第1节细菌形态学检查法

临床微生物学检验，细菌形态学检查法，从显微镜、不染色标本的检查、染色标本的检查等方面进行了概述和分析，需要可收藏。

细菌形态学检查法

• 显微镜
  • 普通光学显微镜
    • 原理
      • 人眼分辨最小距离是0.2mm，一般细菌大于0.2um，油镜将0.2um的微粒放大1000倍到肉眼可见的0.2mm
  • 暗视野显微镜
    • 构造
      • 普光上装暗视野聚光器
    • 特点
      • 背景视野变暗，菌体发亮
  • 荧光显微镜
    • 光源
      • 高压汞灯
    • 特点
      • 激发荧光，在暗色背景中可见发荧光的菌体
  • 相差显微镜
    • 构造
      • 普光上装特殊相差板
    • 原理
      • 标本不同部位因密度不同，引起光位相差异
    • 特点
      • 显示细菌不同部位的差异
  • 电子显微镜
    • 基础
      • 光子流
    • 分类
      • 透射电子显微镜（TEM）
        • 细菌、病毒的超微结构
      • 扫描电子显微镜（SEM）
        • 细菌、病毒等表面结构及附件和三维立体图像的观察
    • 特点
      • 分辨能力极大提升，能分辨1nm的微粒
• 不染色标本的检查
  • 目的
    • 观察细菌的动力及运动情况
  • 方法
    • 压滴法
    • 悬浮法
  • 制动试验阳性
    • 疑似霍乱患者，取其米泔水样便，制成压滴或悬浮标本。高倍镜下，若细菌穿梭样运动，则同法再制样本并加入O1群霍乱弧菌抗血清，若细菌活跃运动现象消失，称之为制动试验阳性
• 染色标本的检查
  • 常用染料
    • 本质
      • 含苯环的有机化合物
        • 苯环带色基
          • 色基赋予化合物颜色
        • 苯环带助色基
          • 助色基决定染料的酸碱性
    • 特点
      • 一般均难溶于水，易溶于有机溶剂（常制成盐类水溶液）
    • 分类
      • 碱性染料
        • 分类
          • 碱性亚甲蓝
          • 结晶紫
          • 碱性复红
        • 特点
          • 电离带正电，易与带负电的被染物结合
          • 多数细菌等电点（PI）在2～5，在中性、碱性及弱酸性环境中都带负电，易被碱性染料着色
      • 酸性染料
        • 分类
          • 伊红
          • 酸性复红
          • 刚果红
        • 特点
          • 电离带负电，不常用于细菌染色，必要时可降低菌液的pH，使细菌带正电荷，方可着色
      • 中性染料
        • 分类
          • 伊红亚甲蓝（瑞氏染液）
          • 伊红天青（吉姆萨染液）
  • 常用的细菌染色法
    • 单染色法
      • 特点
        • 一种染料，同一颜色，不能显示细胞染色特性
    • 复染色法（鉴别染色法）
      • 特点
        • 两种或两种以上染料，不同细菌或同一细菌不同结构染成不同颜色
      • 分类
        • 革兰染色
          • 将细菌分为
            • 革兰阳性（G+）菌
              • 细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入（细胞壁学说）
              • 等电点低（pI 2～3）（等电点学说）
              • 内含有大量核糖核酸镁盐，可与结晶紫和碘牢固地结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色
            • 革兰阴性（G-）菌
              • 反之
              • 等电点较高（pI 4～5）
              • 反之
          • 用途
            • 菌落涂片和标本涂片
            • 临床用药参考
        • 抗酸染色
          • 优点
            • 不被盐酸乙醇脱色
          • 代表
            • 萋-尼染色法
              • 将细菌分为
                • 抗酸性细菌（结核病、麻风病）
                • 非抗酸性细菌（绝大多数细菌）
        • 荧光染色
          • 优点
            • 敏感性强、效率高、结果易于观察
          • 应用
            • 结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等病原菌的检测（痰涂片荧光染料金胺O法，菌体呈金黄色荧光）
        • 负染色
          • 特点
            • 背景着色，细菌不着色
          • 常用染液
            • 墨汁
            • 刚果红
            • 水溶性苯胺黑
            • 酸性染料
          • 应用
            • 检查细菌的荚膜，镜下可见黑色背景中蓝色菌体周围包绕一层无色透明的荚膜（墨汁负染色法配合单染色法的吕氏亚甲蓝）
        • 特殊染色
          • 分类
            • 细胞壁染色
            • 鞭毛染色
              • 非发酵菌鉴定
            • 荚膜染色
              • 肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、炭疽芽孢杆菌及产气荚膜梭菌等的鉴定
            • 芽胞染色
            • 异染颗粒染色
              • 白喉棒状杆菌鉴定