以看做一个功能区，如果有两个级别，如C+A，算两个功能区
    • 通常
      • EMPQ期间，每个功能区至少一个微生物（沉降或浮游）一个尘埃粒子一个表面菌监测，对于功能区，每个网格应按一下原则确定监控原则：
        • 低风险
          • EMPQ中不强制，可选
          • 日常监控中不强制
        • 中风险
          • EMPQ中至少包括四种方法中的一种
          • 日常监控中，取决于EMPQ结果（通常比EMPQ中少）；若超过预先确定的限制，则建议监测
        • 高风险
          • EMPQ和日常监控中，至少四选一；除非同一个功能区、相邻网格中有取样点，采样位置可以在两个相邻网格之间。
          • 建议在初始确认 中，有高评分的功能区要取微生物和尘埃粒子，若采取的控制措施不能降低污染风险，那么日常监控中也盈亏包括这些点
          • 取样类型取决于网格内的操作或生产线/工艺配制
• 案例分析
  • 组建跨学科团队 ，成员应接受过风险评估工具的培训
    • 无菌保证或有微生物背景的SME
    • QA
    • 验证
    • 生产
    • QC
    • 工程
  • 划分网格，给网格编号，描述各个网格的活动，和现有的降低污染的措施
    • 表14是对应的例子
  • 画出工艺流程
    • 要有组织和干预的SOP信息，如烟雾流型、灌装线照片和人员路线
    • 在图纸上或最好在现场梳理工艺流程，重点关注清洁通道、人物流、产品暴露、干预等等
  • 将网格分成功能区
    • 如灌装区、加塞区
  • 按6因素打分
    • 看表15-16
  • 收集可能影响评估的其他因素
  • 逐功能区、逐网格分析相应活动，以确定取样点和取样位置
    • 看表17和图4