导图社区 核酸的理化性质
生物化学与分子生物学核酸的理化性质笔记，包括他的概念，强烈的紫外吸收、双链解离为两条单链等内容。
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核酸的理化性质
强烈的紫外吸收
嘌呤和嘧啶都含有共辄双键
中性最大吸收值在260nm附近
定量分析DNA/RNA
以A260=1.0为标准定量核酸
50µg/ml双链DNA
40µg/ml单链DNA/RNA
20µg/ml寡核苷酸
利用A260/A280判断核酸样品纯度
DNA纯品为1.8
RNA纯品为2.0
变性是双链解离为两条单链
DNA变性
某些极端的理化条件（温度、pH、离子强度等）下，碱基对间的氢键断裂，碱基堆积力被破坏，使双链解离成两条单链
破坏空间结构，但nt序列不变
本质是双链碱基对的氢键断裂
加热
最简单，最直接
DNA的增色效应
解链时，暴露很多包埋在双螺旋内部的碱基，使溶液在260nm处的吸光度增加
监测DNA在260nm吸光度变化
判断DNA双链变性的常用的方法
DNA解链曲线/熔解曲线
温度相对A260值作的图
开始解链
T升高，A260缓慢上升
双链解离过程
接近某T时，A260急剧升高并饱和
解链后
T升高，A260无明显变化
解链在一个较窄的温度范围完成
DNA的解链温度/熔解温度（Tm）
A260达到最大变化值的一半时对应的温度
50%的双链解离
影响因素
DNA长短
GC含量
离子强度
正比
可根据DNA的长度、GC含量以及离子浓度简单估算
如：（小于20bp）Tm=4(G +C)+2(A+T)
变性的核酸可以复性或形成杂交双链
复性
变性条件缓慢地除去后，两条解离的互补链可重新形成双链，恢复双螺旋
退火
热变性的DNA经缓慢冷却后复性
迅速冷却保持解链后的单链的变性
DNA的减色效应
复性时，溶液A260吸光度值降低
核酸分子杂交
不同种类的DNA单链或RNA单链混合在同一溶液中
只要单链间存在着一定程度的碱基互补关系，就有可能形成杂化双链
杂化双链可在DNA间，RNA间，DNA与RNA间形成
用途广泛
各种核酸检测方法：Southern印迹、Northern印迹、斑点印迹、原位杂交、PCR扩增、基因芯片等
研究DNA片段在基因组中的定位、鉴定核酸的序列相似性、检测待检样品中的靶基因，基因诊断，基因治疗，mRNA分离等
概念
核酸为多元酸，酸性强
DNA和RNA都是线性高分子，溶液的黏滞度极大
RNA溶液小得多
双链DNA大于单链
DNA大分子外力易断裂，提取DNA时小心，避免破坏完整性
溶液中的核酸分子在引力场中可以沉淀
不同构象的核酸分子（如环状、超螺旋和线性等）的沉降速率有很大差异
分离，纯化
