导图社区 红细胞血型检测
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红细胞血型检测
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静脉血
EDTA抗凝
无溶血及明显乳糜
ABO血型鉴定及影响因素
原理
按红细胞有无A抗原和（或）B抗原，血清中存在针对缺失抗原的天然抗体，分A、B、O和AB型4种
方法
正定型
用抗-A、抗-B血型定型试剂与被检细胞反应
反定型
用标准A1细胞及B细胞与被检血清反应
6个月之内新生儿体内无ABO抗体或抗体较弱，一般只进行正定型
抗-A、抗-B和抗-A,B血型定型试剂标准
特异性
只与相应红细胞抗原发生凝集反应，无非特异性凝集
效价
抗-A和抗-B血清效价均在128以上
亲和力
抗-A血清与A1、A2及A2B红细胞反应出现凝集时间分别为15秒、30秒和45秒
抗-B血清与B型红细胞凝集时间为15秒
3分钟凝块不小于1mm2
冷凝集效价
效价在4以下
无菌
灭活补体
鉴定方法
抗体多为IgM、盐水法
玻片发
简单、易漏检弱凝集
试管法
可增强凝集反应，不易漏检弱凝集
微柱凝胶法
定量加样、操作标准化、结果准确、易于判断
基因检测
对人员、设备及操作要求高，不常用
反定型的意义
能够复检正定型结果的准确性，纠正漏检、误报
只有正反定型相符，结果才可靠
发现亚型，能够排除获得性抗原（如类B抗原）和冷凝集现象对正定型的干扰
发现ABO亚型中的意外抗体
反定型结果不能作为血型鉴定的依据
ABO亚型鉴定
ABO亚型也称变异型，红细胞上A或B抗原呈弱抗原性，正反定型不符合ABO血型系统特点
ABO亚型大多H抗原性较强，H抗原强弱依次为：O>A2>B>A2B>A1>A1B
Rh血型鉴定及影响因素
Rh血型抗原有50余种，涉及临床主要有C、c、D、E、e，D抗原性最强
用抗-D抗体与受检者红细胞做D抗原鉴定
凝集：RhD阳性
不凝集：RhD阴性
RhD血型鉴定方法
玻片法
微量板法
临床常用、简便快捷、准确度高
Rh阴性确认试验
IgM抗-D检测为阴性时需进一步确认试验，即用IgG抗-D试剂进行间接抗人球蛋白试验
结果阴性：为RhD阴性
结果阳性：为弱D表型
临床意义
RhD血型与输血关系
正常人体内一般无Rh血型天然抗体，第一次输血不易发现Rh血型不合
RhD阴性受血者输注RhD阳性血液后，产生抗-D抗体，再次输注RhD阳性血液时，发生溶血性输血反应，易导致死亡
与妊娠及新生儿溶血病关系
Rh阴性妇女孕育Rh阳性胎儿，胎儿红细胞刺激母体产生抗-D。再次妊娠时该抗体可通过胎盘进入胎儿体内破坏Rh阳性红细胞，造成死胎或新生儿溶血
弱D人群供血和受血的原则
作为供血者按RhD阳性对待，其血液只能给RhD阳性受血者
作为受血者按RhD阴性对待，只能接受RhD阴性血液
抗体筛查和鉴定
红细胞血型抗体
规则抗体（符合兰德斯坦纳法则）
红细胞有A抗原，血清中含抗-B
红细胞有B抗原，血清中含抗-A
不规则抗体（意外抗体）
不符合ABO血型系统兰德斯坦纳法则的血型抗体
指抗-A、抗-B之外的血型抗体
部分ABO亚型出现的抗-A1等抗体，也称意外抗体
类型
同种抗体：与具有相应抗原的同种异基因红细胞发生凝集反应
自身抗体：指受血者免疫系统针对自身红细胞抗原产生的抗体，这类抗体不仅与自身红细胞凝集，也与多数异体红细胞发生凝集
意外抗体筛查方法
IgM类
盐水介质法
IgG类
聚凝胺法
试验阳性，应做抗人球蛋白试验对照
多特异性抗球蛋白抗原阳性会引起聚凝胺试验假阳性
会增强温自身抗体反应，可有盐水试验或间接抗人球蛋白试验做对照
抗人球蛋白试验
含抗-IgG和抗-C3d
酶介质法
凝胶层析分子排阻技术和免疫学抗原抗体特异性反应技术相结合
抗体筛查呈阳性
自身细胞检查
观察受血者血清与受血者自身细胞反应情况
自身抗体
自身抗体和同种抗体同时存在
谱细胞
能检出常见抗体（如抗-D、抗-JKa、抗-E等）及某些罕见抗体
交叉配血试验
1.复查受血者ABO、RhD血型
2.查阅受血者既往血型记录，如与复查结果不符，立即分析原因
3.复查献血者血型
4.作交叉配血试验
红细胞血型检测方法
