导图社区 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法实验流程
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法实验流程思维导图,流程包括安装垂直版电泳槽、制备凝胶板、样品处理、加样、电泳、染色及脱色、结果处理等。
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
安装垂直版电泳槽
1)将密封用硅胶框放在平玻璃上,然后将凹型玻璃与平玻璃重叠
2)用手将两块玻璃板夹住放入电泳槽内,玻璃室凹面朝外,插入斜插板。
3)用蒸馏水试验封口处是否漏水。
制备凝胶板
分离胶制备
于小烧杯中混匀。
加胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm。用吸管在凝胶表面沿短玻璃板边缘轻轻加一层蒸馏水(约3~4cm),用于隔绝空气,使胶面平整。
分离胶凝固后,可看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限。倒掉重蒸水,用滤纸吸去多余的水。
浓缩胶制备
于烧小杯充分混匀。
用细长头的吸管将凝胶溶液加到分离胶上方,轻轻加入样品槽模板。
待浓缩胶凝固后,轻轻取出样品模槽板,然后取下玻璃胶室,
将玻璃胶室凹面朝里置入电泳槽插入斜插板,将电泳缓冲液加至内槽玻璃凹口以上。
样品处理
加样
用微量注射器小心将5μL样品通过缓冲液加到凝胶凹形样品槽底部,加3μLMarker,即可开始电泳。
电泳
将直流稳压电泳仪开关打开,开始时将电压调至100V,待样品进入分离胶时,将电流调至150V。
当蓝色染料迁移至底部时,将电流调回到零,关闭电源。
拔掉固定板,取出玻璃板,将胶板移至大培养皿中。
染色及脱色
用清水没过凝胶,微波炉加热至沸腾。
用染料没过凝胶,微波炉加热至沸腾。
结果处理
将凝胶置于白色瓷板上,观察Marker条带于样品条带