导图社区 WB条带问题汇总
WB是医学类科研中常用的实验方法,但其显影后的条带总会不理想,想要改进又不知从何做起。本篇汇总了常见的WB条带问题,提供了导致相应结果的原因分析思路和解决方法,希望对提高WB结果理想度有一定帮助。
这是一篇关于新生儿黄疸的思维导图,主要内容包括:定义,新生儿胆红素代谢特点,分类。因胆红素在体内积聚引起的皮肤或其他器官黄染,是新生儿期最常见的临床问题。
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慢性肾衰竭CRF:慢性肾脏病引起的 GFR 下降及与此相关的代谢紊乱和临床症状组成的综合征,汇总了尿毒症症状的发生机制、危险因素、临床表现、诊断、鉴别诊断、预防与治疗等详细内容。
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WB条带问题汇总
1.无显色
一点信号没有——抗体加错/转膜问题(膜放反)
中间出现细微条带——蛋白上样量太少/一抗浓度过低/ECL发光液失效
2.高背景
目的条带单一清晰,但其他地方弥漫性均一背景
封闭不好/一抗浓度高/洗膜时间和次数不够
3.非特异性条带
一抗非特异性与蛋白结合
4.条带中出现边缘规则的白圈
电转时膜和胶之间存在气泡
5.条带中间出现白色(反白)
中心部位高浓度HRP把底物消耗过快,中间部位底物消耗结束之后就不再发光——降低蛋白量,降低一抗和二抗浓度
6.出现黑点和黑斑
膜上其他部位与一抗/二抗非特异性结合——封闭牛奶一定要纯,封闭结束之后一定要洗
7.条带拖尾
蛋白量太大,一抗浓度和时间太长
8.出现重影
荧光强度较高,压片时,放好后又不小心轻微移动了一段距离——X片光放上去之后,不要再动,即使放歪了也没关系
9.出现非均一性背景
膜可能干过——每一步操作过程中都需要注意不要让膜干
10.某一条带变形
SDS-PAGH胶中存在气泡/不溶性颗粒
11.条带呈哑铃形
配置胶有问题,胶凝固后不均一;或样本中含有太多杂质,沉积在孔的中间
12.最边缘的条带弯曲
电泳电流不均一——换用新的电泳槽;不使用两边的孔
13.蛋白分子量偏高/偏低
胶浓度与目的蛋白浓度不对应
14.蛋白质降解
会在比原来位置低的地方出现主带,还会出现其他带,最主要的特点是所有条带都比原来低,且模糊不清
15.所有条带连成一片没有间隔
上样量过多/样品弥散(电泳长时间停止导致)
16.整个条带呈”笑脸“状
凝胶冷却不均一,电泳槽老化
17.整个条带呈”哭脸“状
凝胶两头没有凝固好
18.溴酚蓝拖尾
样品溶解不好
19.纵向的纹理
上样样品中存在不溶性颗粒
20.溴酚蓝很粗
浓缩胶浓缩效果不好(浓缩胶太短/配错)
21.在分离胶中跑不动
Tris-CI PH值不对/忘记加SDS