黄酮类化合物

中药化学黄酮类化合物部分，包括概述，理化性质，理化检识，提取分离以及结构鉴定部分，内容全面易懂，适用于预习，复习，考研

黄酮类化合物

• 概述
  • 经典含义：以2-苯基色原酮衍生的一类化合物总称
  • 现代含义（多用）：泛指两个苯环通过三个碳原子相互连接而成的一系列化合物的总称
  • 生源途径：莽草酸和乙酸丙二酸复合途径
  • 分布：黄酮类化合物多存在于高等植物中
    • 黄酮类以唇形科、玄参科、爵麻科、苦苣苔科、菊科等植物中存在较多；
    • 黄酮醇类较广泛分布于双子叶植物；
    • 二氢黄酮类特别在蔷薇科、芸香科、豆科、杜鹃花科、菊科、姜科中分布较多；
    • 二氢黄酮醇类较普遍地存在于豆科植物中；
    • 异黄酮类以豆科蝶形花亚科和鸢尾科植物中存在较多。在裸子植物中也有存在；
    • 双黄酮类多存在松柏纲、银杏纲和凤尾纲等植物中。
  • 存在：多以苷的形式存在
  • 生物活性
    • 扩张冠状血管作用——葛根总黄酮及葛根素、银杏叶总黄酮等
    • 降低毛细血管脆性和异常通透性作用——芦丁、橙皮苷、d-儿茶素等
    • 抗菌、抗病毒作用——黄芩苷，木犀草素苷等
    • 止咳祛痰作用——杜鹃素、甘草素和甘草苷等
    • 保肝作用——水飞蓟素
    • 雌激素样作用——染料木素、大豆素等
• 结构特点和分类
  • 分类依据： 中央三碳链的氧化程度； 三碳链是否成环； B环连接位置； 3位是否有羟基取代
  • 黄酮类
    • 以2-苯基色原酮为基本母核，且3位上无含氧基团取代
    • 天然黄酮类A环5、7位均有酚羟基；B环4’位有羟基或甲氧基，有时3’为也有羟基或甲氧基
    • 例
      • 芹菜素（5，7，4‘—三羟基）
      • 木犀草素（5，7，3’，4‘—四羟基）
      • 黄芩素（5，6，7—三羟基）
  • 黄酮醇类
    • 黄酮基本母核的3位上连有羟基或其他含氧基团
    • 例
      • 山柰酚（5，7，4’—三羟基）
      • 槲皮素（5，7，3‘，4’—四羟基）
      • 杨梅素（5，7，3‘，4’，5‘—五羟基）
  • 二氢黄酮类
    • 黄酮基本母核的2、3位双键被氢化而成
    • 例
      • 橙皮素（5，7，3—三羟基—4’—OCH3二氢黄酮）
      • 甘草素（7，4‘—二羟基）
  • 二氢黄酮醇类
    • 具有黄酮醇类的２、３位被氢化的基本母核
    • 例
      • 二氢槲皮素（5 7 3 ′， 4 ′ - 四 OH 二氢黄酮醇）
      • 二氢桑色素（5 7 2 ′， 4 ′ - 四 OH 二氢黄酮醇）
  • 异黄酮类
    • 母核为3-苯基色原酮的结构，即B环连接在C环的3位上
    • 例
      • 大豆素（ 7，4′- 二 OH异黄酮）
      • 葛根素（ 7，4′- 二 OH，8- glc 异黄酮苷）
  • 二氢异黄酮类
    • 具有异黄酮的2、3位被氢化的基本母核
    • 例
  • 查耳酮类
    • 是二氢黄酮C环的1、2位键断裂生成的开环衍生物，即三碳链不构成环
    • 例
  • 二氢查尔酮类
    • 二氢查耳酮类为查耳酮α，β位双键氢化而成
  • 橙酮类（噢哢）
    • C 环为五元含氧环（羰基呋喃环）
    • 自然界中分布较少，具有抗氧化、抗肿瘤、抗肥胖作用
    • 例：硫磺菊素（ 6，3′， 4′- 三 OH 橙酮）
  • 花色素类
    • C 环无羰基，1位氧原子以烊盐形式存在
    • 颜色
      • pH<7红色
      • pH 7~8 紫色
      • pH>11 蓝色
  • 黄烷醇类
    • 鞣质的前体化合物
    • 黄烷 -3- 醇
    • 黄烷 -3 ， 4- 二醇
  • 双黄酮类
    • 3`，8``-双芹菜素型
      • 银杏素
    • 8，8``-双芹菜素型
      • 柏黄酮
    • 6,8’’-双芹菜素型
    • 双苯醚型
      • 扁柏黄酮
  • 其他黄酮类
• 理化性质
  • 性状：多为结晶性固体，少数为无定形粉末（黄酮苷）
