导图社区 细菌感染性疾病的分子生物学
临床分子生物学检验技术之细菌感染性疾病的分子生物学笔记，包括细菌感染的广谱分子生物学检测和结核分枝杆菌（TB）的分子生物学检验两部分内容。
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第14章DNA的生物合成读书笔记
细菌感染性疾病的分子生物学
细菌感染性疾病的分子生物学检验
细菌感染的广谱分子生物学检测
16SrRNA基因序列分析鉴定细菌
细菌16SrRNA基因结构特征
原核生物核酸体小亚基rRNA。长度约1500bp（10个可变区和11个保守区）
鉴定细菌原理：被称为
“分子化石”
多拷贝，较高灵敏度
多信息：由可变区和保守区组成
长度适中：1500bp可反应菌属的差异，又能利用测序得到其序列
16SrRNA基因与23SrRNA之间的序列，具有高度变异及相对保守型
存在问题
严格控制污染
标本前处理是鉴定临床标本中病原微生物16SrRNA基因的最主要技术难点
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
（MALDI-TOF-MS）技术鉴定细菌
鉴定原理
受管家基因调控且丰度较高的特异性保守蛋白——核糖体蛋白（主要标志物）
MALDI-TOF-MS鉴定细菌主要依据
MALDI质谱图中一个质谱峰代表一种蛋白质
不同种类微生物的蛋白质质谱谱峰（质荷比及丰度）在可检测质量范围内存在差异
某些质谱峰具有可识别的属、种特异性，甚至存在亚种或血清型差异
在相同的培养条件下及操作条件下，标志物具有良好的重现性
蛋白质量指纹图谱
多依据分子量在2000-20000的全蛋白质质谱图
难以识别微生物混合物；灵敏度还不足以对样本进行直接检测；不能进行耐药性、细菌毒力及药敏的检测；需不断完善数据库，提高鉴定重现性
结核分枝杆菌（TB）的分子生物学检验
基因组结构
是环状双链DNA，基因全长4.4Mb，包含4000个蛋白质编码基因和50个RNA编码基因，G+C含量高达65.6%
分子生物学检验
检测方法
定量PCR：实时荧光定量PCR技术是最常用的TB分子检测方法
链替代扩增技术（SDA）：一种基于酶促反应的DNA体外等温扩增技术，以IS6110和16sRNA基因为扩增靶点
线性探针杂交法
焦磷酸测序
基因芯片：高通量
Xpert全自动结核杆菌检测技术：目前最先进的一种检测TB及其耐药性的方法
RT-PCR检测TB活菌
耐药基因检测
多重耐药结核杆菌（MDRTB）
严重耐药结核（XDR-TB）
耐药机制
异烟肼：KatG
利福平：rpoB
氨基糖苷类：rpsL
吡嗪酰胺：pncA
乙胺丁醇：embB
氟喹诺酮：DNA旋转基因
分子生物学检验的临床意义
克服难培养、涂片阳性率低
能和TB与其他分枝杆菌区分
快速筛查结核分枝杆菌耐药突变及制定相应的治疗方案
评价抗结核药物疗效
培养法是诊断的金标准