盐水介质试验技术
血型鉴定
IgM类抗体筛查和鉴定
盐水介质交叉配血试验
交叉配血试验温度控制在22±2°C以上
酶介质试验技术
蛋白水解酶破坏红细胞膜表面带负电荷的唾液酸
部分改变膜表面结构，暴露隐蔽抗原
IgG类不完全抗体
对Rh、Kidd血型系统检出效果好
聚凝胺试验技术
高价阳离子聚铵盐多聚物，中和红细胞表面负电荷，引起正常红细胞可逆性非特异性凝集
灵敏度高，可检出IgM或IgG类血型抗体
用于血型鉴定、抗体筛查和交叉配血试验
不能使用含柠檬酸钠和肝素的抗凝标本（对聚凝胺有拮抗作用）
抗人球蛋白试验技术（Coombs试验）
用于检测IgG、IgA等抗体，及补体C3、C4片段参与的免疫反应
直接抗人球蛋白试验（DAT）
检测患者体内致敏红细胞的不完全抗体和（或）补体
待检标本：致敏红细胞
间接抗人球蛋白试验（IAT）
检测血清中的不完全抗体，即在体外致敏人红细胞，再与抗人球蛋白试剂反应
待检标本：血清
临床应用
DAT
胎母血型不合新生儿溶血病的诊断
免疫性溶血性输血反应的诊断
自身免疫性溶血性贫血（AIHA）诊断
药物诱发型溶血病的诊断
注意事项
被检标本用EDTA抗凝，避免出现假阳性
抗人球蛋白血清按说明采用最适稀释度，避免前带现象误判为阴性
IAT
交叉配血
器官移植
妊娠所致免疫性血型抗体以及自身免疫性血型抗体的检出和鉴定
抗人球蛋白试剂
多特异性
含抗-IgG、抗-C3d，或含抗-C3b、抗-C4b、抗-C4d，以及抗-IgA和抗-IgM
单特异性
含某一种抗人球蛋白成分，如抗-IgG、抗-IgA、抗-IgM、抗-C3d等
不完全抗体主要是IgG类抗体，在盐水介质中只能致敏红细胞，不能出现凝集反应；加入抗人球蛋白试剂后，后者的Fab片段（起搭桥作用）与包被在红细胞上IgG的Fc片段结合，出现凝集
DAT阳性可以在体外形成，也可以在体内形成，以体内形成为主
单抗-C3d阳性的意义
补体在体内或体外致敏红细胞，伴随抗-IgG阳性一起出现，也可单独出现
1.IgM抗体在体内激活补体：冷凝集素疾病患者，冷反应自身抗体在32°C时也能与红细胞反应，是否溶血决定于患者免疫状况。冷抗体解离后，补体仍吸附在膜上，故C3d、C4d能被特异性检出
2.IgM抗体在体外激活补体：IgM冷抗体在体外较冷环境与红细胞结合，激活补体，在较高温度或反复洗涤中IgM脱落，补体仍保留在膜上被特异性检出
3.温抗体型自身免疫性溶血性贫血：10%~20%的DAT阳性是由C3单独引起的，此时常规方法检测不出IgG、IgA和IgM抗体（IgG包被，但低于IgG最小检出量）
4.血浆内免疫复合物能很弱并非特异性地结合到红细胞上，引起补体包被。在免疫复合物解离后，只留下补体继续附着于红细胞膜上，故C3d能被特异性检出
单抗-IgG阳性的意义
单抗-IgG阳性，说明膜表面致敏IgG免疫球蛋白。常用放散方法，将IgG抗体从膜上放散下来，再鉴定抗体性质
1.自身抗体：红细胞上放散下来抗体与谱红细胞出现凝集（如果患者不是新生儿，4个月内无输血史），则确认为自身抗体
2.类同种特异性抗体：吸收放散试验证明，该抗体是一种自身抗体，具有某些特异性，类似同种抗体特点
3.同种特异性抗体：常见于新生儿溶血病、免疫性溶血性输血反应
4.药物抗体：见于DAT阳性的红细胞，其放散液与谱红细胞不发生反应，提示抗-IgG阳性可能是药物抗体引起的
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不完全抗体，或用已知的不完全抗体检测红细胞上相应的抗原。在37°C下孵育，抗原抗体作用使红细胞致敏，再加入抗人球蛋白试剂与膜上不完全抗体结合出现凝集
结果判读
1.阳性对照凝集，阴性对照不凝集，被检管凝集（阳性反应）
自身对照无凝集（阴性结果），检出可能是同种抗体
自身对照有凝集（阳性结果），检出可能是自身抗体，或同时存在同种抗体
2.阳性对照凝集，阴性对照不凝集，被检管不凝集（阴性反应）
被检血清中未检出意外抗体
若被检抗体弱，需要用低离子溶液配制红细胞悬液，增强抗原抗体反应
若被检抗体为补体依赖性抗体，则必须加入新鲜AB型血清（含补体），使用多特异性抗人球蛋白试剂血清
影响因素