  • 颜色：大多呈黄色，所呈颜色与是否存在交叉共轭体系，以及含有助色团（-OH，-OCH3）的类型、数目、取代位置有关
    • 黄酮及黄酮醇：灰黄色~黄色
    • 查耳酮：黄色~橙黄色
    • 二氢黄酮、二氢黄酮醇及黄烷醇类：无色（无交叉共轭）
    • 异黄酮：微黄色（共轭链短）
    • 花色素的颜色随pH值而改变
  • 旋光性
    • 黄酮苷元：二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢异黄酮、黄烷醇类化合物有旋光性；其他黄酮苷元均无旋光性
    • 黄酮苷类：均有旋光性，大多左旋
      • 因为结构中有糖部分
  • 溶解性
    • 游离黄酮
    • 黄酮苷
    • 黄酮类化合物溶解性（极性）规律
      • 游离黄酮
        • 水中溶解度由小到大：黄酮、黄酮醇、查耳酮<异黄酮<二氢黄酮、二氢黄酮醇
        • 引入羟基水溶性增大，引入甲氧基脂溶性增大
        • 花青素以离子形式存在，水溶性大
      • 黄酮苷
        • 糖数目：苷中连接糖越多，水中溶解度越大
        • 糖位置：3-O苷水中溶解度 > 7-O苷
          • 3位葡萄糖与邻位羰基产生排斥作用，平面性减弱，水溶性增大
  • 酸碱性
    • 酸性
      • 由于黄酮类化合物多具有酚羟基，故显酸性
      • 酸性规律
    • 碱性
      • 1位氧原子有未共用电子对，表现微弱碱性
      • 可与浓盐酸、硫酸成佯盐，极不稳定，遇水分解，不同黄酮类化合物佯盐呈不同颜色，可用于初步鉴别
  • 显色反应
    • 还原显色反应
      • 盐酸镁粉反应
        • 黄酮类化合物最常用颜色反应。
        • 反应现象
          • 黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇：橙红～紫红色
          • 异黄酮、查耳酮、橙酮、儿茶素：阴性
          • 假阳性！——花色素及部分查耳酮、橙酮在浓盐酸中也显示红色，可作对照实验，即不加镁粉，只加浓盐酸，观察是否显色
      • 四氢硼钠反应
        • 样品甲醇溶液中加入四氢硼钠后，再加入浓盐酸，还原显色
        • 二氢黄酮、二氢黄酮醇显红色，其他均为阴性
      • 钠汞齐反应
        • 样品甲醇溶液中加入钠汞齐后，再加入浓盐酸，还原显色
        • 反应现象
          • 黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮：显红色；
          • 黄酮醇类：黄色至淡红色；
          • 二氢黄酮醇类：棕黄色
    • 与金属盐类试剂的络合反应
      • 三氯化铝反应
        • 反应试剂：1%AlCl3-EtOH溶液
        • 3-OH，5-OH，生成黄色络合物，，在UV下显黄色荧光
        • 4‘-羟基黄酮醇，7、4’-二羟基黄酮醇显天蓝色荧光
      • 锆盐—枸橼酸反应
        • 先加入2%二氯氧锆甲醇溶液，再加入枸橼酸
      • 氨性氯化锶反应
        • 鉴别邻二酚羟基
        • 与氨性氯化锶反应，产生绿～棕～黑色沉淀
      • 三氯化铁反应
        • 鉴别含酚羟基的黄酮
        • 生成络合物，根据酚羟基位置和数目不同，呈现出绿、蓝、紫等颜色
    • 硼酸显色反应
      • 5 - 羟基， 4 - 羰基黄酮
        • 黄色，绿色荧光（草酸液）
      • 6′- 羟基， 4 - 羰基查耳酮
        • 黄色，无荧光（枸橼酸）
    • 碱试剂的显色反应
      • 黄酮与碱——黄~橙色
      • 黄酮醇与碱——先呈黄色，通入空气后呈棕色（放置3-OH易氧化 ）
      • 查耳酮\橙酮与碱——红或紫
      • 二氢黄酮类与碱——先呈黄色， 放置或加热呈红紫
      • 有邻二酚羟基者，氧化生成黄~棕色沉淀；有邻三酚羟基者,氧化生成暗绿色沉淀
    • 五氯化锑的反应
      • 鉴别查耳酮的重要反应
      • 查耳酮+五氯化锑/无水CCl4→沉淀（紫红）
      • 其他黄酮+五氯化锑/无水CCl4→黄色~橙色
    • 其他显色反应
      • Gibbs反应★
        • 鉴定酚羟基对位是否被取代
        • 5-OH对位无取代基则显蓝色
• 酚羟基位
  • 7，4’—二OH黄酮
  • 7或4‘—OH黄酮
  • 一般酚羟基黄酮
  • 5—OH黄酮
  • 酸性由上到下依次由强到弱，分别溶于
    • 5%碳酸氢钠水溶液
    • 5%碳酸钠水溶液
    • 0.2%氢氧化钠水溶液
    • 4%氢氧化钠水溶液

黄酮类化合物提取分离

• 提取
  • 甲醇、乙醇提取法
    • 使用范围
      • 黄酮苷元：高浓度醇（90%-95%）提取
      • 黄酮苷类：60%醇提取
    • 提取方法
      • 渗漉法
      • 回流提取法
      • 浸渍法
    • 提取特点
      • 溶解范围广，苷、苷元都可
      • 甲醇毒性大
  • 热水提取法
    • 提取黄酮苷类
    • 提取方法：煎煮法
    • 提取特点
      • 无毒、安全、成本低廉
      • 水溶性杂质多
  • 碱性水或碱性乙醇提取法
    • 原理：黄酮类多具有酚羟基，所以利用碱溶酸沉原理进行提取
    • 常用的提取溶液
      • 稀氢氧化钠水溶液
        • 浸出能力强，但浸出杂质较多
        • 浸出液酸化后，迅速滤去先析出的沉淀，则后析出的沉淀物可能是较纯的黄酮类
      • 石灰水溶液（氢氧化钙）
        • 浸出效果不如稀氢氧化钠水溶液
        • 多羟基物质如鞣质，含羧基的果胶、粘液质会形成钙盐沉淀而不被溶出，使得浸出液较纯
      • 5%氢氧化钠稀乙醇溶液
        • 浸出能力强
        • 浸出液酸化后，析出的黄酮类在稀醇中有一定溶解度，使产率降低
    • 注意：使用酸碱时浓度不宜过高！
      • 碱浓度过高可能破坏黄酮类化合物的母核。
      • 酸浓度过高可能形成烊盐，使析出的黄酮重新溶于水中
      • 当分子中含有邻二酚羟基时，可加入硼酸加以保护
  • 超声波提取法
    • 效率高，温度低，时间短
    • 原理：空化效应
  • 超临界萃取法
    • 效率高，温度低，无溶剂残留
    • 对亲脂性成分溶解性强，不适于含-OH，-COOH成分的提取（夹带剂）
• 分离
  • 溶剂萃取法
    • 分离依据：极性差异大小
    • 分离流程
    • 石油醚脱脂
    • 醇沉法分离蛋白质，多糖
  • PH梯度萃取法
    • 分离依据：黄酮类化合物的酸性差异
    • 分离流程
      • 5% NaHCO3--------- 7、4’-二羟基黄酮
      • 5% Na2CO3 -------- 7或4’单羟基黄酮
      • 0.2%NaOH------- 一般酚羟基黄酮
      • 4%NaOH -------5-羟基黄酮
  • 色谱法
    • 柱色谱法
      • 硅胶柱色谱★
        • 分离黄酮类采用较多的方法，应用广泛。
        • 分离黄酮苷元，洗脱剂选择有机溶剂体系（氯仿-甲醇）
        • 分离黄酮苷，用含水的溶剂体系洗脱（氯仿-甲醇-水）
      • 聚酰胺柱色谱★
        • 分离机理：氢键吸附（聚酰胺与黄酮酚羟基成氢键
        • 黄酮类在聚酰胺色谱上洗脱的规律
          • 黄酮类化合物所含酚羟基数目越多，吸附能力越强，越难洗脱下来
          • 酚羟基位置也与吸附能力有关。酚羟基易形成分子内氢键的，与聚酰胺吸附力减弱，如3或5位OH因与4位羰基形成分子内氢键，与聚酰胺吸附力弱于其他位置的羟基，邻二酚-OH吸附力弱于间或对二酚-OH
          • 分子内芳香化程度越高，共轭体系越长，吸附力越强