1.抗体亲和力
亲和力常数越高，抗原抗体反应致敏阶段的抗体水平越高，有利于抗原或抗体检测
2.孵育时间和温度
IgG抗体反应和补体致敏最适温度均是37°C，温度过高或过低均不利反应和致敏，红细胞在盐水介质中、37°C孵育30~60分钟，能检出多数临床上重要抗体
3.离子强度
悬浮红细胞的溶液有生理盐水、低离子强度溶液、白蛋白或血清；红细胞在单纯的低离子强度溶液中，能增强抗体结合作用、缩短孵育时间（15~30分钟）
4.抗原、抗体比例
增加抗体量可增强反应敏感性，常用比例是2滴血清对1滴2%~5%的红细胞悬液
5.洗涤
缩短洗涤时间可减少结合到红细胞膜上抗体的损失，洗涤后应立即加入抗人球蛋白试剂血清
6.体外补体致敏
血标本采集后放置较冷环境，血液中冷抗体结合在红细胞上，激活补体，使膜上存在C3成分，试验C3呈阳性
为阻止补体体外致敏，可将血液采集到EDTA抗凝管中，足量的EDTA可螯合Ca2+,阻断补体激活
7.红细胞自身凝集
少数患者体内存在冷抗体使红细胞在常温下有自凝倾向，为避免抗人球蛋白试验出现假阳性，需做盐水对照试验（即患者红细胞洗涤后直接离心观察结果）
微柱凝胶介质试验技术
分子筛技术和免疫学技术相结合的产物，即在凝胶介质中发生的抗原抗体反应
适用范围
中性胶：不含抗体，相当于试管的作用
特异性胶：含特异性抗体，如抗-A、抗-B，可进行A、B抗原检测
抗人球蛋白胶：含抗人球蛋白，可进行IgG类抗体的检测
阳性
红细胞沉淀在凝胶柱中部或凝胶之上
阴性
红细胞沉淀在凝胶柱管底
结果分析
假阳性反应
未完全去除纤维蛋白的血清标本，阻碍红细胞沉降
抗凝剂不足或不含抗凝剂的血浆标本
标本被细菌污染
试验温度过低，凝胶颗粒活动减少
假阴性反应
抗原或抗体过少、过弱
抗原或抗体比例不当
离心力过大
未加入抗体等人为错误
溶血反应
试验操作错误或标本存在问题
反应液是低渗溶液
温度过低或过高
红细胞或抗体被细菌污染
其他破坏红细胞的理化因素
红细胞抗原抗体反应
抗原抗体结合，激活补体，导致红细胞破裂
抗原抗体结合，未激活补体，但受到血清中其他因子作用而溶血
吸收放散试验
吸收试验
待检血清抗体加入已知抗原的红细胞，或待检抗原红细胞加入已知效价的特异性抗血清，产生抗原抗体反应，离心后分离经过抗原吸收的血清，将吸收前后的血清用生理盐水作倍比稀释并测定其效价差异
冷抗体
4°C反应最强
自身抗体用自身红细胞吸收
同种抗体用对应红细胞吸收
IgM类抗体在4°C比22°C或37°C更容易被吸收，且容易被完全吸收
ABO系统以4°C或室温为宜
温抗体
用酶处理红细胞后在37°C孵育
IgG类抗体在37°C吸收效果最好，但难以完全吸收
某些酶增强的抗体如Rh抗体，可有酶处理红细胞后进行吸收
Rh系统以37°C为宜
放散试验
把结合到红细胞膜上的抗体解离下来，用于其他目的；通过放散试验获得的含有或不含有抗体的溶液称为放散液
试验目的
获得红细胞上致敏的抗体，用于进一步鉴定
没有抗体吸附的红细胞，用于血型鉴定和交叉配血试验
热放散技术
适用冷抗体（IgM），也适用温抗体（IgG）
常用ABO抗体放散，如新生儿溶血病试验
乙醚放散技术
适用IgG抗体的检测，如Rh血型抗体
鉴定存在于红细胞上的弱抗原（亚型）
分离、鉴定混合抗体
除去血清中不需要的抗体
浓缩低效价抗体
鉴定血清中特异性抗体
凝集抑制试验
唾液中可溶性ABH血型物质检测
用于鉴定存在于体液中的可溶性血型物质，78%的个体具有Se基因，控制产生可溶性ABH抗原的分泌腺体，ABH抗原可进入（除脑脊液外）所有体液中
80%的人体液中可检出ABH抗原物质，称分泌型（有Se基因）
20%的人体液中不存在ABH抗原物质，称非分泌型（有se基因）
A型分泌型人唾液中含A型物质、H型物质
B型分泌型人唾液中含B型物质、H型物质
O型分泌型人唾液中含H型物质，H型物质最多
AB型分泌型人唾液中含AB型物质、H型物质
ABH抗原和Lewis抗原
常用于ABO血型鉴定的辅助试验
红细胞血型分子生物学检测
PCR-序列特异性引物
PCR-限制性片段长度多态性
PCR-序列特异性寡核苷酸探针
PCR-单链构象多态性
PCR-反向点杂交
PCR-DNA测序
基因芯片
PCR指纹图