          • 黄酮类化合物吸附力强弱顺序：黄酮醇>黄酮>二氢黄酮醇>异黄酮
          • 含水流动相对聚酰胺色谱的影响
            • 根据聚酰胺色谱的“氢键吸附”原理，以有机溶剂（如氯仿-甲醇）为洗脱剂时，游离黄酮吸附力弱，先洗脱下来，黄酮苷吸附力强，后洗脱下来
            • 用含水流动相洗脱时，洗脱结果相反，黄酮苷先于游离黄酮洗脱下来，并且洗脱顺序：三糖苷〉双糖苷〉单糖苷〉苷元。不符合“氢键吸附”原理。
            • “双重色谱”性质
              • 当用含水流动相洗脱时，聚酰胺色谱可看做非极性固定相，色谱行为类似反相分配色谱，所以极性大的黄酮苷类先洗脱下来，极性小的黄酮苷元后洗脱下来
              • 当用有机溶剂洗脱时，聚酰胺色谱可看做极性固定相，色谱行为类似正相分配色谱，所以极性小的黄酮苷元先于极性大的黄酮苷洗脱下来
          • 洗脱剂对吸附能力的影响
            • 各类溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力：水<甲、乙醇（浓度由低到高）<丙酮<稀NaOH水溶液或氨水<甲酰胺<二甲基甲酰胺<尿素水溶液
      • 氧化铝柱色谱
        • 氧化铝为弱碱性，3—OH，5—OH，或4—羰基及邻二酚羟基黄酮类化合物显酸性，易形成死吸附，难洗脱，不常用
      • 葡聚糖凝胶柱色谱
        • 分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。游离黄酮的酚羟基越多，吸附作用越强，越难洗脱，相对洗提率越大。
        • 分离黄酮苷时，主要靠分子筛作用。苷类的分子量越大，越易洗脱，相对洗提率越小
        • 原理：分子筛原理，分子体积大小相近的时候再考虑吸附原理
        • 子主题
    • 高效液相色谱法
      • 目前科研最常用的分离方法
      • 黄酮苷类，多羟基黄酮用反相色谱柱（如C8、C18色谱柱，一般HPLC都采用反相色谱柱）
      • 多甲氧基黄酮可用正相色谱柱
    • 超临界流体色谱法：既可用于提取，也可用于分离
• 检识
  • 物理检识（颜色）
    • 黄酮、查尔酮、黄酮醇为黄色
    • 异黄酮微黄色
    • 二氢黄酮、二氢黄酮醇无色
  • 化学检识
    • 显色反应
      • 黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇：盐酸-镁粉反应
      • 二氢黄酮、二氢黄酮醇：四氢硼钠反应
      • 查尔酮：五氯化锑反应
      • 3-羟基与5-羟基黄酮的鉴别：锆盐-枸橼酸反应
      • 邻二酚羟基：氨性氯化锶反应
  • 色谱检识
    • 薄层色谱法
      • 多采用吸附薄层色谱
      • 常用吸附剂：硅胶，聚酰胺
      • 硅胶薄层色谱
        • 主要检识黄酮苷元
        • 黄酮苷元：展开剂为有机溶剂（氯仿-甲醇、甲苯-乙酸乙酯-甲酸等）
        • 黄酮苷：展开剂为大极性溶剂（正丁醇-乙酸-水，氯仿-甲醇-水等）
      • 聚酰胺薄层色谱
        • 可检识大部分黄酮及苷类，分离效果好。
        • 黄酮苷元：展开剂为有机溶剂
        • 黄酮苷类：展开剂为含水的有机溶剂（甲醇-水，丙酮-水等）
    • 纸色谱法
      • 属于分配色谱，适用于各类黄酮类化合物的检识
      • 黄酮苷元
        • 展开系统为极性较小的醇性溶剂：如BAW系统上层（正丁醇-乙酸-水
        • 正相分配色谱
        • 化合物极性小则Rf值大。
      • 黄酮苷
        • 展开系统为极性较大的水性溶剂，如盐酸、乙酸或氯化钠的水溶液
        • 反相分配色谱
        • 化合物极性大则Rf值大
      • 双向纸色谱法
        • 检识黄酮苷和苷元的混合物
        • 第一向用醇性展开剂，第二向用水性展开剂
      • 黄酮类化合物在纸色谱上Rf值的一般规律
        • 当用水性展开剂时
          • 平面型分子黄酮、黄酮醇、查耳酮等，几乎停留原点不动， Rf＜0.02
          • 非平面型分子二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢查耳酮Rf较大，Rf为0.10-0.30
        • 同一类型的黄酮类化合物，用醇性展开剂时，分子中羟基数目越多，Rf越小，羟基被甲氧基取代后，Rf增大
        • 用醇性展开剂时
          • 黄酮苷类化合物Rf ＜0.7
          • 多数苷元Rf ＞0.7
          • 同一类型苷元的黄酮类化合物Rf为苷元＞单糖苷＞双糖苷
          • 用水性展开剂时相反，黄酮苷的Rf ＞0.5，而黄酮苷元几乎停留在原点

黄酮类化合物的结构研究

• UV光谱
  • 黄酮类化合物在甲醇中的UV光谱特征
    • 带Ⅰ（300-400nm）——由桂皮酰基系统电子跃迁引起，主要反应B环取代情况；
    • 带Ⅱ（240-280nm）——由苯甲酰基系统电子跃迁引起，主要反应A环取代情况
    • 不同的黄酮类化合物带Ⅰ、带Ⅱ峰位、峰形、吸收强度不同，可根据其特征大致推测黄酮类化合物的结构类型
      • 黄酮、黄酮醇：带Ⅰ、带Ⅱ均有峰
      • 异黄酮、二氢黄酮：以带Ⅱ为主
      • 查耳酮、橙酮：带Ⅰ为主
    • 黄酮、黄酮醇类的UV光谱特征
      • 黄酮、黄酮醇的UV谱形状相似，均有两个主峰，仅带Ⅰ位置不同
        • 黄酮---304-350
        • 黄酮醇---358-385（带I红移）
      • 在B环或A环引入羟基或甲氧基，会使得对应的吸收带发生红移
        • B环的含氧取代基增加时，带I的红移值也增加，但不能使带II位移；
        • A环的含氧取代基增加时，带II的红移值增加，但对带I无影响
        • 特例：A环上含有5-OH时，带I和带II均红移
      • 3、5、4’位羟基甲基化或苷化后，吸收带紫移
        • 3-OH成苷或甲基化后，黄酮醇的带I与黄酮的带I重合
        • 5-OH甲基化，使带I和带II均紫移
        • 4’-OH甲基化，使带I紫移
      • 羟基乙酰化后，吸收带紫移，酚羟基的红移效果消失
    • 异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇类的UV光谱特征
      • 有苯甲酰系统，无桂皮酰系统，只有强的带Ⅱ吸收，带Ⅰ为肩峰
      • 异黄酮带Ⅱ 245-270 nm，二氢黄酮、二氢黄酮醇带Ⅱ 270-295 nm
      • A环的含氧取代基使带Ⅱ红移，一般不受B环C环含氧取代基影响
    • 查耳酮及橙酮类在甲醇中的UV光谱特征
      • 带Ⅰ为主峰且强度很高，带Ⅱ吸收弱，为次强峰
      • 查耳酮带Ⅰ340-390 nm ，橙酮类带Ⅰ370-430 nm
      • B环上的含氧取代基增加，带Ⅰ红移
  • 诊断试剂在黄酮类化合物UV光谱中的应用
    • 甲醇钠
      • 强碱，使所有酚羟基解离成盐，吸收带红移
      • 有 4′-OH：带Ⅰ红移 40~65nm强度不降
      • 有 3-OH、但无 4′-OH：带I红移 50~60 nm 强度下降
      • 有游离 7-OH：在 320~330nm处有吸收
    • 乙酸钠
      • 弱碱，只能解离酸性较强的酚羟基（如4’位，7位酚羟基），使相应吸收带红移
      • 有4’位羟基：加入乙酸钠后，带I红移40~65nm强度下降
      • 有7位羟基：加入乙酸钠后，带II红移 5~20nm
    • 乙酸钠/硼酸
      • B环有邻二酚羟基，带Ⅰ红移12-30nm
      • A环有邻二酚羟基，带Ⅱ红移5-10nm（ 5、6- 二OH除外）
    • 三氯化铝/盐酸
      • AlCl3与3羟基、4羰基，5羟基、4羰基，邻二酚羟基成络，使吸收带红移，但与邻二酚-OH络合物不稳定，加盐酸可分解，使AlCl3 /HCl中的光谱较AlCl3中紫移
      • 比较AlCl3和AlCl3/HCl中的uv光谱，可判断有无邻二酚羟基
        • AlCl3和AlCl3/HCl中的uv光谱相同，无邻二酚羟基
        • 后者带Ⅰ紫移， B环有邻二OH
        • 后者带Ⅱ紫移， A环有邻二酚羟基
• ¹H-NMR谱
  • A环质子
    • 5,7-二羟基黄酮类化合物
      • H-6 （δ 5.7~6.9，1H，d，J = 2.5 Hz）
      • H-8 （δ 5.7~6.9，1H，d，J = 2.5 Hz）
      • H-6较H-8处在高场
    • 7-羟基黄酮
      • H-5（δ 8.0，1H，d，J = 8.0 Hz）
      • H-6（δ 6.7~7.1，1H，dd，J1 = 8.0 Hz，J2 = 2.0 Hz）
      • H-8（δ 6.7~7.1，1H，d，J = 2.0 Hz）
      • H-6，H-8化学位移可能颠倒，可能重合
  • B环质子
    • 4’-氧取代
      • 2’-H，6’-H：（7~8,2H，J = 8.0Hz）
      • 3’-H，5’-H：（6.5~7,2H，J = 8.0Hz）
    • 3’,4’-二氧取代
      • 5’-H：（δ 6.70-7.10，1H，d，J=8.0Hz）
      • 2’-H:（δ 7.2-7.9，1H，d，J=2.0Hz）
      • 6’-H:（δ 7.2-7.9，1H，dd，J=8.0Hz，J=2.0Hz）
      • 甲氧基在3’位，2’-H的化学位移大于6’-H，其余情况小于6’-H
    • 3’,4’,5’-三氧取代
      • 2’-H，6’-H化学环境相同：（6.5~7.5，2H，s）
      • 2’-H，6’-H化学环境不同：分别呈现两个双峰（间位耦合）
  • C环质子
    • 黄酮和黄酮醇类
      • 黄酮类H-3常以一个尖锐的单峰出现在δ 6.30处
        • 它可能会与5，6，7-或5，7，8-三氧取代黄酮中的H-8或H-6信号相混淆，应注意区别
      • 黄酮醇类的3位有含氧取代基，故在1H-NMR 谱上无c环质子。
    • 异黄酮类
      • H-2： δ 7.60~7.80
      • H-2：δ8.5~8.7 （DMSO-d6）
    • 二氢黄酮类
      • H-2因受两个不等价的H-3偶合，故被分裂成一个双二重峰(Jtrans=11.0Hz，Jcis=5.0Hz)，中心位于约5.2
      • 两个H-3各因偕偶(J=17.0Hz)和与H-2的邻偶也各被分裂成一个双二重峰(Jtrans=11.0Hz，Jcis=5.0Hz)，中心位于2.80处，但往往相互重叠
    • 二氢黄酮醇类
      • H-2和H-3为反式二直立键，故分别以二重峰出现(Jaa=11.0Hz）
        • H-2位于4.80~5.00处
        • H-3位于4.10-4.30处
      • 当3-OH成苷后，则使H-2和H-3信号均向低场方向位移
        • H-2位于5.0~5.60
        • H-3位于4.30-4.60间
    • 查尔酮类
      • α-H
        • δ 6.7~7.4 （d）， J≈ 17Hz
      • β-H
        • δ 7.3~7.7 （d）， J≈ 17Hz
    • 橙酮类
      • c环的环外质子=CH常以单峰出现在6.50-6.70处
  • 糖基质子
    • 糖端基质子
      • δ 4.5~6.0
      • 端基以外的糖上质子： δ3.0~4.0 ；
      • 鼠李糖 C5-H(CH3) ：δ0.8~1.2 , d, J=6.5Hz
    • 甲氧基：连在芳香环上 , δ3.5~4.1, (3H, s)
    • 亚甲二氧基： (-OCH 2O-) δ5.9 (2H, s)
    • 甲基：异黄酮 C6-CH3 δ2.04~2.27,C 8-CH3 δ2.12~2.45,C 6-CH3<C8-CH3 相差 0.2.
    • 羟基：溶剂一般采用 DMSO-d6( 无水 ),Acetone- d6 也可 , 观测 OH位移。5-OH δ12.40;7-OH δ 10.9;3-OH δ9.7;4'-OH δ>10.( 这些信号加 D2O后消失 )
• ¹³C-NMR谱
  • 黄酮类化合物骨架类型的判断
    • • 注意：表中碳谱没有经全氢去偶处理，所以碳上有质子会因碳-氢耦合产生裂分
  • 黄酮类化合物取代图式的确定
    • 无取代基的黄酮的13C—NMR信号
    • 取代基对化学位移的影响
      • 黄酮类化合物，特别是B环上引入取代基(x)时，其取代基的位移效应与简单苯衍生物的取代影响基本一致
      • 羟基及甲氧基的引入可使同碳原子（α-碳)信号大幅度移向低场，邻位碳(β-碳)及对位碳则向高场位移。间位碳虽然也向低场位移，但幅度较小
      • 当A环或B环上引入取代基时，位移影响通常只限于引入了取代基的A环或B环。如果一个环上同时引入几个取代基时，其位移影响符合某种程度的加和性
      • •当黄酮类母核上引入5-OH时，不但影响A环，而且由于5-OH与羰基形成氢键缔合，使C4信号和C2信号分别向低场位移+4.5和+0.87，而C3信号则向高场位移-1.99。如果5-OH被甲基化或苷化，氢键缔合被破坏，上述信号则分别向相反方向位移
    • 5，7-二羟基黄酮中的C6及C8信号特征
      • 多数5，7-二羟基黄酮类化合物C6及C8 信号一般出现在90-100范围内，C6或C8有无烃基或芳香基取代可以通过观察C6及C8 信号是否发生位移而判定
    • 苷化位移
      • 糖的苷化位移 ( 端基碳 )
        • 酚苷中，糖端基碳苷化位移为 +4~+6ppm，取决于酚羟基周围环境
      • 苷元的苷化位移
        • 苷元糖苷化后， ipso- 碳原子 ( α- 碳 ) 向高场位移 , 其邻位及对位碳原子向低场位移，且对位碳原子的位移幅度最大又比较稳定
      • 糖上羟基
        • 苷化后，使该 OH所在碳原子产生较大的低场位移 (+6~+10)
• MS谱
  • 电子轰击质谱（ EI-MS）
    • 苷元：可得到 [M] + ， 且为基峰
    • 苷 : 得不到 [M] + . ，可得到苷元的碎片。制备衍生物（如全甲基化），测 EI-MS，可看到 [M] + . ，但强度较弱
  • 场解析质谱（ FD-MS）和快原子轰击质谱（ FAB-MS）：用于测定极性较强的苷类化合物，可得 [M] + ， [M+1] + ， [M +Na] + ， [ M +K] + 峰。峰强度大，且给出糖基碎片
  • 黄酮类化合物苷元的 EI-MS 裂解途径
    • • 黄酮类主要以途径 -I 为主； 黄酮醇类主要以途径 -II 为主